1、2021/3/29 星期一1目目录录检定检定工艺工艺流程流程材料材料简介简介2021/3/29 星期一2 什么是狂犬病狂犬病是一种由狂犬病毒狂犬病毒引起的人兽共患急性传染病，潜伏期可以从几天长至数年，患者表现出特有的怕水症状(因此又称“恐水症”)。病死率病死率高达高达100%。全球有100多个国家和地区有狂犬病发生，但主要分布在亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家，其中98在亚洲，而中国的发病数中国的发病数仅次于印度，居世界第二位，流行严重居世界第二位，流行严重。简介2021/3/29 星期一32021/3/29 星期一4材料VeroVero细胞细胞 微载体微载体 Phamacia Cytodex
2、1培养基培养基Vero细胞培养使用细胞培养使用MEM培养基培养基(Gibco),加入加入10%新生牛血新生牛血清清;病毒培养液为病毒培养液为M199(Gibco),加入加入1%人血白蛋白人血白蛋白,100U/ml双抗双抗病毒种子病毒种子aG株株实验动物实验动物鼠。鼠龄鼠。鼠龄21d,体质量体质量1113g。生物反应器生物反应器7L搅拌生物反应器，工作体积为搅拌生物反应器，工作体积为5L2021/3/29 星期一5发酵罐细胞培养温度温度37,pH7.2,溶氧溶氧50%空气饱和度空气饱和度,搅拌速度搅拌速度50r/min发酵罐病毒培养温度温度35,pH7.4,溶氧溶氧20%空气饱和度空气饱和度,
3、搅拌速度搅拌速度50r/min。病毒滴定含含2%牛血清的蒸馏水作牛血清的蒸馏水作10倍比稀释。分别接种倍比稀释。分别接种6只只小鼠小鼠,每只脑内接种每只脑内接种0.03ml灭活浓度为浓度为1 4000-丙内脂溶液灭活丙内脂溶液灭活,于于4连续搅拌连续搅拌24h。将灭活后的疫苗加入适当的将灭活后的疫苗加入适当的Al(OH)3佐剂制备成试验疫苗。佐剂制备成试验疫苗。工艺流工艺流程程2021/3/29 星期一6纯化灭活后的液体采用柱色谱或其他适宜的方法纯化，纯化灭活后的液体采用柱色谱或其他适宜的方法纯化，纯化后可加入适量人血白蛋白或其它适宜的稳定剂即为原液后可加入适量人血白蛋白或其它适宜的稳定剂即为
4、原液半成品配制配制用疫苗稀释液将原液按同一蛋白质含量及抗原量进行配制，用疫苗稀释液将原液按同一蛋白质含量及抗原量进行配制，配置后总蛋白质含量应不高于配置后总蛋白质含量应不高于80ug/剂，可加入适量硫柳汞作为剂，可加入适量硫柳汞作为防腐剂，即成半成品防腐剂，即成半成品成品规格规格每瓶每瓶1.0ml每一次人用剂量为每一次人用剂量为1.0ml狂犬病疫苗狂犬病疫苗效价应不低于效价应不低于2.5IU保存、运输及有效期于于28度避光保存和运输。自生产之日起，按批准的执行度避光保存和运输。自生产之日起，按批准的执行2021/3/29 星期一7检定检定1.单次病毒收获液单次病毒收获液病毒滴定 应不低于6.0
5、LgLD50/ml2.成品检定成品检定鉴别试验 采用酶联免疫法(ELISA法)检查，应证明含有狂犬病病毒抗原外观应为澄明液体无异物3.化学检定化学检定PH值 应为7.28.0效价测定 应不低于2.5IU/剂细胞内毒素检查 应不高于50EU/剂牛血清蛋白残留量 应不高于50ng/剂VERO细胞DNA残留量 应不高于100pg/剂VERO细胞宿主蛋白残留量测定 采用酶联免疫法测定，应不高于4ug/ml,并不得超过总蛋白质含量的5%2021/3/29 星期一82021/3/29 星期一9问题：问题：1.为什么要使残余为什么要使残余-丙内脂水解丙内脂水解？（师）（师）2.为什么疫苗需要防腐剂？为什么疫苗需要防腐剂？3.纯化的方式有哪些？纯化的方式有哪些？4.ELISA可用于测定抗原，是否也可用于可用于测定抗原，是否也可用于测定抗体？（其中需要什么试剂和用什么测定抗体？（其中需要什么试剂和用什么方法）方法）2021/3/29 星期一10
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