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安徽省大口黑鲈人工提早繁殖技术研究及其胚胎发育观察

余鹏等

Summary 于2014年在安徽省青阳县进行了大口黑鲈人工提早繁殖的研究，并对其胚胎发育整个过程进行观察和记录，结果表明：2012年12月，将1龄的大口黑鲈从广东省运至安徽省青阳县，专塘培养至2013年12月，转至温室大棚培育至翌年4月初，成熟率达80%；性腺成熟的亲鱼经催产，平均产卵率达78%，受精率达85%，孵化率达68%。大口黑鲈胚胎发育从受精卵到孵化出膜可分为20个时期，在水温18.6～20.6 ℃条件下，胚胎发育共历时58 h 20 min，发育总积温为1 207.50 h·℃。
Key 大口黑鲈；人工提早繁殖；胚胎发育；观察；安徽省
S917 A 1007-5739（2015）01-0272-02
大口黑鲈（Micropterus salmoides）也称加州鲈，属鲈形目、太阳鱼科、鲈鱼属，原产于美国加利福尼亚州[1]。我国台湾省于20世纪70年代引进，并于1983年人工繁殖获得成功[2]，同年大口黑鲈进入广东省，随后逐渐向江苏、山东、浙江、安徽和湖北等地引进。经过30余年的发展，大口黑鲈己成为国内重要的淡水养殖品种之一[3]，具有广阔的市场前景[4]。目前，对大口黑鲈的疾病预防[5]、饲料营养需求[6]、微卫星[7]及遗传多样性[8]等方面有很多研究
青阳县（皖江特种养殖有限公司）有安徽省最大的大口黑鲈养殖基地，养殖水面313.33 hm2，年产量约3 500 t，产值近1亿元。目前，安徽省大口黑鲈的苗种一直依赖从广东购进，没有开展人工繁殖，从而抑制了安徽地区大口黑鲈养殖业的发展。因此，为突破早繁的瓶颈，从广东省引进大口黑鲈亲本，在安徽省进行强化培育，建立温室大棚，提早繁殖，采用人工催产、自然受精孵化、卤虫开口等技术措施，初步取得成功。
1 材料与方法
1.1 亲鱼培育与选择
2012年12月从广东省购买当年大口黑鲈商品鱼，在安徽省养殖基地池塘内培育至2013年12月，然后转入透光温室大棚内，雌雄分池培育，池中放养花白鲢饵料鱼，并适当投喂冰鲜鱼。
2014年3月底至4月初，挑选肥满度好、个体大、体型佳、体色鲜亮、无伤病的的成熟亲本进行人工催产。繁殖季节成熟的雌鱼体形较粗短，体色较淡，鳃盖部光滑，胸鳍呈圆形，腹部膨大，卵巢轮廓明显，腹部柔软，生殖孔稍凸，产卵期呈红润状，上有2个孔，前、后分别为输卵管和输尿管开口；雄鱼较狭长，体色较深，鳃盖部略粗糙，胸鳍较狭长，雄鱼生殖孔凹陷，只有1个孔，轻压腹部有乳白色精液流出，且精液入水即散开为好。
1.2 催产与受精
采用一针注射法，用激素LRH-A2、HCG和DOM 3种激素组合对大口黑鲈胸鳍基部进行注射。注射剂量：1 kg雌鱼注射5 mg DOM+5 μg LRH-A2+1 500 IU HCG，雄鱼剂量减半。LRH-A2、HCG和DOM均由宁波市三生有限公司生产。亲鱼注射后，放入池塘中，在池边水深30 cm左右处安放沸水浸泡过的柳树根和棕榈片制作的鱼巢。
1.3 孵化
将受精卵连同柳树根、棕榈一起带水移至直径为3 m、水深0.6 m的孵化池内，流水充氧孵化。每天在鱼巢周边泼洒亚甲基蓝防治水霉。
1.4 观察与取样
亲鱼发情时，会在水面游动，溅起水花；亲鱼尾鳍露出水面并不断摆动，身体倾斜，头部朝下，此时守候在池边，定时查看各柳树根和棕榈上有无受精卵。发现受精卵后，立即取部分卵于培养皿中，并在显微镜底下连续观察。观察时，用显微镜自带软件Motic Plus 2.0和佳能1 600万像素数码相机通过目镜进行拍照。以样本中60%胚胎发育到某个时期的时间作为该时期的发育时间。
2 结果与分析
2.1 人工繁殖情况
在青阳县共催产3次，催产时亲鱼平均成熟率达80%，平均产卵率达78%，平均受精率85%，平均孵化率68%。第1批繁殖获得鱼苗50万尾，第2批获得鱼苗190万尾，第3批出苗65万尾。3次催产的具体效果见表1。
2.2 胚胎发育观察
2.2.1 胚胎发育时序。大口黑鲈胚胎发育整个过程可划分为25个时期，在水温为18.6～20.6 ℃条件下，历时约58 h 20 min，胚胎发育总积温为1 207.50 h·℃。从受精卵到出膜各个发育时期的时序及特征见表2。
2.2.2 胚胎发育过程中的外部形态特征。受精卵胚盘形成期：受精卵大口黑鲈受精卵呈圆球形，为淡黄色、半透明黏性卵，内有橙黄色油球1个。卵径1.1～1.3 mm，吸水后1.2～1.5 mm。受精时，卵子由于精子的进入而激活，此时，原生质向动物极集中，受精40 min左右时，原生质形成丘状隆起，即为胚盘（图1a）。
卵裂期：受精后1 h，胚盘第1次分裂成大小相等的2个细胞，此为2细胞期（图1b）；第2次分裂，与第1次垂直分裂成大小相等的4个细胞，此为4细胞期（图1c）；第3次分裂成2行4列，为8细胞期（图1d）；第4次分裂成4行4列，为16细胞期（图1e）；第5次分裂成32细胞期（图1f），后分裂细胞越来越小，距受精4 h 30 min，细胞团隆起呈桑葚状，形成桑椹胚（图1g）。
囊胚期：受精5 h 10 min时，细胞界限模糊不清，在卵黄上方形成高的隆起，胚胎进入囊胚早期阶段（图1h）；接着细胞界限消失，囊胚高度降低，进入囊胚中期（图1i）；囊胚表面形似弯月向卵黄部分下包，此为囊胚晚期（图1j）。
原肠胚期：受精13 h时，胚层下包约1/2时，出现胚环，此为原肠早期（图1k）；胚层继续下包超过1/2时，出现胚盾，此为原肠中期（图1l）；胚层下包至3/4时，进入原肠晚期（图1m）。
神经胚期：受精21 h 50 min，胚层下包约4/5时，神经板形成胚体侧卧，进入神经胚期阶段（图1n）。神经胚期外观上只能观察到胚体不断伸长，实质上，胚体内部神经外胚层逐渐形成神经管，神经管后分化为脑及脊髓的原基，再进一步分化形成各种神经器官原基。
胚孔封闭期：受精22 h 10 min后，胚层完全包围卵黄囊，胚孔关闭，神经板中线略下凹，为胚孔封闭期（图1o）。
器官形成期：受精27 h 30 min后，在胚体中部出现2对体节，神经板头端隆起，进入体节出现期（图1p）；后在前脑两侧，出现1对肾形的突起，即眼原基，此时为基眼期。1 h后，胚体前段两侧出现长椭圆形的眼囊，脑分为原始的前、中、后3个部分。受精34 h 30 min后，随着尾部的不断延伸，尾部呈圆形，眼睛开始变圆，为尾芽期。受精36 h 30 min，在眼杯口出现圆形的晶体，脑部分化明显，为晶体出现期。随后，胚胎开始出现微弱的肌肉收缩，第四脑室出现，晶体很清楚，为肌肉效应期。受精41 h 30 min后，在眼后下方出现椭圆形的围心腔，腔内有数个串状细胞，为心脏原基，此时期为心脏出现期。后心脏逐渐变成管状，分为心房、心室，开始做轻微的搏动，不规律，时快时慢，稍后心跳开始加快，进入心跳期（图1q）。
出膜期：受精58 h 20 min后，胚胎利用尾部的摆动，头部冲破卵膜，开始出膜（图1r），出膜时仔鱼全长4.5 mm。
3 讨论
3.1 大口黑鲈适应性广
大口黑鲈耐低氧能力强[9]，在拉网过程中，皮肤及鳍条均未出现类似花白鲢在捕捞过程中出现的充血现象，且整个催产过程应激反应小，表现出很强的适应能力。
3.2 安徽地区早繁要点
安徽地区较大口黑鲈主产区的广东省温度低，为提高竞争能力需要开展早繁，试验中，亲鱼培育池上建有塑料保温透光大棚，配备微孔增氧机[10]，解决了溶氧问题。大口黑鲈在水温10 ℃以上开始摄食，但考虑到部分时段白天温度接近10 ℃，因此12月在亲鱼放入塑料大棚前，向大棚内投放充足的花白鲢饵料鱼，以供亲鱼摄食；当水温达到10 ℃以上时，开始投喂冰鲜鱼，并向冰鲜鱼中加入适量VC，以提高亲鱼体质[11]。人工催产前，将雌雄鱼分开培育14 d以上[12]。采用LRH-A2、HCG和DOM 3种激素混合催产效果良好。早期孵化时水温较低，容易感染水霉，需使用亚甲基蓝或食盐水进行预防处理[13-14]。
3.3 胚胎发育观察
经观察，大口黑鲈受精卵为半透明黏性卵，这与刘文生等[15]的研究一致，这种受精卵在胚胎发育过程中，难以用相机记录全部时期的特点，也许可以尝试用胰蛋白酶将受精卵细胞膜去除，以便更清楚地观察。
4 Reference
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[2] 蔡磊，白俊杰.大口黑鲈北方亚种与佛罗里达亚种杂交[D].上海：上海海洋大学，2012.

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[15] 刘文生，林焯坤，彭锐民.加州鲈鱼胚胎及幼鱼发育的研究[J].华南农业大学学报，1995，16（2）：5-11.

-全文完-