动物组织DNA的提取.ppt

Total DNA extraction from eukaryotic tissue讲解人：蔡婷芳.实验目的实验目的n n了解动物DNA的成分n n掌握DNA提取的原理和操作过程.DNA提取原则提取原则n n保证DNA结构的完整性n n纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质n n排除有机溶剂和金属离子的污染n n蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度n n排除其他核酸分子的污染.实验试剂和仪器实验试剂和仪器n n0.14 mol/L NaCl 1mol/L NaCl溶液n n0.015 mol/L柠檬酸钠溶液n n氯仿-异戊醇n n95%乙醇n n仪器：电子天平 玻璃棒 离心管 离心机 吸量管 试管 研钵.实验原理实验原理n n动动物物组组织织细细胞胞中中的的核核糖糖核核酸酸(RNA)与与脱脱氧氧核核糖糖核核酸酸(DNA)大大部部分分与与蛋蛋白白质质结结合合形形成成核核蛋蛋白白。RNA核核蛋蛋白白和和DNA核核蛋蛋白白在在不不同同浓浓度度氯氯化化钠钠溶溶液液中中的的溶溶解解度度有有显显著著区区别别。DNA核核蛋蛋白白在在0.14 mol/L 氯氯化化钠钠中中溶溶解解度度低低，但但在在 1 2 mol/L氯氯化化钠钠中中溶溶解解度度高高；RNA核核蛋蛋白白在在0.14 mol/L氯氯化化钠钠中中仍仍有有相相当当大大的的溶溶解解度度。所所以以调调节节氯氯化化钠钠浓浓度度，可可使使RNA核核蛋蛋白白和和DNA核蛋白分步提取。核蛋白分步提取。.n n氯氯氯氯仿仿仿仿-异异异异戊戊戊戊醇醇醇醇溶溶溶溶液液液液可可可可以以以以使使使使核核核核蛋蛋蛋蛋白白白白变变变变性性性性沉沉沉沉淀淀淀淀，将将将将核核核核酸酸酸酸物物物物质质质质萃萃萃萃取取取取出出出出来来来来；再再再再向向向向萃萃萃萃取取取取液液液液中中中中加加加加入入入入适适适适量量量量乙乙乙乙醇醇醇醇，可可可可使使使使DNADNA析出。析出。析出。析出。n n氯氯氯氯仿仿仿仿异异异异戊戊戊戊醇醇醇醇抽抽抽抽提提提提和和和和乙乙乙乙醇醇醇醇沉沉沉沉淀淀淀淀方方方方法法法法在在在在DNADNA纯纯纯纯化化化化研研研研究究究究中中中中非非非非常常常常常常常常用用用用，氯氯氯氯仿仿仿仿-异异异异戊戊戊戊醇醇醇醇抽抽抽抽提提提提的的的的原原原原理理理理是是是是，氯氯氯氯仿仿仿仿可可可可使使使使蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质变变变变性性性性并并并并加加加加速速速速有有有有机机机机相相相相与与与与液液液液相相相相分分分分层层层层；异异异异戊戊戊戊醇醇醇醇有有有有助助助助于于于于消消消消除除除除抽抽抽抽提提提提过过过过程程程程中中中中产产产产生生生生的的的的气气气气泡泡泡泡。而而而而DNADNA不不不不溶溶溶溶于于于于乙乙乙乙醇醇醇醇等等等等有有有有机机机机溶溶溶溶剂剂剂剂，因因因因此此此此可可可可以以以以通通通通过过过过乙乙乙乙醇醇醇醇沉沉沉沉淀淀淀淀来来来来纯纯纯纯化和浓缩化和浓缩化和浓缩化和浓缩DNADNA。.所以动物细胞中DNA提取一般有以下几步:n n首先是机械法破细胞抽提；n n然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；n n最后纯化出。.实验步骤实验步骤1.1.取新鲜兔子肝组织取新鲜兔子肝组织取新鲜兔子肝组织取新鲜兔子肝组织3 g3 g，加入，加入，加入，加入0.14 mol/L 0.14 mol/L NaClNaCl，0.015 mol/L0.015 mol/L柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液6 6 mLmL，在研钵中加入，在研钵中加入，在研钵中加入，在研钵中加入少量石英砂仔细研磨成匀浆；少量石英砂仔细研磨成匀浆；少量石英砂仔细研磨成匀浆；少量石英砂仔细研磨成匀浆；2.2.将匀浆倒入离心管，将匀浆倒入离心管，将匀浆倒入离心管，将匀浆倒入离心管，4000 rpm4000 rpm，15 min15 min，弃上，弃上，弃上，弃上清；清；清；清；3.3.沉淀中加入沉淀中加入沉淀中加入沉淀中加入15 15 mLmL 1mol/L 1mol/L NaClNaCl，混匀，搅拌数，混匀，搅拌数，混匀，搅拌数，混匀，搅拌数分钟，分钟，分钟，分钟，4000 rpm4000 rpm，15 min15 min，弃沉淀；，弃沉淀；，弃沉淀；，弃沉淀；4.4.上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿-异异异异戊醇，剧烈振摇戊醇，剧烈振摇戊醇，剧烈振摇戊醇，剧烈振摇10 min10 min，再，再，再，再 4000 rpm4000 rpm，10 min10 min；5.5.取上层，转移至另一离心管，加入等体积取上层，转移至另一离心管，加入等体积取上层，转移至另一离心管，加入等体积取上层，转移至另一离心管，加入等体积95%95%乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕取出沉淀，即为取出沉淀，即为取出沉淀，即为取出沉淀，即为DNADNA。.n n结果分析与讨论 记录DNA提取过程中的现象，结合原理进行分析.感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！