细胞质基质与内膜系统(1).ppt

翟中和 王喜忠 丁明孝 主编 细胞生物学（第细胞生物学（第4版）版）第第7章章 细胞质基质与内膜系统细胞质基质与内膜系统本章主要内容本章主要内容细胞质基质及其功能细胞内膜系统及其功能内质网高尔基体溶酶体过氧化物酶体功能在结构、功能乃至发生上是彼此相关的由单层膜包绕形成的动态细胞器，包括内质网、高尔基体、溶酶体、胞内体和分泌泡等。细细胞胞质质基基质质与与内内膜膜系系统统细胞质基质内膜系统基本概念过氧化物酶体高尔基体在真核细胞中除去由生物膜形成的细胞器外的剩余空间糙面内质网：蛋白质合成，糖基化，二硫键形成与重排，折叠 与组装修饰，应激反应光面内质网：膜脂合成，解毒作用，类固醇合成，钙离子储存形态结构 极性:体现在形态、膜囊内的化学组成及功能不一样动物细胞中：解毒；参与脂肪酸氧化植物细胞中:光呼吸作用功能又称微体；异质性细胞器常含氧化酶和过氧化氢酶蛋白由细胞核基因编码，两种发生途径溶酶体溶酶体酶的合成（信号肽）溶酶体酶的加工（信号斑）：形成M6P溶酶体酶的分选：依赖或不依赖于M6P 细胞分泌活动；蛋白质糖基化及其修饰 蛋白质水解和其他加工过程细胞内消化作用以及预防等异质性：初级、次级溶酶体和残质体标志酶：酸性水解酶；最适pH为5.0左右富含质子泵、载体蛋白和高度糖基化含义功能与细胞中间代谢相关；与细胞质骨架相关与蛋白质合成、修饰、折叠和选择性降解等相关其他由膜所包被的细胞器内质网功能特征发生相关疾病特征发生真核细胞内区室化真核细胞内区室化细细 胞胞 组组 分分 数数 目目 体体 积积 比比细胞质基质细胞质基质细胞核细胞核内质网内质网高尔基体高尔基体溶酶体溶酶体胞内体胞内体过氧化物酶体过氧化物酶体线粒体线粒体 1 1 1 1 1 1 1 1 300 300 200 200 400 400 1700 1700 54 54 6 6 12 12 3 3 1 1 1 1 1 1 22 22肝细胞中细胞质基质及细胞其它组分的数目及所占的体积比肝细胞中细胞质基质及细胞其它组分的数目及所占的体积比 （引自（引自Albert.1998Albert.1998）第一节第一节 细胞质基质及其功能细胞质基质及其功能1 1、经典细胞学、经典细胞学:电镜下，在真核细胞的细胞质中，除去可分电镜下，在真核细胞的细胞质中，除去可分辨的细胞器及其亚微结构以外的细胞质部分称为辨的细胞器及其亚微结构以外的细胞质部分称为细胞质基质细胞质基质.2 2、生物化学、生物化学:用差速离心的方法分级离心细胞匀浆物中的各用差速离心的方法分级离心细胞匀浆物中的各种细胞组分，先后除去细胞核、线粒体、溶酶体、高尔基体种细胞组分，先后除去细胞核、线粒体、溶酶体、高尔基体和细胞膜等细胞器或细胞结构后，存留在上清液中的部分称和细胞膜等细胞器或细胞结构后，存留在上清液中的部分称为为胞质溶胶胞质溶胶.3 3、学术争议学术争议:有人认为细胞骨架不属于细胞质基质的范畴，有人认为细胞骨架不属于细胞质基质的范畴，是细胞器，也有人认为细胞骨架是细胞质基质的主要结构体是细胞器，也有人认为细胞骨架是细胞质基质的主要结构体系，是其他成分锚定的骨架，同时它们经常处于装配和解聚系，是其他成分锚定的骨架，同时它们经常处于装配和解聚的动态平衡中，其解聚的亚单位仍保持在液相中的动态平衡中，其解聚的亚单位仍保持在液相中.一、细胞质基质的含义细胞质基质很可能是一种高度一种高度有序的体系有序的体系关键在于细胞质骨架纤维贯穿其中，起重要的组织作用 主要特点：细胞质基质是一个主要特点：细胞质基质是一个高度有序的体系；通过弱键而高度有序的体系；通过弱键而相互作用处于动态平衡的结构相互作用处于动态平衡的结构体系体系 主要成分：中间代谢有关的数主要成分：中间代谢有关的数千种酶类、细胞质骨架结构。千种酶类、细胞质骨架结构。大分子类：蛋白质、脂蛋白、大分子类：蛋白质、脂蛋白、RNARNA、多糖等。、多糖等。细胞质基质是细胞真正的内环境，其组成成分复杂。主要含有与中间代谢有关的数千种酶类，依分子大小大致划分为下列几种。小分子和各种离子：如水小分子和各种离子：如水 K+K+、Cl-Cl-、Na+Na+、Mg+Mg+、Ca+Ca+等。等。中分子类：脂类、糖类、氨基酸、核苷酸类等。中分子类：脂类、糖类、氨基酸、核苷酸类等。故认为它呈复杂的胶体性质，可随环境条件的改变由溶胶变为凝胶状态或者相反，这成为某些细胞运动方式的动力。大分子拥挤大分子拥挤(Macromolecular crowding)The crowded state of the cytoplasm in(a)eukaryotic and(b)E.coli cells二、细胞质基质的功能完成各种中间代谢过程 如糖酵解过程、磷酸戊糖途径、糖醛酸途径等为某些蛋白质合成和脂肪酸合成提供场所与细胞质骨架相关的功能维持细胞形态、细胞运动、胞内物质运输及能量传递；细胞质基质结构体系的组织者与细胞膜相关的功能细胞质基质产生区室化；依靠细胞膜或细胞器膜上的泵蛋白和离子通道维持细胞 内外跨膜的离子梯度蛋白质的修饰、蛋白质选择性的降解蛋白质的修饰、蛋白质选择性的降解1.蛋白质的修饰蛋白质的修饰辅酶或辅基与酶的共价结合磷酸化与去磷酸化蛋白质糖基化作用甲基化修饰酰基化2.控制蛋白质的寿命控制蛋白质的寿命N 端第一个氨基酸残基是决定蛋白质寿命的信号泛素化和蛋白酶体所介导的蛋白质降解途径（ubiquitin-and proteasome-mediated pathway）2004 年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖发现泛素调节的蛋白质降解3.降解变性和错误折叠的蛋白质降解变性和错误折叠的蛋白质细胞质基质中的变性蛋白质、错误折叠的蛋白质、含有被氧化或其他非正常修饰氨基酸的蛋白质，不管其 N 端氨基酸残基是否稳定，常常很快被降解清除4.帮助变性或错误折叠的蛋白质重新折叠帮助变性或错误折叠的蛋白质重新折叠热休克蛋白（热休克蛋白（heat shock protein，HSP）：一类进化上高度保守的蛋 白质家族，作为分子伴侣（分子伴侣（molecular chaperone）发挥多种作用，协助细胞内蛋白质合成、分选、折叠与装配等分子伴侣（分子伴侣（molecular chaperone）：）：存在于细胞质基质或细胞器中，可以识别存在于细胞质基质或细胞器中，可以识别正在合成或部分折叠的多肽，并与之某些部位结合，协助其转运、正确折叠或正在合成或部分折叠的多肽，并与之某些部位结合，协助其转运、正确折叠或装配的一类蛋白质，但其本身不参与终产物的形成。装配的一类蛋白质，但其本身不参与终产物的形成。热休克蛋白(heat shock protein，Hsp)DNADNA序序列列分分析析表表明明热热休休克克蛋蛋白白有有3 3个个主主要要家家族族即即25kD25kD，70kD70kD和和90kD90kD的的蛋蛋白白，每每一一家家族族中中都都有有由由不不同同基基因因编编码码的的数数种种蛋蛋白白。有有的的基基因因在在正正常常条条件件下下表表达达，而而有有些些则则在在温温度度增增高高或或其其它它异异常常情情况况下下大大量量表表达达，以以保保护护细细胞胞，减减少少异异常常环环境境的的损损伤伤。已已有有证证据据表表明明在在正正常常的的细细胞胞中中，90kD90kD和和70kD70kD，特特别别是是70kD70kD的的热热休休克克蛋蛋白白选选择择性性的的与与畸畸形形的的蛋蛋白白质质及及其其形形成成的的聚聚合合物物结结合合，利利用用水水解解ATPATP释释放放的的能能量量使使聚聚集集的的蛋蛋白白质质溶溶解解并并进进一一步步折折叠叠成成具具有有正正确确构象的蛋白质构象的蛋白质。第二节第二节 细胞内膜系统及其功能细胞内膜系统及其功能真核细胞膜结合区室的主要功能真核细胞膜结合区室的主要功能细胞器细胞器(区室区室)主要功能主要功能胞质溶胶胞质溶胶代谢的主要场所；蛋白质合成部位代谢的主要场所；蛋白质合成部位细胞核细胞核基因组存在场所，基因组存在场所，DNA和和RNA的合成地的合成地内质网内质网大多数脂的合成场所，蛋白质合成和集散大多数脂的合成场所，蛋白质合成和集散地地高尔基体高尔基体蛋白质和脂的修饰、分选和包装蛋白质和脂的修饰、分选和包装溶酶体溶酶体细胞内的降解作用细胞内的降解作用胞内体胞内体内吞物质的分选内吞物质的分选线粒体线粒体通过氧化磷酸化合成通过氧化磷酸化合成ATP叶绿体叶绿体进行光合作用进行光合作用过氧化物酶体过氧化物酶体毒性分子的氧化毒性分子的氧化内膜系统可能的进化过程内内膜膜系系统统内质网内质网(endoplasmic reticulum)高尔基复合体高尔基复合体(Golgi complex)溶酶体溶酶体(lysosomes)intracellular compartments:endosomes Nuclear-ERGolgiERlysosome细胞内的房室化细胞内的房室化 The Endomembrane System is Complex21细细细细胞胞胞胞的的的的内内内内膜膜膜膜系系系系统统统统（endomembrane endomembrane systemsystem）是是是是指指指指细细细细胞胞胞胞内内内内在在在在结结结结构构构构、功功功功能能能能及及及及发发发发生生生生上上上上相相相相关关关关的的的的由由由由膜膜膜膜包包包包绕绕绕绕形形形形成成成成的的的的细细细细胞胞胞胞器器器器或或或或细细细细胞胞胞胞结结结结构构构构，主主主主要要要要包包包包括括括括：内内内内质质质质网网网网、高高高高尔尔尔尔基基基基体体体体、溶溶溶溶酶酶酶酶体体体体、胞胞胞胞内内内内体体体体和和和和分分分分泌泌泌泌泡泡泡泡等等等等 。内膜系统使真核细胞内区域化（内膜系统使真核细胞内区域化（内膜系统使真核细胞内区域化（内膜系统使真核细胞内区域化（compartmentalizationcompartmentalization）意义：意义：意义：意义：内膜系统的出现是真核细胞区别于原核细胞的显著特内膜系统的出现是真核细胞区别于原核细胞的显著特内膜系统的出现是真核细胞区别于原核细胞的显著特内膜系统的出现是真核细胞区别于原核细胞的显著特点之一，其意义在于：大大增加了细胞内膜的表面积；为多种点之一，其意义在于：大大增加了细胞内膜的表面积；为多种点之一，其意义在于：大大增加了细胞内膜的表面积；为多种点之一，其意义在于：大大增加了细胞内膜的表面积；为多种酶特别是多酶体系提供了大面积的结合位点；酶系统的隔离与酶特别是多酶体系提供了大面积的结合位点；酶系统的隔离与酶特别是多酶体系提供了大面积的结合位点；酶系统的隔离与酶特别是多酶体系提供了大面积的结合位点；酶系统的隔离与连接；蛋白质、糖、脂肪的合成、加工和包装；运输分泌物；连接；蛋白质、糖、脂肪的合成、加工和包装；运输分泌物；连接；蛋白质、糖、脂肪的合成、加工和包装；运输分泌物；连接；蛋白质、糖、脂肪的合成、加工和包装；运输分泌物；扩散屏障及膜电位建立；离子梯度的维持等。扩散屏障及膜电位建立；离子梯度的维持等。扩散屏障及膜电位建立；离子梯度的维持等。扩散屏障及膜电位建立；离子梯度的维持等。质膜质膜 内膜内膜生物膜原核细胞原核细胞 质膜构成的单一区室质膜构成的单一区室真核细胞真核细胞 内膜内膜 各种细胞器各种细胞器内膜系统出现的意义：内膜系统出现的意义：各自独立，各司其职各自独立，各司其职 相互依存，协调同一相互依存，协调同一大大提高了细胞代谢反应的效率大大提高了细胞代谢反应的效率 1945年，年，K.R.Poter;电子显微镜电子显微镜;小鼠成纤维细胞小鼠成纤维细胞24一、内质网一、内质网 ER(endoplasmic reticulum)（一）内质网的形态结构（一）内质网的形态结构（二）内质网的化学组成（二）内质网的化学组成（三）（三）内质网的类型内质网的类型（四）内质网的主要功能（四）内质网的主要功能（五）内质网应激及其信号调控（五）内质网应激及其信号调控（六）内质网的病理性变化（六）内质网的病理性变化内质网内质网 ER(endoplasmic reticulum)核核膜膜外外层层（一）内质网的形态结构（一）内质网的形态结构内质网内质网 ER是由一层单位膜是由一层单位膜围成的形状大小不同的围成的形状大小不同的小管，小泡，扁囊状结小管，小泡，扁囊状结构，相互连接形成一个构，相互连接形成一个连续的网状膜系统。连续的网状膜系统。小管小管小泡小泡扁囊状扁囊状细胞膜细胞膜核膜核膜内内质质网网细细胞胞膜膜内质网的内腔相互连通。内质网的内腔相互连通。26（二）内质网的化学组成（二）内质网的化学组成1.1.脂类（脂类（30304040 ）以磷脂中的以磷脂中的磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱为主，为主，比细胞膜丰比细胞膜丰富富,鞘磷脂少鞘磷脂少2.2.蛋白质（蛋白质（60607070）3030多种不同的酶或者酶系多种不同的酶或者酶系标志酶：葡萄糖标志酶：葡萄糖6 6磷酸酶磷酸酶（三）内质网的类型（三）内质网的类型(Types of ER)核糖体核糖体粗面内质网粗面内质网滑面内质网滑面内质网There are two basic kinds of ER:Rough/granular endoplasmic reticulum(RER，粗面粗面/颗粒内质网颗粒内质网)-has ribosomes attached.Smooth/agranular endoplasmic reticulum(SER，滑滑/光光面面/无颗粒内质网无颗粒内质网)-no ribosomes.28粗面内质网粗面内质网(RER)(RER)滑面内质网滑面内质网(SER)(SER)rough endoplasmic reticulum(RER)rER:膜表面附膜表面附着核糖体，膜上有着核糖体，膜上有核糖体连接蛋白核糖体连接蛋白；形态多为板层状排形态多为板层状排列的扁囊；网腔内列的扁囊；网腔内含低电子或中等电含低电子或中等电子密度的物质；多子密度的物质；多分布在分泌活动旺分布在分泌活动旺盛或分化较完善的盛或分化较完善的细胞内。细胞内。(Russells body)The smooth ER(SER)sER:膜表面无核糖体附着；形态多为分枝小管或膜表面无核糖体附着；形态多为分枝小管或小泡；多分布在一些特化的细胞中。小泡；多分布在一些特化的细胞中。31糙面内质网与光面内质网结构糙面内质网与光面内质网结构A.胰腺外分泌细胞中发达的糙面内质网，内质网膜及外核膜上附有核糖体B.黄体细胞有丰富的光面内质网C.Cos-7 细胞经双重荧光染色显示的内质网的分布：绿色显示两种形式的内质网，叠加色（黄）显示糙面内质网区另外还有两个概念:微粒体和肌质网,可将它们看成是特殊类型的内质网。微粒体(microsome)在细胞匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内膜系统（主要是内质网和高尔基体）自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构。多数情况下，由破碎的内质网自我融合形成的微粒体，包含内质网膜和核糖体两种基本成分，这些小囊泡的直径大约100nm左右，是异质性的集合体。在体外实验中,具有蛋白质合成、蛋白质糖基化和脂类合成等内质网的基本功能。特殊类型的内质网p117 肌质网(sarcoplasmic reticulum)心肌和骨骼肌细胞中的一种特殊的内质网,其功能是参与肌肉收缩活动。肌质网膜上的Ca2+-ATP酶将细胞基质中的Ca2+泵入肌质网中储存起来，使肌质网Ca2+的浓度比胞质溶胶高出几千倍。受到神经冲动刺激后，Ca2+释放出来，参与肌肉收缩的调节。p122（四）内质网的功能（四）内质网的功能向细胞外分泌的蛋白质向细胞外分泌的蛋白质膜的整合蛋白膜的整合蛋白细胞器中的可溶性驻留蛋白细胞器中的可溶性驻留蛋白1.蛋白质的合成是糙面内质网蛋白质的合成是糙面内质网的主要功能的主要功能合成磷脂所需要的3 种酶活性部位都定位在内质网膜的细胞质基质侧细胞质基质侧2光面内质网是脂质合成的重要场所光面内质网是脂质合成的重要场所酰基转酰基转移酶移酶磷脂酸磷脂酸rER胞质侧胞质侧磷酸酶磷酸酶二酰基甘油二酰基甘油(DG)胆碱磷酸胆碱磷酸转移酶转移酶卵磷脂卵磷脂rER腔面腔面 先由酰基转移酶将胞质中的脂肪酸和磷酸甘油缩合成磷脂酸(留在脂双层中)。在磷酸酶作用下，由磷脂酸和磷酸甘油组成DG;最后,再在胆碱磷酸转移酶催化下由DG和CDP-胆碱合成卵磷脂。翻转酶(flipase)。37磷脂转位蛋白或称转位酶（磷脂转位蛋白或称转位酶（flippase）膜脂的不对称性？膜脂的不对称性？P119A.通过膜泡转运脂质通过膜泡转运脂质 B.通过通过PEP 介导的脂质转运介导的脂质转运C.膜嵌入蛋白介导的膜间直接接触膜嵌入蛋白介导的膜间直接接触内质网上合成的磷脂转运的三种可能方式内质网上合成的磷脂转运的三种可能方式3.蛋白质的修饰与加工蛋白质的修饰与加工发生在内质网和高尔基体的蛋白质糖基化在内质网发生二硫键的形成蛋白质折叠和多亚基蛋白的装配在内质网、高尔基体和分泌泡发生特异性的蛋白质水解切割蛋白质糖基化蛋白质糖基化N-连接糖基化与O-连接糖基化的比较 N-连接糖基化与之直接结合的糖是N-乙酰葡糖胺O-连接糖基化与之直接结合的糖是N-乙酰半乳糖胺N-连接与连接与O-连接的寡糖比较连接的寡糖比较在内质网发生的蛋白质N-连接糖基化的加工，转移至高尔基体后还会经过一系列复杂的修饰糙面内质网中蛋白质糙面内质网中蛋白质N-连接糖基化过程连接糖基化过程p121内质网腔二硫键形成内质网腔二硫键形成 附着在内质网膜腔面上的蛋白二硫键蛋白二硫键异构酶（异构酶（PDI）可以切断错误的二硫键，形成自由能最低的蛋白质构象，从而帮助新合成的蛋白质重新形成二硫键并产生正确折叠的构象。4.新生多肽的折叠与组装新生多肽的折叠与组装4.新生多肽的折叠与组装新生多肽的折叠与组装蛋白二硫键异构酶（PDI)和结合蛋白（Bip，HSP70）等蛋白质都具有4 肽驻留信号（KDEL 或 HDEL）以保证它们滞留在内质网中，并维持很高的浓度 内质网中的一种结合免疫球蛋白蛋白（结合免疫球蛋白蛋白（Bip）是属于HSP70家族的分子伴侣，在内质网中有2个作用：一是Bip同进入内质网的未折叠蛋白质的疏水氨基酸结合，防止多肽链不正确地折叠和聚合，或者识别错误折叠的蛋白质或未装配好的蛋白质亚单位，并促进它们重新折叠与装配；二是防止新合成的蛋白质在转运过程中变性或断裂.内质网是蛋白质分泌转运途径中行使质量监控的重要场所内质网是蛋白质分泌转运途径中行使质量监控的重要场所 内质网是蛋白质分泌转运途径中行使质量监控质量监控的重要场所。不能正确折叠的畸形肽链或未组装成寡聚体的蛋白质亚基，不论在内质网膜上还是在内质网腔中，一般都不能进入高尔基体，并通过Sec61p复合体从内质网腔转至细胞质基质，进而通过泛素依赖性降解途径泛素依赖性降解途径被蛋白酶体所降解。内质网是蛋白质分泌转运途径中行使质量监控的重要场所内质网是蛋白质分泌转运途径中行使质量监控的重要场所Molecular&Cellular Proteomics May 2007 vol.6 no.5 798-811 5.内质网的其他功能内质网的其他功能肝细胞的解毒作用肝细胞中含有丰富的光面内质网，它是合成外输性脂蛋白颗粒的基地。这些光面内质网含有一些酶（如混合功能氧化酶细胞色素P-450），介导氧化、还原和水解反应，使有毒物质由脂溶性转变成水溶性而被排出体外，此过程称为肝细胞的解毒作用。5.内质网的其他功能内质网的其他功能肌质网储存和释放Ca2+心肌和骨骼肌细胞中的一种特殊的内质网,其功能是参与肌肉收缩活动。肌质网膜上的Ca2+-ATP酶将细胞基质中的Ca2+泵入肌质网中储存起来，使肌质网Ca2+的浓度比胞质溶胶高出几千倍。受到神经冲动刺激后，Ca2+释放出来，参与肌肉收缩的调节。5.内质网的其他功能内质网的其他功能内质网上糖原的合成与分解sER中中的葡萄糖的葡萄糖-6-磷磷酸酶将葡萄糖酸酶将葡萄糖-6-磷磷酸水解生成葡萄糖和酸水解生成葡萄糖和无机磷，释放游离的无机磷，释放游离的葡萄糖进入血液，供葡萄糖进入血液，供细胞之用细胞之用 固醇类激素的合成(五）内质网应激及其信号调控内质网应激（ERS)反应，是一个存活程序和是一个存活程序和凋亡程序同时被激活的过程：凋亡程序同时被激活的过程：细胞可以整合应激反应，调动应激反应蛋白以减轻应激因素对细胞的损伤，调整细胞稳态；同时细胞也可以启动细胞凋亡来处理不能修复的损伤细胞，因此，ERS机制事关细胞生死抉择。(五）内质网应激及其信号调控在各种应激因素（错误折叠或未折叠蛋白质在ER腔内聚集、Ca2+平衡紊乱、缺氧、异常糖基化和病毒感染等）作用下，主要通过3条途径引发内质网应激（ERS)反应，影响特定基因表达。如果内质网功能持续紊乱，细胞将最终启动凋亡程序。（1）UPR（未折叠蛋白质应答反应）：错误折叠或未折叠蛋白过多积累引起；（2）固醇调节级联反应：胆固醇损耗所致，SREBP（固醇调控元件结合蛋白）介导；（3）EOR（内质网超负荷应答反应）：正确折叠蛋白和膜蛋白异常堆积引起；1.未折叠蛋白质应答反应未折叠蛋白质应答反应 在UPR信号转导途径中起感受器作用的3种跨ER膜蛋白：IRE1（需要肌醇酶1）、PERK（PKR样内质网激酶；PKR 即dsRNA激活的蛋白激酶）和ATF6（激活性转录因子）。平时它们与内质网腔中的调控蛋白Bip/GRP78（结合免疫球蛋白蛋白/葡萄糖调节蛋白78）结合成无活性的复合物，应激时解离并分别引发不同的3条平行信号途径。（1）IRE1：ER腔面结构域（分子伴侣Bip/GRP78 结合位点）；胞质面结构域（双功能：蛋白激酶/核酸内切酶自我交叉磷酸化和mRNA的剪接）（2）PERK：ER腔面结构域（分子伴侣Bip/GRP78 结合位点）；胞质面结构域（蛋白激酶自我交叉磷酸化和eIF2的磷酸化）（3）ATF6：跨ER膜ATF6转位至高尔基体被S1P和S2P蛋白酶裂解而激活 ATF6进入细胞核 促进含内质网应激反应元件（ERSE）的转录因子（如XBP-1）及未折叠蛋白质应答反应元件（UPRE）的UPR 靶分子（Bip/GRP78）等基因转录。2.固醇调节级联反应固醇调节级联反应 在高尔基体上，SREBP随即在2个位点分别被蛋白酶S1P和S2P切割，从而使SREBP转录因子N端bHLH结构域得以释放；释放后的bHLH结构域称作nSREBP（核-SREBP），并转位到核内，调控具有SRE（固醇调控元件）的靶基因的转录。固醇调节级联反应是指胆固醇缺乏引发的固醇调控元件结合固醇调节级联反应是指胆固醇缺乏引发的固醇调控元件结合蛋白（蛋白（SREBP）信号通路调节基因转录的反应。）信号通路调节基因转录的反应。（1）当胆固醇水平过高时，跨ER膜蛋白insig-1（2）与SCAP上固醇敏感结构域结合，将SCAP-SREBP 复合物锚定在内质网膜上。（2）在胆固醇水平降低时，insig-1（2）与SCAP解离，容许SCAP-SREBP 复合物以膜泡转运的形式移动到高尔基体。尽管ERS介导的细胞凋亡信号通路的细节尚不清楚，但已知细胞内Ca2+稳态失衡和calpain（需Ca2+蛋白酶）及caspase-12的激活是关键的环节。Calpain（需（需Ca2+蛋白酶）：蛋白酶）：存在于细胞质中，由大小2个亚基组成：大亚基有4个结构域，包含活性部位；小亚基有2个结构域，包含调节部位；大小亚基均有Ca2+的结合位点。高水平的Ca2+导致calpain酶原大小亚基水解而被激活。Caspase-12（天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶）（天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶）：唯一存在于内质网膜的胞质侧的caspase家族成员。Calpain在T132/A133和K158/T1592个切割位点切割caspase-12酶原，将其激活。ERS介导的细胞凋亡信号通路：介导的细胞凋亡信号通路：ERS凋亡信号内质网膜IP3R（IP3受体）通道 Ca2+释放至细胞质中激活calpain切割底物 vinculin（黏着斑蛋白）/Bcl-xL/caspase-12酶原 细胞凋亡（途径）3.ERS反应引发的细胞凋亡反应引发的细胞凋亡（六）内质网的病理性变化 1.ER是一个比较敏感的细胞器。是一个比较敏感的细胞器。2.内质网肿胀内质网肿胀：ER膨大成空泡状，电子密度底于正常，伴有线粒体肿胀，病理学上称为浊肿(cloudy swelling)。缺氧、辐射等。3.内质网脱粒内质网脱粒：药物中毒、病毒感染等。4.内质网内包涵体内质网内包涵体：某些疾病中可看到脂类、蛋白质在ER腔中积累。如脂肪肝细胞中有大量脂质体存在；肝硬化患者的肝细胞可见到ER腔中聚集大量的1-AT（1-抗胰蛋白酶）。二、高尔基体二、高尔基体高尔基体（Golgi body）/高尔基器（Golgi apparatus）/高尔基复合体（Golgi complex）：一种由相对排列整齐的弓形扁平膜囊体系和大小不一的形态多变的管泡网结构组成的极性细胞器。高尔基体的主要功能：对ER转运来的脂分子及蛋白质进行加工、修饰、分类、包装以及分选。此外，高尔基体也是细胞内糖类合成的工厂。高尔基体是高度动态的结构，而且难以分离与纯化，目前积累的资料仍不足以彻底阐明高尔基体的结构与功能。（一）、高尔基体的极性（一）、高尔基体的极性高尔基体的形态学极性：高尔基体的形态学极性：高尔基体是一种有极性的细胞器，这不仅表现在它在细胞中往往有比较恒定的位置与方向，而且物质从高尔基体的一侧输入，从另一侧输出，因此每层膜囊也各不相同。在很多细胞中，高尔基体靠近细胞核的一侧，扁囊弯曲成凸面（又称形成面或顺面）；面向细胞质膜的一侧常呈凹面（又称成熟面或反面）。注意：注意：高尔基体的顺面并非总是在高尔基体的凸面，在细胞发育的某个阶段可能位于高尔基体的凹面。高尔基体的生化极性高尔基体的生化极性常用4种细胞化学（染色）反应来表现高尔基体的生化极性：（1）嗜锇反应顺面；（2）NADP酶的细胞化学反应中间几层扁平囊；（3）TPP酶的细胞化学反应反面的12层膜囊；（4）CMP酶和酸性磷酸酶的细胞化学反应 靠近反面膜囊状和反面管网结构。高尔基体结构组织及膜囊间蛋白质转运的两种可能模型高尔基体结构组织及膜囊间蛋白质转运的两种可能模型（A）膜泡运输模型 （B）膜囊成熟模型（1）膜泡运输模型：）膜泡运输模型：高尔基体的膜囊群主体是相对稳态的结构，膜囊自身的更新和各部膜囊的生化极性（特征性酶和驻留蛋白的变化）是通过不同类型转运膜泡在相邻膜囊间正向（顺面反面）和反向（反面顺面）有序转移实现的。（2）膜囊成熟模型：）膜囊成熟模型：高尔基体的膜囊群主体是动态的结构，源自ER的泡管结构首先形成高尔基体CGN，随后膜囊自身从顺面到反面逐次成熟并迁移，一些不当转移的膜囊特征性酶或驻留蛋白通过反向COP转运膜泡再没收回来。细胞骨架在维持高尔基体动态细胞骨架在维持高尔基体动态的空间结构以及复杂的膜泡运的空间结构以及复杂的膜泡运输中起着重要的作用。输中起着重要的作用。高尔基体与细胞内膜泡运输 膜流膜流(membrane flow)：细胞各种膜性结构之间相互联系和转移的现象称膜流。运输小泡运输小泡高尔基体高尔基体大囊泡大囊泡细胞膜细胞膜内质网内质网61（二）高尔基体的功能（二）高尔基体的功能高尔基体是细胞内大分子加工转运的枢纽对内质网合成的蛋白质进行加工、分类与包装，然后定向转运内质网合成的一部分脂质向细胞质膜和溶酶体膜等部位运输高尔基体还是细胞内糖类合成的工厂高尔基体与高尔基体与细胞的分泌活动细胞的分泌活动3H标记亮氨酸标记亮氨酸3分钟分钟20分钟分钟120分钟分钟 高尔基复合体在高尔基复合体在细胞分泌活动中起着细胞分泌活动中起着重要的运输作用；在重要的运输作用；在分泌颗粒的形成过程分泌颗粒的形成过程中起着浓缩、修饰、中起着浓缩、修饰、加工等作用。加工等作用。631.高尔基体与细胞的分泌活动高尔基体与细胞的分泌活动高尔基体TGN区是蛋白质包装分选的关键枢纽，至少有3 条分选途径（1）溶酶体酶的包装与分选途径 甘露糖-6-磷酸（M6P）标记（2）可调节性分泌（regulated secretion）途径 特化类型的分泌细胞（3）组成型分泌（constitutive secretion）途径 所有真核细胞，均可通过分泌泡连续分泌某些蛋白质至细胞表面高尔基体与溶酶体的形成高尔基体与溶酶体的形成溶酶体的酶是由rER上的核糖体合成rER腔内运输小泡 高尔基体（加工修饰）溶酶体的酶内含有甘露糖-6-磷酸，高尔基复合体反面扁囊膜上有甘露糖-6-磷酸受体，能特异与其结合，诱导溶酶体酶聚集并“出芽”离开高尔基复合体形成溶酶体。溶酶体酶的分选：M6P反面膜囊M6P受体。在肝细胞中溶酶体酶还存在不依赖于M6P的另一种分选途径。发生在高尔基体发生在高尔基体TGN 区的蛋白质分选途径区的蛋白质分选途径高尔基体对蛋白质的修饰加工高尔基体对蛋白质的修饰加工参与糖蛋白的合成和修饰参与糖蛋白的合成和修饰N-连接寡糖链：连接寡糖链：在在rER腔内合成。腔内合成。O-连接寡糖链：连接寡糖链：在高尔基体内合成。在高尔基体内合成。糖蛋白糖蛋白3H标记甘露糖标记甘露糖3H标记半乳糖；唾液糖标记半乳糖；唾液糖3H标记标记N-乙酰葡萄乙酰葡萄糖胺糖胺参与蛋白质的改造参与蛋白质的改造无活性前体物无活性前体物(某些肽类激素某些肽类激素)加工改造加工改造有活性的物质有活性的物质(激素激素)高尔基复合体对糖蛋白的合成和高尔基复合体对糖蛋白的合成和修饰过程具有严格的顺序性。修饰过程具有严格的顺序性。672.蛋白质的糖基化及其修饰蛋白质的糖基化及其修饰蛋白质糖基化的生物学功能蛋白质糖基化类型蛋白聚糖在高尔基体中组装植物细胞多糖的合成与分泌糖脂的合成与加工（1）蛋白质糖基化的生物学功能）蛋白质糖基化的生物学功能糖基化的蛋白质其寡糖链具有促进蛋白质折叠和增强糖蛋白稳定性的作用蛋白质糖基化修饰利于高尔基体进行分选与包装，保证糖蛋白从 rER 至高尔基体膜囊单向转移细胞内一些负责糖链合成与加工的酶类均由管家基因编码；细胞表面、细胞外基质密集存在的寡糖链，直接介导细胞间的双向通讯，或参与分化、发育等多种过程多羟基糖侧链还可能影响蛋白质的水溶性及蛋白质所带电荷的性质（2）蛋白质糖基化类型）蛋白质糖基化类型特特 征征 N-连接连接 O-连接连接合成部位粗面内质网高尔基体合成方式来自同一个寡糖前体一个个单糖加上去与之结合的氨基酸残基一个个单糖加上去丝氨酸、苏氨酸、羟赖氨酸、羟脯氨酸最终长度 至少5个糖残基一般14个糖残基，但ABO血型抗原较长第一个糖残基N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰半乳糖胺等P120表7-1N-连接寡糖的核心糖基是在内质网装配后转移到的高尔基体的；N-连接寡糖的进一步加工修饰在高尔基体上完成N-连接寡糖在高尔基体各膜囊区间的加工过程连接寡糖在高尔基体各膜囊区间的加工过程（3）蛋白聚糖在高尔基体中组装）蛋白聚糖在高尔基体中组装由一个或 多个糖氨聚糖(glycosaminoglycan)结合到核心蛋白的丝氨酸Ser残基上，直接与Ser羟基结合的不是N-乙酰半乳糖胺而是木糖（xylose）3.蛋白酶的水解和其他加工过程蛋白酶的水解和其他加工过程无生物活性的蛋白原（proprotein）进入高尔基体后，切除N 端或两端的序列形成成熟多肽。如胰岛素、胰高血糖素及血清蛋白等含有多个相同氨基酸序列的前体，在高尔基体中被水解形成同种有活性的多肽，如神经肽等同一种蛋白质前体在不同的细胞中可能以不同的方式加工，产生不同种类的多肽，增加了细胞信号分子的多样 性胰岛素分子的加工与成熟4高尔基复合体的病理性变化高尔基复合体的病理性变化异异常常改改变变高尔基复合体的增生和肿胀：囊泡扩张可占高尔基复合体的增生和肿胀：囊泡扩张可占据细胞质的大部分区域，多见于药物中毒。据细胞质的大部分区域，多见于药物中毒。高尔基复合体在癌细胞中的改变高尔基复合体在癌细胞中的改变高尔基复合体的萎缩和解体：囊泡塌陷、数高尔基复合体的萎缩和解体：囊泡塌陷、数量减少或降解，见于中毒或肿瘤细胞。量减少或降解，见于中毒或肿瘤细胞。三、溶酶体图 溶酶体的发现过程（酸性磷酸酶存在于膜结合小泡中）左：造成膜泡破裂及酸性磷酸酶释放的条件右：鼠肝线粒体分离组分置于低渗条件下检测的酸性磷酸酶活性曲线溶酶体的发现溶酶体的发现溶酶体的发现溶酶体的发现 1949194919491949年年年年De Duve De Duve De Duve De Duve 将大鼠肝将大鼠肝将大鼠肝将大鼠肝匀浆分级分离各种细胞器匀浆分级分离各种细胞器匀浆分级分离各种细胞器匀浆分级分离各种细胞器时，发现含有时，发现含有时，发现含有时，发现含有酸性磷酸酶酸性磷酸酶酸性磷酸酶酸性磷酸酶活性活性活性活性的颗粒。的颗粒。的颗粒。的颗粒。1955195519551955年，电镜下观察到这年，电镜下观察到这年，电镜下观察到这年，电镜下观察到这种颗粒表面包围着一层膜，种颗粒表面包围着一层膜，种颗粒表面包围着一层膜，种颗粒表面包围着一层膜，从而确认是一种新细胞器，从而确认是一种新细胞器，从而确认是一种新细胞器，从而确认是一种新细胞器，定名为溶酶体。定名为溶酶体。定名为溶酶体。定名为溶酶体。溶酶体：溶酶体：溶酶体：溶酶体：LysosomeLysosomeLysosomeLysosome，由单，由单，由单，由单层膜围绕、内含多种层膜围绕、内含多种层膜围绕、内含多种层膜围绕、内含多种酸性酸性酸性酸性水解酶类水解酶类水解酶类水解酶类的囊泡状细胞器。的囊泡状细胞器。的囊泡状细胞器。的囊泡状细胞器。其主要功能是进行细胞内其主要功能是进行细胞内其主要功能是进行细胞内其主要功能是进行细胞内的的的的消化和保护消化和保护消化和保护消化和保护作用作用作用作用。三、溶酶体溶酶体（溶酶体（Lysosome)Lysosome)细胞内细胞内“垃圾垃圾”处理厂处理厂小鼠膀胱上皮细胞中的溶酶体小鼠膀胱上皮细胞中的溶酶体（一）溶酶体的形态结构与类型（一）溶酶体的形态结构与类型异质性细胞器初级溶酶体次级溶酶体残质体初级溶酶体初级溶酶体(primary lysosome)刚刚从反面高尔基体形成的小囊泡,仅含有水解酶类，但无作用底物，外面只有一层单位膜，其中的酶处于非活性状态。次级溶酶体次级溶酶体(secondary lysosome)初级溶酶体与细胞内的自噬泡或异噬泡、胞饮泡或吞噬泡融合形成的复合体，有水解酶和相应的底物，是一种将要或正在进行消化作用的溶酶体。根据所消化的物质来源不同,分为自噬性溶酶体、异噬性溶酶体。自噬性溶酶体：作用底物是内源性的,即细胞内的蜕变、破损的某些细胞器或局部细胞质。异噬性溶酶体：它的作用底物是外源性的,即细胞经吞噬、胞饮作用所摄入的胞外物质。残余体（残余体（residual lysosome）未被消化的物质残余在溶酶体中形成残余小体或后溶酶体，以胞吐外排。也可能留在细胞内逐年增多，如表皮细胞的老年斑，肝细胞的脂褐质内体内体初级溶酶体初级溶酶体吞噬体吞噬体异溶酶体异溶酶体吞饮体吞饮体异溶酶体异溶酶体自噬体自噬体自溶酶体自溶酶体分泌颗粒分泌颗粒分泌溶酶体分泌溶酶体次次 级级 溶溶 酶酶 体体残余小体残余小体异噬作用异噬作用自噬作用自噬作用胞外消化胞外消化（一）溶酶体的形态结构与类型（一）溶酶体的形态结构与类型溶酶体含有多种酸性水解酶类，酶的最适pH 为5.0 左右酸性磷酸酶是常用的标志酶溶酶体膜成分特殊 嵌有质子泵 具有多种载体蛋白 膜蛋白高度糖基化次级溶酶体分为自噬溶酶体和异噬溶酶体（溶酶体酶的最适pH为5.0左右）（水解产物外运）（防止被降解）（二）溶酶体的功能（二）溶酶体的功能溶酶体的基本功能是细胞内的消化作用，一般可概括成内吞作用内吞作用、吞噬作用和自噬吞噬作用和自噬作用作用3 种途径1.清除无用的生物大分子、衰老的细胞器及衰老损伤和死清除无用的生物大分子、衰老的细胞器及衰老损伤和死 亡亡的细胞的细胞Aaron Ciechanover.Nature Reviews Molecular Cell Biology,2005,6,79-872.防御功能防御功能防御功能是某些细胞特有的功能，它可以识别并吞噬入侵的病毒或细