法定量测定人血浆中阿司匹林及其代谢产物水杨酸.ppt

第六章 芳酸及其酯类药物分析一、苯甲酸类 第一节、典型药物分类与理化性质第一节、典型药物分类与理化性质丙磺舒（pKa3.4）羟苯乙酯(二二)主要理化性质主要理化性质 固体，一定的熔点，具苯环，有紫外吸收，只有固体，一定的熔点，具苯环，有紫外吸收，只有苯甲酸钠溶于水。苯甲酸钠溶于水。二、水杨酸类 贝诺酯结构性质：1、具有芳环、羧基及其它取代基团。2、具有游离羧基呈酸性，可成盐或酯。3、pka=36，酸性比盐酸、硫酸弱，比碳酸、苯酚强。4、含共轭体系，在一定波长处有UV吸收。5、均有红外吸收 酸性：受苯环、羧基和取代基的影响酸性：受苯环、羧基和取代基的影响n n 取代基为取代基为-X X，-NO-NO2 2，-OH-OH时酸性比苯甲酸强时酸性比苯甲酸强 原原因因：吸吸电电子子效效应应，使使羧羧基基中中-OH-OH极极性性减减弱弱，较较易易离解出质子，故酸性增强。离解出质子，故酸性增强。n n 取代基为取代基为-CHCH3 3，-NH-NH2 2，酸性比苯甲酸弱酸性比苯甲酸弱 原原因因：斥斥电电子子效效应应，增增加加苯苯环环电电子子云云密密度度，增增加加-OHOH极性，不易离解出质子，使酸性降低。极性，不易离解出质子，使酸性降低。氯贝丁酯三、其他芳酸类布洛芬第二节、鉴别试验（一）与铁盐 反应1、水杨酸及其盐反应条件：弱酸性（pH46）反应现象：紫堇色 2、阿司匹林需加热水解后与阿司匹林需加热水解后与FeClFeCl3 3反应反应方法：取本品方法：取本品0.10.1g g 煮沸放冷煮沸放冷 显紫堇色显紫堇色 加水加水1010ml ml 加加FeClFeCl3 3 1d1d 3、苯甲酸（钠）与三氯化铁生成褐色沉淀、苯甲酸（钠）与三氯化铁生成褐色沉淀 4、丙磺舒与三氯化铁成米黄色沉淀丙磺舒与三氯化铁成米黄色沉淀 5 5、布洛芬：与高氯酸羟胺及、布洛芬：与高氯酸羟胺及NN，N-N-双环己基羧双环己基羧二亚胺混合，再与高氯酸铁反应显紫色二亚胺混合，再与高氯酸铁反应显紫色6、氯贝丁酯的鉴别：异羟肟酸铁反应。氯贝丁酯分子中具有酯结构，与盐酸羟胺及三氯化铁作用，形成有色的异羟肟酸铁，显紫色。二）重氮化-偶合反应 对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠具具芳芳伯伯氨氨基基结结构构，在在酸酸性性溶溶液液中中，与与亚亚硝硝酸酸钠钠液液进进行行重重氮氮化化反反应应，生生成成的的重重氮氮盐盐与与碱性碱性-萘酚偶合产生橙红色沉淀。萘酚偶合产生橙红色沉淀。三、氧化反应甲酚那酸遇硫酸显黄色（四）水解反应：阿司匹林与碳酸钠试液反应（四）水解反应：阿司匹林与碳酸钠试液反应反应现象：水杨酸白色沉淀析出，并产生醋酸的臭气反应现象：水杨酸白色沉淀析出，并产生醋酸的臭气 五、分解产物的反应五、分解产物的反应 苯甲酸盐苯甲酸盐-升华升华 含硫药物含硫药物-与氢氧化钠、硝酸反应产生硫与氢氧化钠、硝酸反应产生硫 酸盐，酸盐，或加热产生二氧化硫。或加热产生二氧化硫。六、紫外吸收光谱六、紫外吸收光谱七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法八、薄层色谱法八、薄层色谱法九、高效液相色谱法九、高效液相色谱法第三节、特殊杂质检查第三节、特殊杂质检查 （一）（一）阿司匹林（阿司匹林（ASAASA）合成工艺：合成工艺：（二）检查：1 1、溶液的澄清度：、溶液的澄清度：（1 1）杂杂质质来来源源：原原料料合合成成工工艺艺中中由由副副反反应应生生成成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。（2 2）检检查查原原理理：利利用用药药物物与与杂杂质质在在溶溶解解行行为为上上的的差差异进行检查异进行检查（3 3）检查方法：）检查方法：取供试品取供试品0.50.5g g 溶液应澄清溶液应澄清用用4545的碳酸钠试液的碳酸钠试液1010mlml 2、游离水杨酸（SA）-特殊杂质（1）来源：生产过程乙酰化不完全（未反应SA）贮存不当水解而产生的SA（2）检查原理：阿司匹林+硫酸铁铵 不反应 水杨酸+硫酸铁铵 紫堇色 与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，不得更深。n n 对氨基水杨酸钠中特殊杂质对氨基水杨酸钠中特殊杂质-间氨基酚间氨基酚 离子对离子对-HPLCHPLC法：分离有机离子法：分离有机离子 -COOHCOOH、-SO-SO3 3H H 基团，选用带正电荷的有机铵盐；基团，选用带正电荷的有机铵盐；-NHNH2 2、-NH-NH等阳离子，选用带负电荷烷基磺酸盐等阳离子，选用带负电荷烷基磺酸盐或烷基硫酸盐。缓冲盐调节溶液或烷基硫酸盐。缓冲盐调节溶液pHpH。n n 甲酚那酸中特殊杂质甲酚那酸中特殊杂质-铜，原子吸收分光光度法铜，原子吸收分光光度法n n 氯贝丁酯中特殊杂质氯贝丁酯中特殊杂质-对氯酚，气相色谱法对氯酚，气相色谱法第四节、含量测定 1、酸碱滴定法（1）直接滴定法：1）：原理利用阿司匹林游离羧基的酸性，以标准碱滴定液直接滴定。2）方法：滴定液：NaOH(0.1mol/L)溶剂：中性乙醇 指示液：酚酞3）注意事项：A 采用中性乙醇做溶剂的目的：易于溶解样品 防止本品水解B 滴定过程中不断振摇目的：防止局部碱度过大而促使其水解。C 采用酚酞作指示剂：本品是弱酸，用强碱滴定时，化学计量点偏碱性，故选用在碱性区域变色的酚酞。水杨酸检查合格用此法 2 2、水解后剩余滴定法、水解后剩余滴定法 酯结构在碱性溶液中水解，加入定量过量的氢酯结构在碱性溶液中水解，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使药物水解，过量氢氧化氧化钠滴定液，加热使药物水解，过量氢氧化钠用硫酸滴定液回滴。钠用硫酸滴定液回滴。注意空白注意空白 3、两步滴定法（1 1）适用范围：阿司匹林片剂）适用范围：阿司匹林片剂 采用本法原因：采用本法原因：消除片剂中稳定剂干扰（枸橼酸或消除片剂中稳定剂干扰（枸橼酸或酒石酸）酒石酸）消除水解产物干扰：阿司匹林片在贮存消除水解产物干扰：阿司匹林片在贮存过程水解产生水杨酸和醋酸过程水解产生水杨酸和醋酸（2 2）测定：第一步：中和）测定：第一步：中和 精密称取片粉精密称取片粉 酚酞指示剂酚酞指示剂 迅速滴至粉红色迅速滴至粉红色 加中性乙醇溶解加中性乙醇溶解 NaOHNaOH滴定液滴定液 酒石酸等稳定剂、酒石酸等稳定剂、SA SA、ASAASA均成为相应钠盐均成为相应钠盐 第二步：水解第二步：水解 中和后供试品液中和后供试品液 水浴加热水浴加热 加定量过量加定量过量NaOH(0.1mol/l)NaOH(0.1mol/l)第三步：测定第三步：测定 用用H H2 2SOSO4 4滴定液滴定液(0.05(0.05mol/l)mol/l)滴定剩余的碱。滴定剩余的碱。滴定结果用空白试验校正滴定结果用空白试验校正 每每1 1ml Hml H2 2SOSO4 4滴定液滴定液(0.05(0.05mol/l)mol/l)滴定液相当于滴定液相当于18.0218.02mgmg的的C C9 9H H8 8OO4 4（3 3）含量计算：）含量计算：标示量标示量:表示制剂中各成分含量的理论值。表示制剂中各成分含量的理论值。一般用标示量的百分值来控制制剂含量。一般用标示量的百分值来控制制剂含量。公式通则为：标示量实际测得含量公式通则为：标示量实际测得含量 100100 标示量标示量 片剂标示量片剂标示量 VTFVTF平均片重平均片重 100100 供试品重供试品重 标示量标示量阿司匹林含量由水解时消耗的碱量计算阿司匹林含量由水解时消耗的碱量计算标示量（标示量（V V0 0-V)C-V)C H2SO4H2SO418.02/1000 W18.02/1000 W平平 100 100 0.05 m 0.05 m 标示量标示量 上式中：上式中：V V0 0：空白试验消耗硫酸体积（空白试验消耗硫酸体积（ml)ml)V V：剩余滴定时消耗硫酸体积剩余滴定时消耗硫酸体积(ml)ml)C C H2SO4:H2SO4:硫酸滴定液的实际浓度（硫酸滴定液的实际浓度（mol/l)mol/l)mm供试品片粉量（供试品片粉量（g)Wg)W平平:平均片重（平均片重（g)g)n n例例：取取标标示示量量为为0.30.3g g的的阿阿司司匹匹林林片片1010片片，称称出出总总重重为为3.58403.5840g g，研研细细后后称称取取0.34840.3484g g，按按药药典典方方法法用用两两步步 滴滴 定定 法法 测测 定定 其其 含含 量量，消消 耗耗 硫硫 酸酸 滴滴 定定 液液（0.050150.05015mol/lmol/l）23.84ml23.84ml，空空白白试试验验消消耗耗该该硫硫酸酸滴滴定定液液39.8839.88mlml，求求阿阿司司匹匹林林的的含含量量为为标标示示量量的的多多少少？二、亚硝酸钠法二、亚硝酸钠法 本品具有芳伯氨基，在盐酸存在条件下本品具有芳伯氨基，在盐酸存在条件下 与亚硝酸钠定量地发生重氮化反应。与亚硝酸钠定量地发生重氮化反应。中国药典采用亚硝酸钠滴定法测定含量。中国药典采用亚硝酸钠滴定法测定含量。三、双相滴定法测定苯甲酸钠的含量三、双相滴定法测定苯甲酸钠的含量1 1、采用双相滴定法原因：、采用双相滴定法原因：滴定过程析出游离酸不溶于水，使滴定终点突跃滴定过程析出游离酸不溶于水，使滴定终点突跃不明显，不利于终点的正确判断，同时吸附包埋不明显，不利于终点的正确判断，同时吸附包埋未反应完全的样品。未反应完全的样品。2 2、双相滴定法定义：在水和与水不相溶的双相滴定法定义：在水和与水不相溶的 有机溶有机溶剂两相中进行酸碱滴定的方法。剂两相中进行酸碱滴定的方法。3 3、原理：、原理：水层水层 有机层有机层4 4、测定方法：在分液漏斗中进行、测定方法：在分液漏斗中进行有机相：乙醚有机相：乙醚 反应产物苯甲酸溶于此相反应产物苯甲酸溶于此相滴定剂为盐酸（滴定剂为盐酸（0.10.1mol/l)mol/l)，指示液：甲基橙指示液：甲基橙注意：边滴边振摇，使反应产物苯甲酸随时溶于乙醚层，注意：边滴边振摇，使反应产物苯甲酸随时溶于乙醚层，使反应进行到底。使反应进行到底。终点判断：在水层第二次呈现持续的橙红色即为终点。终点判断：在水层第二次呈现持续的橙红色即为终点。四、柱分配紫外分光光度法四、柱分配紫外分光光度法适用：片剂、胶囊、栓剂适用：片剂、胶囊、栓剂特点：能分离杂质，同时测定特点：能分离杂质，同时测定ASAASA、SASA（1 1）SASA的限量测定的限量测定色谱柱用硅藻土填充。色谱柱用硅藻土填充。固定相：三氯化铁尿素固定相：三氯化铁尿素流动相：氯仿，乙醚流动相：氯仿，乙醚在在max=306nmmax=306nm测定吸收度，测定吸收度，A A样（样（SA)SA)A A标（标（SA)SA)（2 2）ASAASA的测定的测定固定相：碳酸氢钠固定相：碳酸氢钠 流动相：氯仿流动相：氯仿max=280nmmax=280nm测定吸收度，测定吸收度，A A样样（ASA+SA)ASA+SA)-A-A样（样（SA)SA)五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法 阿司匹林栓剂的含量测定阿司匹林栓剂的含量测定 丙磺舒原料的含量测定丙磺舒原料的含量测定 第五节第五节 体内药物分析体内药物分析血清中阿司匹林和水杨酸的血清中阿司匹林和水杨酸的HPLCHPLC法测定法测定尿中丙磺舒的固相萃取尿中丙磺舒的固相萃取-HPLC-HPLC法测定法测定血浆中布洛芬的血浆中布洛芬的HPLCHPLC测定测定血浆中二氟尼柳的固相萃取血浆中二氟尼柳的固相萃取-反相反相HPLCHPLC测定测定nLC-MS/MS法定量测定人血浆中阿司匹林及其代法定量测定人血浆中阿司匹林及其代谢产物水杨酸谢产物水杨酸n方法的定量下限(LOQ)为25 ng/mL,灵敏度较高,其人血浆中阿司匹林和水杨酸在2510 000ng/mL范围内,其浓度与响应值之间具有良好的相关性,全部标准曲线的相关系数(r)均在0.9901.000之间,方法的日内和日间精密度、准确度符合要求(RSD15%,RE15%)。