杭太俊-药物分析18药物制剂分析概论.ppt

药物分析药物分析药物分析药物分析JiangxiJiangxi University of University of Traditional Chinese MedicinesTraditional Chinese Medicines主讲主讲主讲主讲:曾金祥曾金祥曾金祥曾金祥LOGO第十八章第十八章第十八章第十八章 药物制剂药物制剂药物制剂药物制剂分析分析分析分析药物分析教研室Analysis of drugs in pharmaceutical preparationsAnalysis of drugs in pharmaceutical preparations 第一节 药物制剂分析的特点 Special feature 第二节 片剂和注射剂的分析 General detection in Tablets&Injection 第三节 片剂和注射剂中药物的含量测定 Assay Interferences&their elimination 第四节 复方制剂分析 Assay of compound Company LogoCompany Logo第一节 药物制剂分析的特点 防治和诊断疾病的需要 保证药物用法和用量的准确 增强药物的稳定性 药物使用、贮存和运输的方便 延长药物的生物利用度 降低药物的毒性和副作用Special Company LogoCompany Logo(一)检查内容不同一般原料药项下的检查项目不需重复检查，只检查在制备和储运过程中产生的杂质及制剂相应的检查项目。例：盐酸普鲁卡因注射剂中“对氨基苯甲酸”阿司匹林片“水杨酸”Company LogoCompany Logo(二)质量控制要求不同1.含量要求范围不同Company LogoCompany Logo2.杂质限度要求不同Company LogoCompany Logo3.含量测定方法不同盐酸氯丙嗪（含量测定）原料：非水滴定法 片剂：UV法(测 254nm)注射剂：UV法(测 306nm)制剂含量测定：强调选择性、要求灵敏度高 原料含量测定：强调准确度、精密度Company LogoCompany Logo(三)含量测定的计算方法不同原料药制剂Company LogoCompany Logo1.原料药含量测定的计算1.1容量分析法 Company LogoCompany Logo应用示例应用示例 精密称取青霉素钾供试品0.4021g，按药典规定用剩余碱量法测定含量。先加入NaOH(0.1mol/L)25.00ml，回滴时消耗0.1015mol/L的HCl为14.20ml，空白试验消耗0.1015mol/L的盐酸液24.68ml。每1ml氢氧化钠液(0.1mol/L)相当于37.25mg的青霉素钾，求供试品的含量。Company LogoCompany Logo1.2 UV法1.2.a 直接测定Company LogoCompany Logo应用示例应用示例对乙酰氨基酚的含量测定方法为：取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数()为715计算，即得。若样品称样量为m(g)，测得的吸收度为A，则含量百分率的计算式为Company LogoCompany Logo1.2.b 对照法Company LogoCompany Logo应用示例应用示例利血平的含量测定方法为：对照品溶液的制备 精密称取利血平对照品20mg，置100ml量瓶中，加氯仿4ml使溶解，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取5m1，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备 精密称取本品0.0205g，照对照品溶液同法制备。精密量取对照品溶液与供试品溶液各5ml，各加硫酸滴定液（0.25mol/L）1.0ml与新制的0.3%亚硝酸钠溶液1.0ml，摇匀，置55水浴中加热30分钟，冷却后，各加新制的5%氨基磺酸铵溶液0.5ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀；另取对照品溶液与供试品溶液各5ml，除不加0.3%亚硝酸钠溶液外，分别用同一方法处理后作为各自相应的空白，照分光光度法，在3902nm的波长处分别测定吸收度，供试品溶液的吸收度为0.604，对照品溶液的吸收度为0.594，计算利血平的百分含量。Company LogoCompany Logo2.片剂含量测定的计算Company LogoCompany Logo2.1 容量分析方法Company LogoCompany Logo应用示例应用示例取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g）20粒，除去胶囊后测得内容物总重为3.0780g，称取0.1536g，按药典规定用溴量法测定。加入溴液（0.1 mol/L）25ml，剩余的溴液用硫代硫酸钠液（0.1025mol/L）滴定到终点时，用去17.94ml。空白试验用去硫代硫酸钠液25.00ml。按每1ml 溴液（0.1mol/L）相当13.01mg的司可巴比妥钠，计算该胶囊中按标示量表示的百分含量。Company LogoCompany Logo2.2 UV法Company LogoCompany Logo3.注射剂含量测定的计算Company LogoCompany Logo3.1 容量分析方法Company LogoCompany Logo应用示例应用示例维生素C注射液（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量取本品2ml，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1003mol/L）滴定，至溶液显兰色并持续30秒钟不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C注射液的标示量%。Company LogoCompany Logo3.2 UV法Company LogoCompany Logo应用示例应用示例中国药典（1990年版）规定维生素B12注射液规格为0.1mgm1，含量测定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，混匀，置lcm石英池中，以蒸馏水为空白，在3611nm波长处吸收度为0.593，按 为207计算维生素B12按标示量计算的百分含量Company LogoCompany Logo应用示例应用示例用异烟肼比色法测定复方己酸孕酮注射液的含量。当己酸孕酮对照品的浓度为50g/ml，按中国药典规定显色后在380nm波长处测得吸收度为0.160。取标示量为250mg/ml(己酸孕酮)的供试品2ml配成100ml溶液，再稀释100倍后，按对照品显色法同样显色，测得吸收度为0.154。求供试品中己酸孕酮的含量为标示量的多少？Company LogoCompany Logo制剂含量测定中，应考虑取样问题辅料对含量测定的干扰与排除复方制剂中各成分互相干扰其含量测定及其措施要有合适的分析方法与一定的准确度，以保证制剂的质量。Company LogoCompany Logo第二节 片剂和注射剂的分析片剂的检查项目【重量差异】(weight variation)【崩解时限】(disintegration)【含量均匀度】(content uniformity)【溶出度】(dissolution)【释放度】General detection in Tablets&ICompany LogoCompany Logo一、片剂的检查项目（一）重量差异(weight variation)按规定称量方法测得片剂每片的重量和平均片重之间的差异程度。检查方法 取供试品20片，精密称定总重量，求得平均片重，再分别准确称定每片的重量，计算每片片重与平均片重差异的百分率，即重量差异。Company LogoCompany Logo结果判断 超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度的1倍。Company LogoCompany Logo（二）崩解时限(disintegration)固体制剂在规定的介质中，以规定的方法进行检查，崩解溶散并通过筛网所需时间的限度（不溶性的包衣材料或破碎的胶囊壳除外）。Company LogoCompany Logo结果判断 取药片6片检查，如有1片不合格，应另取6片复试，均应符合规定。Company LogoCompany Logo（三）含量均匀度(content uniformity)小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂等每片(个)含量符合标示量的程度。适用范围 每片/个标示量10 mg或主要含量5片重的片剂、胶囊或注射用无菌粉末 其余制剂中每片/个标示量2 mg或主要含量70标示量(Q)Company LogoCompany Logo二、注射液的检查项目注射液系指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供注入体内的溶液、乳状液或混悬液，以及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂。溶剂 最常用的水性溶剂为注射用水，亦可用0.9%氯化钠溶液或其他适宜的水溶液。非水溶剂有乙醇、丙二醇、聚乙二醇的水溶液。常用的油溶剂为注射用大豆油。其质量应符合大豆油(供注射用)的标准。其他溶剂必须安全无害，用量应不影响疗效。Company LogoCompany Logo附加剂附加剂 附附加加剂剂一一般般有有渗渗透透压压调调节节剂剂、pHpH值值调调节节剂剂、增溶剂增溶剂、抗氧剂抗氧剂、抑菌剂抑菌剂等。等。抗抗氧氧剂剂有有亚亚硫硫酸酸钠钠、亚亚硫硫酸酸氢氢钠钠、焦焦亚亚硫硫酸酸钠钠等等。常常用用的的抑抑菌菌剂剂及及其其浓浓度度(g/ml)为为苯苯酚酚0.5%、甲酚甲酚0.3%、三氯叔丁醇、三氯叔丁醇0.5%等。等。抑抑菌菌剂剂用用量量应应能能抑抑制制注注射射液液内内微微生生物物的的生生长长。加加有有抑抑菌菌剂剂的的注注射射液液，仍仍应应用用适适宜宜的的方方法法灭灭菌菌。注注射射量量超超过过5ml的的注注射射液液，添添加加的的抑抑菌菌剂剂必必须须特特别审慎选择。别审慎选择。供供静静脉脉(除除另另有有规规定定外外)或或椎椎管管注注射射用用的的注注射射液液，均不得添加抑菌剂。均不得添加抑菌剂。Company LogoCompany Logo【装量】【装量差异】【可见异物】【无菌】【热原】/【细菌内毒素】【不溶性微粒】Company LogoCompany Logo（一）装量为保证注射用量不少于标示量，灌装标示装量为50ml与50ml以下的注射液时，应按下表适当增加装量。除另有规定外，供多次用量的注射液，每一容器的装量不得超过10次注射量，增加装量应能保证每次注射用量。Company LogoCompany Logo注注射射液液的的标标示示装装量量为为2ml2ml或或2ml2ml以以下下者者取取供供试试品品5 5支支，2ml2ml以以上上至至10ml10ml者者取取供供试试品品3 3支支，10ml10ml以以上上者者取取供供试品试品2 2支支开开启启时时注注意意避避免免损损失失，将将内内容容物物分分别别用用相相应应体体积积的的干干燥燥注注射射器器及及注注射射针针头头抽抽尽尽，然然后后注注入入标标化化的的量量具具内，在室温下内，在室温下检视检视；测测定定油油溶溶液液或或混混悬悬液液的的装装量量时时，应应先先加加温温摇摇匀匀，再再用用干干燥燥注注射射器器及及注注射射针针头头抽抽尽尽后后，同同前前法法操操作作，放放冷至室温检视，冷至室温检视，每支注射液的装量均每支注射液的装量均不得少于其标示量不得少于其标示量。注注射射液液的的标标示示装装量量为为50ml50ml以以上上至至500ml500ml的的按按最最低低装装量检查法量检查法(附录附录 F)F)检查，应符合规定。检查，应符合规定。检查方法Company LogoCompany Logo（二）装量差异供试品5瓶(支)的中每瓶(支)的装量与平均装量相比，应该符合规定。如有一瓶(支)不符合规定，应该另取10瓶(支)复试，均应符合规定。凡检查含量均匀度的注射用无菌粉末，一般不再检查装量差异。Company LogoCompany Logo（三）可见异物 存在于注射液、滴眼液中，在规定条件下目视可以观察到的不溶性物质，其粒度或长度通常大于50m。灯检法 光散射法结果判断溶液型静脉用注射液、注射用浓溶液和滴眼剂20支(瓶)供试品中，均不得检出可见异物，如检出可见异物的供试品不超过1支(瓶)，应另取20支(瓶)同法检查，均不得检出。混悬型注射液和混悬型滴眼液20支(瓶)供试品中，均不得检出色块/纤毛等可见异物。Company LogoCompany Logo（四）无菌检查注射剂以及其他要求无菌的药品是否无菌的一种方法。对检查无影响的供试品 直接接种法 供试品对检查有干扰 薄膜过滤法Company LogoCompany Logo（五）热原/细菌内毒素 内毒素为外源性致热原，可激活中性粒细胞，使之释放出内源性热原质，作用于体温调节中枢引起机体发热。热原家兔法 细菌内毒素鲎试剂法原理 鲎的血变形细胞中含有高分子量凝固酶原和凝固蛋白原。前者经内毒素激活转化为具有活性的凝固酶，通过凝固酶的酶解作用将凝固蛋白原转变为凝固蛋白，凝固蛋白通过交联酶作用相互聚合而形成牢固的凝胶。Company LogoCompany Logo第三节 片剂和注射剂中药物的含量测定一、常见干扰及排除 糖类 硬脂酸镁 抗氧剂 加入掩蔽剂 加酸分解 加入弱氧化剂氧化 利用主药和抗氧剂紫外吸收光谱的差异进行测定 溶剂油 有机溶剂稀释法 萃取法 柱色谱法Company LogoCompany Logo（一）糖类淀粉、糊精、蔗糖、乳糖等是固体制剂的稀释剂，具有还原性，干扰氧化还原滴定：高锰酸钾法、溴酸钾法等。Company LogoCompany LogoFeSO4原料药采用KMnO4法FeSO4片剂 采用铈量法应用示例应用示例Company LogoCompany Logo【含量测定】取本品约0.5g，精密称定，加稀硫酸与新沸过的冷水各15ml溶解后，立即用高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)滴定至溶液显持续的粉红色。每1ml高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)相当于27.80mg的FeSO47H2O。【含量测定】取本品10片，置200ml量瓶中，加稀硫酸60ml与新沸过的冷水适量，振摇使硫酸亚铁溶解，用新沸过的冷水稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液30ml，加邻二氮菲指示液数滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于27.80mg的FeSO47H2O。Company LogoCompany Logo固体制剂常用的润滑剂，以硬脂酸镁(C36H70O4Mg)和棕榈酸镁(C32H62O4Mg)为主的混合物。l 配位常数：被测离子配位常数：被测离子-EDTA Mg2+-EDTA，不干扰不干扰l 调节调节pH或选择合适的指示剂或选择合适的指示剂l pH6.07.5，酒石酸，酒石酸(草酸草酸)可掩蔽。可掩蔽。（二）硬脂酸镁Mg2+干扰EDTA配位滴定；硬脂酸根干扰高氯酸非水滴定。干扰作用干扰消除方法Company LogoCompany Logo硬脂酸根硬脂酸根、苯甲酸盐苯甲酸盐、羧甲基纤维素钠羧甲基纤维素钠干扰高干扰高氯酸滴定氯酸滴定干扰消除方法l被测药物含量硬脂酸含量，干扰可以忽略；l 脂溶性有机碱性药物，碱化萃取分离后，滴定。无水草酸的醋酐溶液，与硬脂酸镁的镁离子形成沉淀，且游离的硬脂酸在醋酐溶液中不显酸性，以孔雀绿为指示剂，高氯酸为滴定液，适用于叔胺类药物或含氮杂环类药物的片剂测定。Company LogoCompany Logo硫酸奎宁片硫酸奎宁片Quinine Sulfate TabletsQuinine Sulfate Tablets 【含含量量测测定定】取取本本品品10片片，除除去去糖糖衣衣后后，精精密密称称定定，研研细细，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于硫硫酸酸奎奎宁宁0.3g），置置分分液液漏漏斗斗中中，加加氯氯化化钠钠0.5g与与0.1mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液10ml，混混匀匀，精精密密加加氯氯仿仿50ml，振振摇摇10分分钟钟，静静置置，分分取取氯氯仿仿液液，用用干干燥燥滤滤纸纸滤滤过过，精精密密量量取取续续滤滤液液25ml，加加醋醋酐酐5ml与与二二甲甲基基黄黄指指示示液液2滴滴，用用高高氯氯酸酸滴滴定定液液(0.1mol/L)滴滴定定，至至溶溶液液显显玫玫瑰瑰红红色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每1ml高高氯氯酸酸滴滴定定液液(0.1mol/L)相相当当于于19.57mg的的(C(C2020H H2424NN2 2OO2 2)2 2HH2 2SOSO4 42H2H2 2OO。应用示例应用示例【含量测定】取本品约2g，精密称定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg的(C20H24N2O2)2H2SO4。Company LogoCompany Logo（三）抗氧剂常用抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠及维生素C等碘量法溴量法铈量法亚硝酸钠法Company LogoCompany Logo3.1 加入掩蔽剂（丙酮或甲醛）Company LogoCompany Logo维生素维生素C注射液注射液 Vitamin C Injection【含含量量测测定定】精精密密量量取取本本品品适适量量（约约相相当当于于维维生生素素C C 0.2g），加加水水15ml与与丙丙酮酮2ml，摇摇匀匀，放放置置5分分钟钟，加加稀稀醋醋酸酸4ml与与淀淀粉粉指指示示液液1ml，用用碘碘滴滴定定液液(0.1mol/L)滴滴定定，至至溶溶液液显显蓝蓝色色并并持持续续30秒秒钟钟不不褪褪。每每1ml碘碘滴滴定定液液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6。安乃近注射液安乃近注射液 Metamizole Sodium Injection【含含量量测测定定】精精密密量量取取本本品品10ml，置置100ml量量瓶瓶中中，加加乙乙醇醇80ml，再再加加水水稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，立立即即精精密密量量取取10ml，置置锥锥形形瓶瓶中中，加加乙乙醇醇2ml、水水6.5ml与与甲甲醛醛溶溶液液0.5ml，放放置置1分分钟钟，加加盐盐酸酸溶溶液液(91000)1.0ml，摇摇匀匀，用用碘碘滴滴定定液液(0.1mol/L)滴滴定定（控控制制滴滴定定速速度度为为每每分分钟钟35ml），至至溶溶液液所所显显的的淡淡黄黄色色在在30秒秒 钟钟 内内 不不 褪褪。每每 1ml碘碘 滴滴 定定 液液(0.1mol/L)相相 当当 于于 17.57mg的的C13H16N3NaO4SH2O。应用示例应用示例Company LogoCompany Logo3.2 加酸分解 Na2S2O3+2HCl 2NaCl+H2S2O3(加热)SO2+H2O NaHSO3+HCl NaCl+H2SO3(加热)SO2+H2O应用示例应用示例磺胺嘧啶钠注射液Sulfadiazine Sodium Injection本品为磺胺嘧啶钠的灭菌水溶液。【规格】(1)2ml0.4g (2)5ml1g【含量测定】精密量取本品适量(约相当于磺胺嘧啶钠0.6g)，照永停滴定法(附录A)，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.23mg的C10H9N4NaO2S。Company LogoCompany Logo 永停滴定法用作重氮化法的终点指示时，调解R1使加于电极上的电压约为50mv。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸溶液(1 2)15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂-铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L或0.05mol/L)迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。Company LogoCompany Logo盐酸普鲁卡因胺注射液 Procainamide Hydrochloride Injection 本品为盐酸普鲁卡因胺的灭菌水溶液。【规格】(1)1ml0.1g (2)2ml0.2g (3)5ml0.5g (4)10ml1g【含量测定】精密量取本品5ml，加水40ml与盐酸溶液(12)10ml，迅速煮沸，立即冷却至室温，照永停滴定法(附录 A)，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.18mg的C13H21N3OHCl。Company LogoCompany Logo3.3 加入弱氧化剂氧化(H202和HNO3)要求加入的弱氧化剂能将抗氧剂(亚硫酸盐等)氧化，而不氧化被测药物，不消耗滴定液。Company LogoCompany Logo306nm243nm3.4 UV吸收谱差消除干扰Company LogoCompany Logo盐酸异丙嗪片【含量测定】取本品10片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸异丙嗪12.5mg)，置200ml量瓶中，加盐酸溶液(9 1000)适量，振摇15分钟使盐酸异丙嗪溶解，再加盐酸溶液(9 1000)稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液10 ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照 紫外-可见分光光度法（附录 A），在249nm的波长处测定吸收度，按C17H20N2SHCl的吸收系数()为910计算，即得。盐酸异丙嗪注射液【含量测定】精密量取本品2ml，置100ml量瓶中，用盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置另一100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录 A），在299nm的波长处测定吸收度，按C17H20N2SHCl的吸收系数()为108计算，即得。Company LogoCompany Logo甲萘氢醌二磷酸酯钠注射液(USP)USP)MenadiolMenadiol Sodium Injection Sodium Injection本品为灭菌水溶液。含苯甲酸或苯酚抑菌剂及焦亚硫酸本品为灭菌水溶液。含苯甲酸或苯酚抑菌剂及焦亚硫酸钠。钠。【含量测定】精密移取本品适量，用精密移取本品适量，用0.1mol/L盐酸稀释盐酸稀释配制为每配制为每1ml含甲萘氢醌二磷酸酯钠含甲萘氢醌二磷酸酯钠50 g的溶液，取的溶液，取上述溶液上述溶液10ml置于置于60ml分液漏斗中，用分液漏斗中，用15ml三氯甲三氯甲烷提取三次，弃去有机层，取水层离心分离后作为供烷提取三次，弃去有机层，取水层离心分离后作为供试液，于试液，于290nm处测定其吸收值处测定其吸收值A290nm。另取甲萘氢另取甲萘氢醌二磷酸酯钠对照品同法测定，按计算含量，即得。醌二磷酸酯钠对照品同法测定，按计算含量，即得。萃取分离后萃取分离后UV测定测定3.5 其它方法Company LogoCompany Logo（四）溶剂油 脂溶性药物(如甾体激素类)常配制成油溶液。溶剂油对以水为溶剂的分析方法可产生影响：溶液浑浊，影响UV测定、容量滴定、HPLC测定。4.1 有机溶剂稀释法适用范围 药物标示量高，稀释倍数大或测定溶剂对油溶解性好，溶剂油对测定无干扰。Company LogoCompany Logo应用示例应用示例癸氟奋乃静注射液 Fluphenazine Decanoate Injection本品为癸氟奋乃静的灭菌油溶液。【规格】1ml25mg【含量测定】精密量取本品5ml（约相当于癸氟奋乃静0.125g），加冰醋酸20ml，振摇，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于29.59mg的C32H44F3N3O2S。Company LogoCompany Logo复方己酸羟孕酮注射液复方己酸羟孕酮注射液Compound Hydroxyprogesterone Caproate Injection本品为己酸羟孕酮和戊酸雌二醇的灭菌油溶液。本品为己酸羟孕酮和戊酸雌二醇的灭菌油溶液。【规格规格】1ml1ml己酸羟孕酮己酸羟孕酮250mg250mg与戊酸雌二醇与戊酸雌二醇5mg5mg【含量测定含量测定】照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录 D D）测定。测定。色色谱谱条条件件与与系系统统适适应应性性试试验验 用用十十八八烷烷基基硅硅烷烷键键合合硅硅胶胶为为填填充充剂剂；以以甲甲醇醇-水水(8515)(8515)为为流流动动相相；流流速速每每分分钟钟0.7ml0.7ml；检检测测波波长长为为225nm225nm。己己酸酸羟羟孕孕酮酮与与戊戊酸酸雌雌二二醇的分离度应符合要求。醇的分离度应符合要求。测测定定法法用用内内容容量量移移液液管管精精密密量量取取本本品品1.0ml1.0ml，置置25ml25ml量量瓶瓶中中，加加甲甲醇醇溶溶解解并并稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取1.0ml1.0ml，置置10ml10ml量量瓶瓶中中，加加甲甲醇醇稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，作作为为戊戊酸酸雌雌二二醇醇供供试试品品溶溶液液；精精密密量量取取1.0ml1.0ml，置置50ml50ml量量瓶瓶中中，加加甲甲醇醇稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，作作为为己己酸酸羟羟孕孕酮酮供供试试品品溶溶液液；取取此此两两种种供供试试品品溶溶液液各各10l10l，分分别别注注入入高高效效液液相相色色谱谱仪仪，记记录录色色谱谱图图，量量取取峰峰面面积积。另另分分别别取取戊戊酸酸雌雌二二醇醇与与己己酸酸羟羟孕孕酮酮对对照照品品适适量量，精精密密称称定定，加加甲甲醇醇使使溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml约约含含己己酸酸羟羟孕孕酮酮与与戊戊酸酸雌雌二二醇醇各各0.02mg0.02mg的的溶溶液液，作作为为对对照照品品溶溶液液，取取对对照照品品溶溶液液10l 10l，依依法法测测定定，按按外外标标法法以以峰峰面面积积计算，即得。计算，即得。Company LogoCompany Logo4.2 萃取法本品为丙酸睾酮的灭菌油溶液。【规格】(1)1ml10mg (2)1ml25mg (3)1ml50mg 【含量测定】HPLC测定 ODS柱；甲醇-水(7030)流动相；检测波长254nm。柱效和分离度应符合要求。内标溶液的制备 取苯丙酸诺龙约40mg，精密称定，置25ml量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 用内容量移液管精密量取本品适量(约相当于丙酸睾酮50mg)，置50ml 量瓶中，用乙醚分数次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加乙醚稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml 置具塞离心管中，在温水浴内使乙醚挥散；用甲醇振摇提取4次(第13次各5ml，第4次3ml)，每次振摇10分钟后离心15分钟，并用滴管将甲醇液移置25ml 量瓶中，合并提取液，精密加入内标溶液5ml,用甲醇稀释至刻度，摇匀，取510l 注入液相色谱仪，测定，即得。丙酸睾酮注射液 Testosterone Propionate ICompany LogoCompany Logo4.3 柱色谱法USP测定丙酸睾酮注射液油溶液反相正相丙酸睾酮，甾醇，三萜类丙酸睾酮乙醇稀释紫外测定Company LogoCompany Logo二、含量测定应用示例（一）盐酸苯海拉明制剂的含量测定盐酸苯海拉明 Diphenhydramine Hydrochloride本品为N,N-二甲基-2-(二苯基甲氧基)乙胺盐酸盐。Company LogoCompany Logo含量测定方法Company LogoCompany Logo1.原料药测定【含量测定】取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml与醋酐4ml溶解后，再加醋酸汞试液4ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于29.18 mg的C17H21NOHCl。按干燥品计算，含C17H21NOHCl不得少于99.0%。Company LogoCompany Logo2.片剂含量测定2.1 酸性染料比色法(2000版Ch.P)原理 碱性药物在酸性条件下与酸性染料溴甲酚绿结合生成有色的离子对，经氯仿提取后，在415nm波长处有最大吸收，利用比色法测定含量。【性状】本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后显白色【规格】25 mg 含量要求：本品含盐酸苯海拉明(C17H21NOHCl)应为标示量的93.0%107.0%。Company LogoCompany Logo【含量测定】对照品溶液的制备精密称取盐酸苯海拉明对照品50mg，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品10片，除去糖衣后精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸苯海拉明50mg)置100ml量瓶中，加水适量使盐酸苯海拉明溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置另一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。溴甲酚绿溶液的制备 取溴甲酚绿50mg，加0.1mol/L氢氧化钠溶液0.7ml溶解后，加0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液50ml，0.1mol/L盐酸溶液3.5ml，加水稀释成100ml，摇匀，滤过，pH值为3.8。Company LogoCompany Logo测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置分液漏斗中，各加水5ml与溴甲酚绿溶液3.0ml，摇匀，分别精密加氯仿10ml，振摇提取3分钟，静置分层后，分取氯仿液至具塞离心管中，离心(2500转/分)10分钟，取澄清的氯仿液，照分光光度法(附录 B)，在415nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。Company LogoCompany Logo2.2 高效液相色谱法(2005版Ch.P)【含量测定】照高效液相色谱法(附录D)测定 色谱条件与系统适用性试验 用氰基键合相硅胶为填充剂；以乙腈-水-三乙胺(50:50:0.5)（用冰醋酸调节pH值至6.5）为流动相；检测波长为258 nm。理论塔板按盐酸苯海拉明峰计算不低于5000。盐酸苯海拉明峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。测定法 取本品20片，除去包衣后精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸苯海拉明50 mg)，置100 ml量瓶中，加水适量使盐酸苯海拉明溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸苯海拉明对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1 ml中约含有0.5 mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。Company LogoCompany Logo3.注射剂含量测定【性状】本品为无色的澄明液体【规格】1ml:20 mg 含量要求：本品含盐酸苯海拉明(C17H21NOHCl)应为标示量的95.0%105.0%。阴离子表面活性剂滴定法（两相滴定法）(2000版Ch.P)反相高效液相色谱法 (2005版Ch.P)Company LogoCompany Logo3.1 阴离子表面活性剂（烷基磺酸盐）滴定法 原理 使用阴离子表面活性剂(Anion Surfactant)溶液作为滴定剂的方法。常用于呈阳离子态的有机碱性药物的含量测定。终点前终点时Company LogoCompany Logo【含量测定】精密量取本品适量(约相当于盐酸苯海拉明20mg)，置具塞锥形瓶中，加水20ml，加氯仿50ml与稀硫酸5ml，再加二甲基黄-溶剂蓝19混合指示液1ml，用磺基丁二酸钠二辛酯试液滴定，至近终点终点时强力振摇，继续滴定至氯仿层由绿色转变为红灰色；另精密称取盐酸苯海拉明对照品约20mg，照上述方法自“置具塞锥形瓶中”起，依法测定，根据二者消耗磺基丁二酸钠二辛酯试液的量(ml)的比值计算，即得。Company LogoCompany Logo阴离子表面活性剂滴定法测定的其它药物 克霉唑软膏、栓、溶液 盐酸胺碘酮片 硝酸益康唑软膏 盐酸氯丙那林片(含量及均匀度)盐酸苯海索片(含量及均匀度)Company LogoCompany Logo盐酸苯海索片(Benzhexol Hydrochloride Tablets)【含量测定】取本品25片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸苯海索20mg)，置具塞锥形瓶中，加水8ml、稀硫酸3ml和氯仿25ml，再加二甲基黄-亚甲蓝混合指示液0.5ml，用0.25磺基丁二酸钠二辛酯溶液滴定，至近终点时强力振摇，继续滴定至氯仿层由绿色转变为红灰色；另精密称取盐酸苯海索对照品20mg，照上述方法自“置具塞锥形瓶中”起，依法测定，根据二者消耗0.25磺基丁二酸钠二辛酯溶液的量(ml)的比值计算，即得。Company LogoCompany Logo（二）盐酸吗啡制剂的含量测定盐酸吗啡 Morphine Hydrochloride本品为17-甲基-3-羟基-4,5-环氧-7,8-二脱氢吗啡喃-6-醇盐酸盐三水合物。Company LogoCompany LCompany LogoCompany Logo（三）阿片中吗啡的含量测定阿 片 Opium本品为罂粟科植物罂粟的未成熟蒴果被划破后渗出的乳状液经干燥制成。其主要成份为吗啡、可待因、罂粟碱、那可汀、蒂巴因。【性状】本品为棕色或暗棕色膏状物。新鲜品略柔软，存放日久，则变坚硬或脆。臭特殊，味即苦。含量限度：含吗啡按无水吗啡(C17H19NO3)计算，不得少于9.5%。Company LogoCompany Logo【含量测定】照高效液相色谱法(附录D)测定 色谱条件与系统适用性试验 用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.0025mol/L庚烷磺酸钠水溶液-乙腈(5:5:2)为流动相；检测波长为220 nm。理论塔板按吗啡峰计算不低于1000。固相萃取柱色谱适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；以测定法中相同的处理条件和洗脱条件试验。精密量取浓度为每1ml中含0.5mg的吗啡对照品0.5ml，置处理后的固相萃取柱上，同法洗脱，用5ml量瓶收集至刻度，摇匀。分别精密量取该洗脱液与含量测定项下的对照品溶液各10l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。洗脱液与对照品色谱图中吗啡峰面积的比值应在0.971.03之间。Company LogoCompany Logo测定法 (SPE柱准备)取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水(3:1)与水5ml冲洗，再用pH值约为9的氨水溶液冲洗至流出液pH值约为9(碱性)，待用。(供试品溶液的制备)取本品约5g，研细(过五号筛)，精密称取约1g,置200ml量瓶中，加5%醋酸溶液适量，超声处理30分钟使吗啡溶液，取出，放至室温，用5%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.5ml，置上述固相萃取柱上，加氨溶液(12)2滴(调pH9)，摇匀(碱化供试液上SPE柱)，待溶剂滴尽后，用水20ml冲洗，加含20%甲醇的5%醋酸溶液洗脱，收集洗脱液5.0ml，摇匀，精密吸取洗脱液10l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取吗啡对照品适量，精密称定，用含20%甲醇的5%醋酸溶液溶解并定量稀释成每1ml约含吗啡0.05mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。Company LogoCompany Logo第四节 复方制剂分析复方制剂 含有2个或2个以上药物成分的制剂。分析特点不仅要考虑制剂附加剂对测定的影响，同时要考虑药物成