细菌性疾病监测标本采集常见问题及技术要求.ppt

免疫规划针对细菌性传染病样本免疫规划针对细菌性传染病样本的采集、保存及运输的采集、保存及运输李漫时李漫时2015-06-052015-06-051 山东省山东省 2012-20152012-2015 年流脑健康年流脑健康 人群带菌率调查结果人群带菌率调查结果市市 地地2012/20132012/2013201320132013/20142013/201420152015样本数样本数/初筛株初筛株阳性率阳性率(%)(%)样本数样本数/初筛株初筛株阳性率阳性率(%)(%)样本数样本数/初筛数初筛数 阳性率阳性率(%)(%)样本数样本数/初筛株初筛株阳性率阳性率(%)(%)济南济南420/8420/81.91.9210/1210/10.480.48420/17420/170.950.95210/5210/50.90.9潍坊潍坊420/20420/201.191.19210/7210/71.91.9420/50420/500.710.71210/12210/120 0济宁济宁420/41420/411.191.19210/6210/60.480.48420/28420/280.240.24210/12210/120 0威海威海420/19420/190.480.48210/1210/13 30 0420/18420/180.480.48210/7210/70 0临沂临沂420/50420/503.813.81210/1210/12 22.862.86420/53420/531.431.43210/16210/160.90.9德州德州420/57420/575.05.0210/9210/92.382.38420/54420/541.431.43210/12210/120 0合合 计计252025202.262.26126012601.351.35252025200.870.87126012600.3170.3172合格样本采集的前期工作合格样本采集的前期工作n明确采样目的：明确采样目的：通过实验室检测手段，对不明原因的病人或通过实验室检测手段，对不明原因的病人或者人群进行确诊和溯源。以达到早发现、早诊断、早治疗、者人群进行确诊和溯源。以达到早发现、早诊断、早治疗、早隔离的目的。早隔离的目的。n采前需知：采前需知：样本种类？采集时间？信息？采集方法？样本样本种类？采集时间？信息？采集方法？样本 量量？保存？送样？保存？送样？n做好准备工作：做好准备工作：落实参加人员（培训）、样本采集所需器材落实参加人员（培训）、样本采集所需器材物品、防护措施、样本的运送方式及工具。物品、防护措施、样本的运送方式及工具。n认真落实并实施：认真落实并实施：职责划分与落实、沟通协调（省市间、市职责划分与落实、沟通协调（省市间、市县间、流调人员与检验人员间），结果反馈。县间、流调人员与检验人员间），结果反馈。3样本采集的要求样本采集的要求 n及时性及时性？病源样本、脑脊液样本、血清样本？病源样本、脑脊液样本、血清样本n合理性？双份血（病例的急性期与恢复期血合理性？双份血（病例的急性期与恢复期血清；免疫成功率血清）清；免疫成功率血清）n信息的清晰与信息的清晰与完整性？归属关系，采样日期，完整性？归属关系，采样日期，检测样本编号与样本来源者一致性问题检测样本编号与样本来源者一致性问题n采样部位的准确性？采样部位的准确性？n样本量样本量足够？脑脊液、血清足够？脑脊液、血清n密闭性：防治泄漏密闭性：防治泄漏n避免污染：废弃物的处理避免污染：废弃物的处理4采前准备（一）采前准备（一）n人员的培训：人员相对固定（尤其是实验人员的培训：人员相对固定（尤其是实验 室人员）；室人员）；n采样器材的准备；采样器材的准备；n采样基本信息登记表；采样基本信息登记表；n个人防护措施：隔离衣、口罩、手套、鞋套等个人防护措施：隔离衣、口罩、手套、鞋套等n样品的运输和保存措施样品的运输和保存措施；5采前准备（二）采前准备（二）u鼻咽拭子鼻咽拭子：平板、无菌咽拭子、压舌板；：平板、无菌咽拭子、压舌板；u血样本血样本：平板（增菌液）、一次性注射器、采血：平板（增菌液）、一次性注射器、采血管、止血带、无菌棉签；管、止血带、无菌棉签；u脑脊液脑脊液：平板、无菌保存管；：平板、无菌保存管；u信息记录信息记录：油性笔、签字笔、采样单；：油性笔、签字笔、采样单；u样品保存措施样品保存措施：冰排、冷藏箱、热水袋等（视样：冰排、冷藏箱、热水袋等（视样本种类选择）；本种类选择）；u其他其他：试管架、剪刀、酒精：试管架、剪刀、酒精/碘酒、胶布、酒精碘酒、胶布、酒精灯、防护用品、垃圾袋等。灯、防护用品、垃圾袋等。6样本的采集样本的采集n样本的采集样本的采集n样本的处理样本的处理n常见问题及要求常见问题及要求7流流 脑脑nCSFCSF样本样本 如果为疑似脑膜炎病例如果为疑似脑膜炎病例,脑脊液是分离和鉴别病原菌的最脑脊液是分离和鉴别病原菌的最佳样本。采集过程应无菌操作，至少佳样本。采集过程应无菌操作，至少1 13mL3mL。可用。可用0.10.10.5 0.5 mLmL直接接种直接接种巧克力或双抗巧克力巧克力或双抗巧克力平板，其余应立即送至微生平板，其余应立即送至微生物学实验室进行样本处理与保存。物学实验室进行样本处理与保存。适宜检测的样本为脑脊液（适宜检测的样本为脑脊液（CSFCSF）、血液、皮肤黏膜瘀点）、血液、皮肤黏膜瘀点或瘀斑组织液及鼻咽拭子。或瘀斑组织液及鼻咽拭子。8流流 脑脑n血液样本血液样本 无菌操作抽取发热患者全血无菌操作抽取发热患者全血5 510 mL10 mL，取，取0.10.10.5ml0.5ml直接接种巧克力或双抗巧克力平板，直接接种巧克力或双抗巧克力平板，1 mL1 mL用来作血用来作血清学检测，其余采集后应立即注入清学检测，其余采集后应立即注入30ml30ml增菌用的葡萄糖增菌用的葡萄糖肉汤增菌液内。患者应采集发病早期和恢复期双份全血肉汤增菌液内。患者应采集发病早期和恢复期双份全血各约各约1mL1mL，检测血清中特异性抗体滴度。，检测血清中特异性抗体滴度。n瘀点或瘀斑瘀点或瘀斑 选取患者皮肤上的新鲜瘀点或瘀斑，选取患者皮肤上的新鲜瘀点或瘀斑，生理盐水消毒生理盐水消毒后用针头挑破，挤出组织液，用消毒的玻片直接蘸取组后用针头挑破，挤出组织液，用消毒的玻片直接蘸取组织液涂片，革兰氏染色镜检。也可用无菌棉签沾取组织织液涂片，革兰氏染色镜检。也可用无菌棉签沾取组织液接种含双抗的葡萄糖肉汤管中，送至微生物学实验室液接种含双抗的葡萄糖肉汤管中，送至微生物学实验室进行检测。进行检测。9流流 脑脑鼻咽拭子样本的采集鼻咽拭子样本的采集：对病人密切接触者和健康人群进行带菌检验时采集鼻咽拭子。对病人密切接触者和健康人群进行带菌检验时采集鼻咽拭子。采样时令受检者张开口，用无菌棉拭子探入口腔内悬雍垂后面的鼻咽部位，涂抹该采样时令受检者张开口，用无菌棉拭子探入口腔内悬雍垂后面的鼻咽部位，涂抹该部位粘膜分泌物，直接接种双抗巧克力平板，也可将咽拭子放入液体双抗增菌管内，一部位粘膜分泌物，直接接种双抗巧克力平板，也可将咽拭子放入液体双抗增菌管内，一送至微生物学实验室进行检测。送至微生物学实验室进行检测。注：鼻咽拭子相比口咽拭子可以产生较高的阳性结果，因此咽拭子采集部位很重要注：鼻咽拭子相比口咽拭子可以产生较高的阳性结果，因此咽拭子采集部位很重要10咽拭子采集咽拭子采集11流流 脑脑n注意事项注意事项 脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌对温度较为敏感对温度较为敏感，温度过高或过低均可，温度过高或过低均可导致菌株死亡。采集样本后，应尽量做到旁床接种，若无导致菌株死亡。采集样本后，应尽量做到旁床接种，若无可能则应在最短时间内送至实验室进行接种培养。可能则应在最短时间内送至实验室进行接种培养。接种过的培养基可在室温（接种过的培养基可在室温（20202525）放置）放置4 46 6小小时，运送温度不低于时，运送温度不低于1818不高于不高于3737。切记不能低温运送切记不能低温运送。用于进行血清抗体及分子生物学检测的用于进行血清抗体及分子生物学检测的CSFCSF和血液样本应和血液样本应冷藏条件下送检。冷藏条件下送检。12百日咳百日咳 适宜检测的样本为脑脊液（适宜检测的样本为脑脊液（CSFCSF）、鼻咽拭子）、鼻咽拭子 鼻咽抽吸物、血液。鼻咽抽吸物、血液。咳碟法咳碟法 用咳碟法采集样品时，应在病人咳嗽时，将用咳碟法采集样品时，应在病人咳嗽时，将包姜包姜(Bordet(BordetGengouGengou）或炭琼脂培养基或炭琼脂培养基平板打开放在病人口前平板打开放在病人口前10cm10cm处，使病人对准平板表面咳嗽数次，直接收集病人咳出处，使病人对准平板表面咳嗽数次，直接收集病人咳出的飞沫。然后盖好平皿盖送检。平板暴露时间以的飞沫。然后盖好平皿盖送检。平板暴露时间以15s15s为宜。为宜。13百日咳百日咳 鼻咽拭子及其保存液：鼻咽拭子及其保存液：聚丙烯纤维头的塑料拭子聚丙烯纤维头的塑料拭子 由于百日咳多发于儿童，所以采样时，病儿的头部斜依由于百日咳多发于儿童，所以采样时，病儿的头部斜依于母亲的胸怀，母亲以双手固定病儿的头部，医师以右手于母亲的胸怀，母亲以双手固定病儿的头部，医师以右手执棉拭子，左手按病人的头顶部，使顶端稍向下弯的棉拭执棉拭子，左手按病人的头顶部，使顶端稍向下弯的棉拭子自前鼻孔进入，沿下鼻道的底部向缓缓深入，由于鼻道子自前鼻孔进入，沿下鼻道的底部向缓缓深入，由于鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发生外伤出血。待棉拭子顶呈弧形，不可用力过猛，以免发生外伤出血。待棉拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，将棉拭子稍留片刻，以待反射性咳端到达鼻咽腔后壁时，将棉拭子稍留片刻，以待反射性咳嗽，然后轻轻旋转一周，缓缓取出棉拭子接种平板后放入嗽，然后轻轻旋转一周，缓缓取出棉拭子接种平板后放入保存液中。保存液中。14n 百日咳百日咳15培养平板底部贴标签，现场划线法接种至碳培养平板底部贴标签，现场划线法接种至碳琼脂培养基上，接种后鼻拭子放回带有转运琼脂培养基上，接种后鼻拭子放回带有转运培养基的拭子管中。培养基的拭子管中。注意：将接触鼻咽后壁的拭子顶端划线，而注意：将接触鼻咽后壁的拭子顶端划线，而非拭子头侧面划线。非拭子头侧面划线。百日咳百日咳24小时内，小时内，20 运输运输鼻咽拭子本登记表5%CO2,37 培养培养7-14天天 Genebox接种后的鼻拭子随同培养基平板冷藏运送至实验室，接种后的鼻拭子随同培养基平板冷藏运送至实验室，-20 以下以下低温冻存低温冻存待送检。待送检。16百日咳百日咳病人血清样本病人血清样本 无菌操作抽取患者早期和恢复期双份无菌操作抽取患者早期和恢复期双份全血各约全血各约1 mL1 mL放入无菌血清管中，旋紧盖放入无菌血清管中，旋紧盖子，做好标记，尽快送检。检测血清中特异子，做好标记，尽快送检。检测血清中特异性抗体滴度。性抗体滴度。17白白 喉喉 适宜检测的样本为血液、咽拭子、假膜。适宜检测的样本为血液、咽拭子、假膜。n病人咽拭子样本病人咽拭子样本：用无菌长柄棉拭子从疑似患者咽喉假膜用无菌长柄棉拭子从疑似患者咽喉假膜边缘蘸取样本或同时采取鼻咽拭子接种血平板或边缘蘸取样本或同时采取鼻咽拭子接种血平板或亚蹄酸钾血亚蹄酸钾血平板平板送检。送检。n带菌者或疑似病人咽拭子样本带菌者或疑似病人咽拭子样本：由于未见到假膜，由于未见到假膜，故应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物接种亚蹄故应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物接种亚蹄酸钾血平板送检。酸钾血平板送检。n病人血清样本病人血清样本：无菌操作抽取患者早期和恢复期双无菌操作抽取患者早期和恢复期双份全血各约份全血各约1 mL1 mL放入无菌血清管中，旋紧盖子，做放入无菌血清管中，旋紧盖子，做好标记，尽快送检待检。好标记，尽快送检待检。1920白白 喉喉 注意事项注意事项：在鼻咽拭子样本采集前在鼻咽拭子样本采集前1212小时内，患者口腔不小时内，患者口腔不可用防腐剂（如漱口剂等）或用其涂抹病灶局部，可用防腐剂（如漱口剂等）或用其涂抹病灶局部，采样时应避免触及口腔粘膜与唾液。采样时应避免触及口腔粘膜与唾液。由于白喉杆菌在棉拭子上生存时间不长，易于由于白喉杆菌在棉拭子上生存时间不长，易于死亡，故样本采集后需立即接种。不能立即接种，死亡，故样本采集后需立即接种。不能立即接种，应将样本侵于无菌生理盐水或应将样本侵于无菌生理盐水或1515甘油生理盐水中甘油生理盐水中保存，尽快送检。保存，尽快送检。21样本的保存与运送（一）样本的保存与运送（一）n疑似菌株疑似菌株 保存保存：将分离出的疑似菌株菌落保存在无菌牛：将分离出的疑似菌株菌落保存在无菌牛 奶冻存管中，旋紧盖子并用封口膜封口，奶冻存管中，旋紧盖子并用封口膜封口，贴好标签，贴好标签，-20以下保存，并尽快送检。以下保存，并尽快送检。运送运送：将填写完整的采样单及菌株初筛实验记录，：将填写完整的采样单及菌株初筛实验记录，与冷冻条件下的菌种保存管一起送检。在未与冷冻条件下的菌种保存管一起送检。在未 落实菌株送检成功信息前，应保存菌株，以落实菌株送检成功信息前，应保存菌株，以 防菌株遗失。防菌株遗失。22样本的保存与运送（二）样本的保存与运送（二）脑脊液样本（脑脊液样本（CSF）：）：保存保存：将采集好的样本存放于无菌冻存将采集好的样本存放于无菌冻存 管中管中-20以下低温冻存，并尽快送检。以下低温冻存，并尽快送检。运送运送：将填写完整的采样单及样本冻存管将填写完整的采样单及样本冻存管 于冷藏（冻）条件下一起送检。于冷藏（冻）条件下一起送检。运送过程中运送过程中 应避免泄露。应避免泄露。23样本的保存与运送（三）样本的保存与运送（三全血及血清样本：全血及血清样本：运送：运送：因采集的全血样本要求不使用抗凝剂，所因采集的全血样本要求不使用抗凝剂，所 以在运输过程中应避免剧烈震荡，防止溶血。以在运输过程中应避免剧烈震荡，防止溶血。分离：分离：全血样本在全血样本在2-8 冷藏时间不应超过冷藏时间不应超过24h，应尽快分离血清。分装血清样本时，要贴好标签，应尽快分离血清。分装血清样本时，要贴好标签，避免交叉污染，于避免交叉污染，于-20以下冻存待检。以下冻存待检。24 样本的保存与运送（四）样本的保存与运送（四）百日咳鼻咽拭子（保存液）百日咳鼻咽拭子（保存液）：保存保存：将采集好的样本存放于装有保存液的将采集好的样本存放于装有保存液的 无菌冻存管中无菌冻存管中-20以下低温冻存且尽快以下低温冻存且尽快 送检。送检。运送运送：将填写完整的采样单及样本冻存管于将填写完整的采样单及样本冻存管于 冷藏（冻）条件下一起送检。冷藏（冻）条件下一起送检。运送过程中运送过程中 应避免泄露。应避免泄露。25 26