ABO、RH-血型系统及鉴定.ppt

ABO、RH 血型系统及鉴定血型系统及鉴定Company LogoCompany Logo血型概述血型概述 血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一。特征之一。ABO血型系统（血型系统（blood group system）和）和Rh血型系统是红细胞的血型系统是红细胞的2大血型抗大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型鉴定和交叉配血是保证输血安全重要意义。血型鉴定和交叉配血是保证输血安全的主要措施。的主要措施。Company LogoCompany Logo主要内容主要内容uABO血型系统血型系统nABOABO血型系统背景血型系统背景nABOABO血型系统抗原血型系统抗原nABOABO血型系统抗体血型系统抗体nABOABO血型系统亚型血型系统亚型uABO血型鉴定血型鉴定 n检测原理检测原理n鉴定方法鉴定方法n方法学评价方法学评价n质量保证质量保证n临床意义临床意义uRH血型系统血型系统nRHRH血型系统的命名血型系统的命名nRHRH血型系统血型系统抗原抗原nRHRH血型系统抗体血型系统抗体uRH血型鉴定血型鉴定 nRHRH血型检测方法及检测血型检测方法及检测原理原理n方法学评价方法学评价n质量保证质量保证n临床意义临床意义Company LogoCompany LogoABO血型系统背景血型系统背景ABO血型系统血型系统-免疫原性最强免疫原性最强 1900 1900年，出生于奥地利的美国免疫学家年，出生于奥地利的美国免疫学家KarKarl l Landsteiner Landsteiner(1868-1943(1868-1943年年)发现不同个体的红细胞膜表面发现不同个体的红细胞膜表面A A、B B血型抗（血型抗（bloodblood-group antigen-group antigen）和血清中抗）和血清中抗A A、抗、抗B B血型抗体（血型抗体（blood-groupblood-group antibody antibody）各不相同，其分布具有一定的规律性。根据红细胞）各不相同，其分布具有一定的规律性。根据红细胞膜上是否存在膜上是否存在A A、B B抗原及血清中是否存在抗抗原及血清中是否存在抗A A、抗、抗B B抗体，可将人抗体，可将人类血型分为类血型分为A A、B B、ABAB和和O O型。红细胞膜表面只有型。红细胞膜表面只有A A抗原者为抗原者为A A型，型，其血清中通常存在抗其血清中通常存在抗B B抗体；红细胞表面只有抗体；红细胞表面只有B B抗原者为抗原者为B B型，其型，其血清中通常存在抗血清中通常存在抗A A抗体；红细胞膜表面同时具有抗体；红细胞膜表面同时具有A A抗原抗原B B抗原者抗原者为为ABAB型；红细胞膜上既无型；红细胞膜上既无A A抗原又无抗原又无B B抗原者为抗原者为O O型。型。Company LogoCompany LogoABO血型系统抗原血型系统抗原组成和遗传组成和遗传 ABOABO血型系统抗原是存在于红细胞膜上的一种糖蛋白，由多肽血型系统抗原是存在于红细胞膜上的一种糖蛋白，由多肽和糖链组成。在人类的遗传特性中有一对分别来自母亲和父亲的和糖链组成。在人类的遗传特性中有一对分别来自母亲和父亲的A A、B B、O O血型基因（血型基因（blood types geneblood types gene）,主要功能是调控血型抗原的主要功能是调控血型抗原的合成，表型即所检测到的红细胞血型。合成，表型即所检测到的红细胞血型。A A和和B B基因是显性基因，基因是显性基因，O O基基因则是隐性基因。因此，表型为因则是隐性基因。因此，表型为A A的个体其基因型可能是的个体其基因型可能是AAAA或或AOAO，表型为表型为B B的个体其基因型可能是的个体其基因型可能是BBBB或或BOBO。A A血型和血型和B B血型的主要抗原血型的主要抗原成分分别由成分分别由A A、B B基因调控。除基因调控。除ABOABO血型基因外，存在于血型基因外，存在于ABOABO各型红各型红细胞膜上的细胞膜上的H H抗原是形成抗原是形成A A、B B血型抗原的结构基础，血型抗原的结构基础，H H抗原又称抗原又称H H物物质，受质，受H H基因的调控，基因的调控，H H基因的遗传与基因的遗传与ABOABO基因无关。基因无关。H H物质抗原性物质抗原性较弱，血清中一般测不出较弱，血清中一般测不出H H抗体。妊娠抗体。妊娠5-65-6周的胎儿红细胞已能测周的胎儿红细胞已能测出出ABOABO血型抗原。新生儿血型抗原。新生儿ABOABO血型的抗原性较弱，约为成人的血型的抗原性较弱，约为成人的20%20%，以后随年龄的增长而不断增强，以后随年龄的增长而不断增强，2020岁左右到达高峰，进入老年期岁左右到达高峰，进入老年期逐渐减低。人的逐渐减低。人的ABOABO血型抗原一般终身不变。血型抗原一般终身不变。Company LogoCompany LogoABO血型系统抗原血型系统抗原组成和遗传组成和遗传 血型血型 红细胞膜抗原胞膜抗原 血血清清中抗体中抗体 A A 抗B B B 抗A AB A,B -O -抗A，抗B表表1 1 人类人类ABOABO血型系统血型系统血型（表型）血型（表型）基因型基因型血型（表型）血型（表型）基因型基因型 A AA,AO AB AB B BB,BO O OO表表2 ABO2 ABO血型的表型与基因型血型的表型与基因型Company LogoCompany LogoABO血型系统抗原血型系统抗原分布分布 A A、B B、H H抗原主要存在于红细胞膜上。同时也分布抗原主要存在于红细胞膜上。同时也分布在白细胞、血小板及其他组织细胞上。组织细胞合成在白细胞、血小板及其他组织细胞上。组织细胞合成并分泌的水溶性并分泌的水溶性A A、B B、H H血型抗原多为半抗原，称为血血型抗原多为半抗原，称为血型物质（型物质（blood-group substanceblood-group substance）,血型物质广泛存血型物质广泛存在于人体的各种体液和分泌物中，以唾液中含量最高，在于人体的各种体液和分泌物中，以唾液中含量最高，其次是血清、尿液、精液、羊水等。体液中含有血型其次是血清、尿液、精液、羊水等。体液中含有血型物质者为分泌型，体液中不含血型物质者为非分泌型。物质者为分泌型，体液中不含血型物质者为非分泌型。血型物质具有与相应抗体反应的性质，测定唾液血型血型物质具有与相应抗体反应的性质，测定唾液血型物质可协助鉴定物质可协助鉴定ABOABO血型，检查羊水血型物质可以预测血型，检查羊水血型物质可以预测胎儿血型。胎儿血型。Company LogoCompany LogoABO血型系统抗体血型系统抗体 ABO ABO血型抗体按其来源可分为天然抗体和免疫性抗血型抗体按其来源可分为天然抗体和免疫性抗体。天然抗体主要由自然界中具有与体。天然抗体主要由自然界中具有与A A、B B血型抗原结血型抗原结构相同的物质刺激机体的免疫系统产生，主要为构相同的物质刺激机体的免疫系统产生，主要为IgMIgM型型免疫球蛋白。免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠免疫球蛋白。免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠或血型不合的输血，新生儿血清中的抗体通常是来自或血型不合的输血，新生儿血清中的抗体通常是来自母体的母体的IgGIgG型免疫球蛋白。抗体在出生后型免疫球蛋白。抗体在出生后3-63-6个月开始个月开始出现，青春期达到高峰，持续终身，但其效价随年龄出现，青春期达到高峰，持续终身，但其效价随年龄增高而逐步降低。增高而逐步降低。Company LogoCompany LogoABO血型系统抗体血型系统抗体表表3 ABO3 ABO血型系统抗体的特性血型系统抗体的特性特性特性IgM型型IgG型型分子量（kD）1000160耐热性（70）破坏稳定与红细胞结合最适温度（）4-2537与红细胞反应介质生理盐水酶处理或清蛋白溶液被血型物质中和能不能通过胎盘不能能Company LogoCompany LogoABO血型系统亚型血型系统亚型 A、B血型因抗原结构的差异在同一血型形成若干血型因抗原结构的差异在同一血型形成若干亚型。亚型。A抗原的主要亚型有抗原的主要亚型有A1和和A2，约占，约占A型血的型血的99.9%。A1和和A2红细胞均能与抗红细胞均能与抗A血清发生直接凝血清发生直接凝集反应。由于存在集反应。由于存在A1和和A2亚型，因此亚型，因此AB血型中也存血型中也存在相应的在相应的A1 B和和A2 B亚型，中国人亚型，中国人A、AB血型以血型以A1、A1 B亚型为主，亚型为主，A2、A2 B亚型仅占亚型仅占1%。B亚型亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。Company LogoCompany LogoABO血型系统亚型血型系统亚型血型红细胞表面血清中抗A、抗B抗体 与抗血清的反应 A、B抗原抗A 抗B 抗A1A1 A1和A 抗B，抗H A2 A 抗B和抗A1(1%-2%）A1B A1，A和B 抗H A2B A和B 抗A1（25%）B B 抗A，抗A1 O 无 抗A，抗B和抗A1 +-+-+-+-表表4 ABO4 ABO亚型抗原抗体及抗原与抗血清的反应亚型抗原抗体及抗原与抗血清的反应Company LogoCompany LogoABO血型检测原理血型检测原理u输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。是保证输血安全的前提条件。u检测原理：血型抗原与相应抗体在反应介质中形成检测原理：血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。用已知的特异性标准血清检查眼可见的凝集现象。用已知的特异性标准血清检查红细胞的未知血型抗原称为正向定型（红细胞的未知血型抗原称为正向定型（direct direct typingtyping）,用已知血型的标准红细胞检查标本中的未用已知血型的标准红细胞检查标本中的未知血型抗体称为反向定型（知血型抗体称为反向定型（indirect typingindirect typing）。）。Company LogoCompany Logo鉴定方法鉴定方法u盐水凝集法：盐水凝集法：ABO血型抗体以血型抗体以IgM为主，为主，IgM为五聚体免疫球蛋白，其相对分子质量大，是完全为五聚体免疫球蛋白，其相对分子质量大，是完全抗体。抗体。IgM抗体克服红细胞表面排斥作用能力强，抗体克服红细胞表面排斥作用能力强，在生理盐水中与含有相应在生理盐水中与含有相应ABO血型抗原的红细胞结血型抗原的红细胞结合，出现肉眼可见的凝集现象。合，出现肉眼可见的凝集现象。Company LogoCompany Logo鉴定方法鉴定方法u凝胶微柱法：凝胶微柱法：利用凝胶分子筛作用和亲和效应，以利用凝胶分子筛作用和亲和效应，以凝胶微柱为反应介质，在透明塑料卡上凝胶管的凝凝胶微柱为反应介质，在透明塑料卡上凝胶管的凝胶介质中的红细胞与相应抗体结合，形成红细胞凝胶介质中的红细胞与相应抗体结合，形成红细胞凝块，经低速离心处理，凝胶红细胞悬浮的凝胶中，块，经低速离心处理，凝胶红细胞悬浮的凝胶中，未结合抗体的红细胞则沉于凝胶底部。本法用单克未结合抗体的红细胞则沉于凝胶底部。本法用单克隆抗体，特异性高。根据不同需要可选用中性凝胶、隆抗体，特异性高。根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。肉眼观察，也可用血型分析仪分析。Company LogoCompany Logo方法学评价方法学评价 盐水凝集法盐水凝集法 可分为玻片法和试管法，操作简便，可分为玻片法和试管法，操作简便，无需特殊仪器。无需特殊仪器。u玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。血清抗体效灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。血清抗体效价低时不易出现凝集，故不适于反向定型。价低时不易出现凝集，故不适于反向定型。u试管法：用离心法加速血型抗原抗体反应，故所需时试管法：用离心法加速血型抗原抗体反应，故所需时间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型鉴定方法。鉴定方法。Company LogoCompany Logo方法学评价方法学评价 凝胶微柱法凝胶微柱法u重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。因可在重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。因可在凝胶中加入抗球蛋白，有助于促进红细胞特异性凝凝胶中加入抗球蛋白，有助于促进红细胞特异性凝集。试剂、标本定量加样；可用手工、半自动、全集。试剂、标本定量加样；可用手工、半自动、全自动操作。全自动仪器分析不仅可减少人为误差，自动操作。全自动仪器分析不仅可减少人为误差，还便于临床输血计算机管理。还便于临床输血计算机管理。u试剂成本较高，需用离心设备。试剂成本较高，需用离心设备。Company LogoCompany Logo结果判断结果判断正向定型正向定型反向定型反向定型结果判断结果判断标准血清标准血清+被检者红细胞被检者红细胞 标准红细胞标准红细胞+被检者血清被检者血清抗抗A抗抗B抗抗ABA型型B型型O型型(O型血清型血清)红细胞红细胞红细胞红细胞红细胞红细胞+-+-+-A型型-+-B型型+-AB型型-+-O型型表表5 ABO5 ABO血型正、反向鉴定及结果判断血型正、反向鉴定及结果判断Company LogoCompany Logo质量保证质量保证1.1.标准血清标准血清 标准血清新鲜，应在有效期内使用，标准血清新鲜，应在有效期内使用，效价高，凝集力强，正确存放，严防污染。常用的抗效价高，凝集力强，正确存放，严防污染。常用的抗血清有：血清有：u人血清人血清ABOABO血型抗体：血型抗体：1.1.特异性高。特异性高。2.2.凝集效价：抗凝集效价：抗A A不低于不低于1:1281:128，抗，抗B B不低于不低于1:641:64。3.3.亲和力：反应开始亲和力：反应开始15s15s内即出现凝集，内即出现凝集，3min3min时明显凝集，血凝块大于时明显凝集，血凝块大于1mm*1mm1mm*1mm。4.4.稳定性高。稳定性高。5.5.已灭火补已灭火补体。体。u人人ABOABO血型单克隆抗体：血型单克隆抗体：1.1.特异性：抗特异性：抗A A抗体特异凝集具有抗体特异凝集具有A A型红型红细胞抗原的细胞抗原的A1A1、A2A2、A1BA1B、A2BA2B；抗；抗B B抗体只凝集含抗体只凝集含B B抗原的抗原的B B和和ABAB型型红细胞。红细胞。2.2.亲和力：国家标准是抗亲和力：国家标准是抗A A对对A1A1、A2A2、A2BA2B分别为分别为15s15s、30s30s、45s45s；抗；抗B B对对B B型红细胞为型红细胞为15s15s。3.3.凝集效价：国家标准是抗凝集效价：国家标准是抗A1A1、抗抗B B均大于均大于1:1281:128。4.4.稳定性：较人血清抗体的稳定性低。稳定性：较人血清抗体的稳定性低。Company LogoCompany Logo质量保证质量保证2.被检红细胞被检红细胞 u标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本或严重细菌感染患者的标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本或严重细菌感染患者的红细胞上红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的抗原被激活，与标准血清中的T抗体结合，出现全抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。凝集现象，干扰血型鉴定。u某些疾病如多发性骨髓瘤、慢性肝病所致的高球蛋白血症在作某些疾病如多发性骨髓瘤、慢性肝病所致的高球蛋白血症在作ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。除干扰。Company LogoCompany Logo质量保证质量保证3.试验器材试验器材 u所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。u用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须设置对照。设置对照。u红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。u反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。要按操作规程严格控制。u仔细观察结果，注意出现弱仔细观察结果，注意出现弱A亚型和弱亚型和弱B亚型，肉眼判断有疑亚型，肉眼判断有疑问时，必须用显微镜复查。问时，必须用显微镜复查。Company LogoCompany Logo质量保证质量保证4.综合分析试验结果综合分析试验结果u对异常现象如正、反向定型结果不一致时，要查找原因，解决对异常现象如正、反向定型结果不一致时，要查找原因，解决存在问题。准确无误登记结果，经仔细核对后方可发出报告。存在问题。准确无误登记结果，经仔细核对后方可发出报告。Company LogoCompany Logo临床意义临床意义u输血输血 血型鉴定是临床输血的首要步骤，输血前必须准确鉴血型鉴定是临床输血的首要步骤，输血前必须准确鉴定受血者及供血者的血型，选择同型血源，经交叉配血相符后定受血者及供血者的血型，选择同型血源，经交叉配血相符后才能实施输血。才能实施输血。u器官移植器官移植 ABOABO血型抗原是一种广泛分布于人体器官组织血血型抗原是一种广泛分布于人体器官组织血管内皮细胞表面的移植抗原。在器官移植时，应力求受体和供管内皮细胞表面的移植抗原。在器官移植时，应力求受体和供体间体间ABOABO血型一致，否则供体中的血型抗体可作用于移植物血血型一致，否则供体中的血型抗体可作用于移植物血管内皮表面的管内皮表面的ABOABO血型抗原发生超急性排斥反应，导致移植失血型抗原发生超急性排斥反应，导致移植失败。败。u新生儿溶血病新生儿溶血病 母子母子ABOABO血型不合的妊娠后期，由于局部胎血型不合的妊娠后期，由于局部胎盘破裂造成少量胎儿红细胞进入母亲的血液循环，刺激母体免盘破裂造成少量胎儿红细胞进入母亲的血液循环，刺激母体免疫系统产生针对胎儿红细胞的疫系统产生针对胎儿红细胞的IgGIgG型血型抗体，当抗体效价大型血型抗体，当抗体效价大于于1:641:64时，胎儿发生溶血病的几率增高。时，胎儿发生溶血病的几率增高。u其他其他 ABOABO血型检查还可用于法医学鉴定及某些疾病的相关血型检查还可用于法医学鉴定及某些疾病的相关调查。调查。Company LogoCompany LogoRH血型系统的命名血型系统的命名 Fisher-Race Fisher-Race命名法（命名法（CDECDE命名法）命名法）CDECDE命名法简明易懂，为临命名法简明易懂，为临 床常用。其要点是：床常用。其要点是：uRhRh血型系统的遗传基因是位于血型系统的遗传基因是位于1 1号染色体短臂上的连锁基因，每号染色体短臂上的连锁基因，每条染色体有三个连锁的基因位点，依次排列为条染色体有三个连锁的基因位点，依次排列为CDECDE。u各基因位点由一对等位基因组成。各基因位点由一对等位基因组成。uCDECDE三个连锁基因以复合体的形式遗传。三个连锁基因以复合体的形式遗传。u由三个连锁基因可产生由三个连锁基因可产生8 8种基因组合和种基因组合和3636种遗传型种遗传型Company LogoCompany LogoRH血型系统的命名血型系统的命名 Rh Rh系统表型及基因型系统表型及基因型u根据根据CDECDE命名法，人类红细胞的命名法，人类红细胞的RhRh抗原理论上有抗原理论上有C C、D D、E E和和c c、d d、e e共共6 6种，由于尚未发现种，由于尚未发现d d抗体，相应也未发现抗体，相应也未发现d d抗原。因此现有抗原。因此现有5 5种种RhRh抗原，相应有抗原，相应有5 5种种RhRh抗血清。抗血清。u临床实验室常用临床实验室常用5 5种种RhRh抗血清鉴定红细胞上的抗血清鉴定红细胞上的RhRh抗原，其中抗原，其中D D抗抗原最为重要。原最为重要。u根据红细胞上有无根据红细胞上有无D D抗原将红细胞分为抗原将红细胞分为RhRh阳性和阳性和RhRh阴性，中国人阴性，中国人约约99.6%99.6%为为RhRh阳性，阳性，0.4%0.4%为阴性。为阴性。Company LogoCompany LogoRh血型系统抗原及抗体血型系统抗原及抗体uRhRh血型系统抗原血型系统抗原nRhRh血型系统抗原强度仅次于血型系统抗原强度仅次于ABOABO血型系统的血型系统的A A抗原及抗原及B B抗原。抗原。目前已发现的目前已发现的RhRh抗原有抗原有4545种，其中与人类关系最为密切的种，其中与人类关系最为密切的是是D D、E E、C C、c c、e e五种，其中以五种，其中以D D抗原的抗原性最强，依次抗原的抗原性最强，依次是是E E、C C、c c、e e。uRhRh血型系统抗体血型系统抗体n天然天然RhRh抗体极少，绝大多数抗体极少，绝大多数RhRh抗体由输血或妊娠刺激机体抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的免疫系统产生的IgGIgG型免疫性抗体。主要型免疫性抗体。主要RhRh血型系统抗体有血型系统抗体有抗抗D D、抗、抗E E、抗、抗C C、抗、抗c c、抗、抗e e五种。其中抗五种。其中抗D D最为常见。在盐最为常见。在盐水介质试验系统中可检测出某些水介质试验系统中可检测出某些RhRh抗体，表明这些抗体，表明这些RhRh抗体抗体具有具有IgMIgM的性质可能来自免疫反应抗体形成早期。的性质可能来自免疫反应抗体形成早期。Company LogoCompany LogoRh血型检测方法及原理血型检测方法及原理u酶介质法酶介质法n红细胞表面的唾液酸带负电荷，使用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面的唾液酸带负电荷，使用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面的负电荷，减少细红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面的负电荷，减少细胞间的排斥力，促进胞间的排斥力，促进RhRh抗原与相应抗体间的结合从而产生抗原与相应抗体间的结合从而产生红细胞凝集。红细胞凝集。u聚凝胺试验（聚凝胺试验（polybrene testpolybrene test）n聚凝胺是带高价阳离子的季铵盐，溶解后产生的正电荷中聚凝胺是带高价阳离子的季铵盐，溶解后产生的正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少细胞间的排斥力，有利于红和红细胞表面的负电荷，减少细胞间的排斥力，有利于红细胞凝集。如果是由细胞凝集。如果是由RhRh抗体致敏的红细胞产生的凝集，是抗体致敏的红细胞产生的凝集，是特异的不可逆凝集。非抗体致敏红细胞凝集则是可逆性凝特异的不可逆凝集。非抗体致敏红细胞凝集则是可逆性凝集。集。u抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（antiglobulin testantiglobulin test）n又称又称CoombsCoombs试验，是检测红细胞上不完全抗体的经典方法。试验，是检测红细胞上不完全抗体的经典方法。不完全抗体多与其相应的红细胞结合，在盐水介质中不出不完全抗体多与其相应的红细胞结合，在盐水介质中不出现凝集反应。现凝集反应。CoombCoomb试验利用抗球蛋白抗体作为第试验利用抗球蛋白抗体作为第2 2抗体，抗体，通过连接致敏红细胞表面的特异性特异性通过连接致敏红细胞表面的特异性特异性RhRh抗体，使致敏抗体，使致敏红细胞出现特异性凝集。红细胞出现特异性凝集。Company LogoCompany LogoRh血型检测方法及原理血型检测方法及原理u人源盐水介质抗人源盐水介质抗D D试验试验n采用免疫球蛋白变性剂（如二硫苏糖）处理人源采用免疫球蛋白变性剂（如二硫苏糖）处理人源IgGIgG类抗类抗D D血清，使小分子的血清，使小分子的IgGIgG抗体分子增大成为具有大分子的抗体分子增大成为具有大分子的“IgMIgM”的性质，能在盐水介质中与相应红细胞发生凝集，的性质，能在盐水介质中与相应红细胞发生凝集，可用于可用于RhRh血型的快速鉴定。血型的快速鉴定。u低离子强度溶液试验低离子强度溶液试验n红细胞外围的阴离子是红细胞的稳定因素之一，降低反应红细胞外围的阴离子是红细胞的稳定因素之一，降低反应介质的离子强度可减少细胞外围的阴离子，促进带正电荷介质的离子强度可减少细胞外围的阴离子，促进带正电荷的的IgGIgG型型RhRh抗体与红细胞结合发生凝集反应，从而增加红细抗体与红细胞结合发生凝集反应，从而增加红细胞的凝集强度。胞的凝集强度。Company LogoCompany Logo方法学评价方法学评价 方方 法法 评评 价价酶介质法（直接法）简单、快速、经济，但灵敏度低。酶介质法（间接法）简单、经济、灵敏。可鉴定抗原和检测抗体。但较费时，准确性和稳定性较差低离子强度溶液试验 反应时间短，灵敏度高聚凝胺试验 快速、灵敏、准确性高，应用较多抗球蛋白试验 检查不完全抗体最可靠方法，但操作复杂，费时，试剂较贵。多用于新生儿溶血病的诊 断及因血型不合输血产生的血型抗体的检测人源盐水介质抗D试验 操作简单，特异性和灵敏度均高，应用广泛，但试剂昂贵表表6 Rh血型鉴定的方法学评价血型鉴定的方法学评价Company LogoCompany Logo质量保证质量保证u检测前检测前n标本处理：标本新鲜，严防污染。为避免假阴性，被检红细胞标本处理：标本新鲜，严防污染。为避免假阴性，被检红细胞要用生理盐水充分洗涤。要用生理盐水充分洗涤。n试剂和器材：使用有效期内的合格试剂。抗血清要妥善保存，试剂和器材：使用有效期内的合格试剂。抗血清要妥善保存，防治污染。使用的仪器、器材清洁干燥。防治污染。使用的仪器、器材清洁干燥。u检测中检测中n严格遵守操作规程。严格遵守操作规程。n严格控制抗原抗体比例、介质浓度、反应时间、反应温度、离严格控制抗原抗体比例、介质浓度、反应时间、反应温度、离心条件等影响检测结果的关键因素。心条件等影响检测结果的关键因素。n每次实验均须设置阴性对照、阳性对照及试剂对照。每次实验均须设置阴性对照、阳性对照及试剂对照。n红细胞上的红细胞上的Rh抗原与相应抗体反应形成的凝集较弱，观察结抗原与相应抗体反应形成的凝集较弱，观察结果不可用力振摇。当结果可疑时，须用显微镜观察确认。果不可用力振摇。当结果可疑时，须用显微镜观察确认。u检测后检测后n复查实验全过程，填写试验报告，查对无误后方可发出报告。复查实验全过程，填写试验报告，查对无误后方可发出报告。n标本置标本置4保存保存1周以上，以备复查。周以上，以备复查。Company LogoCompany Logo临床意义临床意义uR Rh h血型鉴定及交叉配血血型鉴定及交叉配血n输血前进行血型鉴定和交叉配血是保证输血安全的重要措输血前进行血型鉴定和交叉配血是保证输血安全的重要措施。一般正常人血清中不存在施。一般正常人血清中不存在RhRh抗体，但鉴于临床情况的抗体，但鉴于临床情况的复杂性，因此提倡每次输血前均须同时进行复杂性，因此提倡每次输血前均须同时进行ABOABO和和RhRh血型鉴血型鉴定，以确保输血安全。定，以确保输血安全。u新生儿溶血病诊断新生儿溶血病诊断n如果母体血液中含有针对胎儿红细胞的如果母体血液中含有针对胎儿红细胞的IgGIgG类类RhRh抗体，由于抗体，由于IgGIgG类抗体可以通过胎盘，破坏胎儿红细胞，引起新生儿溶类抗体可以通过胎盘，破坏胎儿红细胞，引起新生儿溶血病。因此检测母体血病。因此检测母体RhRh（D D）抗体，可以尽早发现和避免新）抗体，可以尽早发现和避免新生儿溶血病。生儿溶血病。谢谢大家！