AQP7在棕榈酸对3T3-L1脂肪细胞影响中的作用及其信号通路初探..ppt

汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou UniversityAQP7AQP7在棕榈酸对在棕榈酸对3T3-L13T3-L1脂肪细胞影响中的脂肪细胞影响中的作用及其信号通路初探作用及其信号通路初探研究生 陈强导师 陈永松 主任医师专业 内分泌2011年年5月月 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University研究背景研究背景提出假设提出假设研究目的与意义研究目的与意义实验设计实验设计实验方法实验方法实验结果实验结果展望和不足展望和不足致谢致谢 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University研究背景近年来，肥胖患者数量增加很快。肥胖与胰岛素抵抗（IR）关系密切。肥胖患者脂代谢旺盛，血（游离脂肪酸）FFA高于正常人。高FFA血症通过多种途径导致胰岛素抵抗的发生。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University研究背景水通道蛋白水通道蛋白7 7（AQP7AQP7）有促进甘油释放）有促进甘油释放作用，减少作用，减少TGTG合成。合成。肥胖患者脂肪组织肥胖患者脂肪组织AQP7AQP7低表达。低表达。AQP7AQP7表达缺失障碍会出现表达缺失障碍会出现IRIR。Glycerokinase 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University研究背景PPARPPAR是是AQP7AQP7上游调控因子。上游调控因子。PPARPPAR可以在转录水平对可以在转录水平对AQP7AQP7进行正调控。进行正调控。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou UniversityPPAR？FFAFFAAQP7AQP7在在 FFAFFA导致导致IRIR中是否起到一定作用？中是否起到一定作用？FFAFFA是否通过是否通过PPARPPAR途径影响途径影响AQP7AQP7表达？表达？提出假设肥胖肥胖AQP7？IR 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University研究目的与意义AQP7AQP7在在FFAFFA导致的导致的IRIR中的作用。中的作用。初步探讨初步探讨FFAFFA与与AQP7AQP7之间信号通路。之间信号通路。为肥胖防治为肥胖防治IRIR提供新的靶点提供新的靶点。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验设计3T3-L1前脂肪细胞成熟脂肪细胞对照酶比色法测定葡萄糖甘油水平棕榈酸浓度组棕榈酸时间组RT-PCR测AQP7和PPARmRNA表达情况油红O鉴定统计分析 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验方法3T3-L13T3-L1前脂肪细胞培养前脂肪细胞培养3T3-L13T3-L1前脂肪细胞诱导分化前脂肪细胞诱导分化油红油红O O染色法鉴定细胞内脂滴染色法鉴定细胞内脂滴酶比色法测定培养基葡萄糖和甘油酶比色法测定培养基葡萄糖和甘油RT-PCRRT-PCR测测AQP7AQP7和和PPARPPARmRNAmRNA表达情况表达情况 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University结果统计RT-PCRRT-PCR结果用结果用Quantity oneQuantity one软件进行灰度分析。软件进行灰度分析。计量数据使用计量数据使用SPSS 17.0SPSS 17.0统计软件进行正态性检验和方差分析、统计软件进行正态性检验和方差分析、组间比较及相关性比较，组间比较及相关性比较，P P0.050.05差异具统计学意义，差异具统计学意义，P P0.010.01具显具显著性差异。著性差异。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 3T3-L13T3-L1前脂肪细胞诱导成熟和鉴定前脂肪细胞诱导成熟和鉴定A:小鼠3T3-L1前体脂肪细胞诱导前形态B:诱导分化成熟的脂肪细胞 C:油红O染色的成熟脂肪细胞（200）ABC 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 培养基葡萄糖浓度变化培养基葡萄糖浓度变化不同浓度的棕榈酸作用24h后培养基中葡萄糖浓度的变化,*P0.01（与对照组相比）汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 培养基中甘油的变化培养基中甘油的变化不同浓度的棕榈酸作用24h对脂肪细胞甘油释放的影响,*P0.01（与对照组相比）汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 RT-PCRRT-PCR结果结果AQP7与PPAR的RT-PCR与内参对比条带 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 棕榈酸对棕榈酸对AQP7mRNAAQP7mRNA表达的浓度效应表达的浓度效应不同浓度棕榈酸作用24h对AQP7mRNA表达的影响,*P0.05（与对照组比）汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 榈酸对于榈酸对于AQP7mRNAAQP7mRNA表达的时间效应表达的时间效应 200uM棕榈酸对AQP7mRNA表达的时间效应,P0.05（12h组与48h组比，24h组与48h组比）汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 棕榈酸对棕榈酸对PPARPPARmRNAmRNA表达的浓度效应表达的浓度效应不同浓度棕榈酸作用24h对PPARmRNA表达的影响,*P0.05（与对照组比）汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 棕榈酸对棕榈酸对PPARPPARmRNAmRNA表达的时间效应表达的时间效应200uM棕榈酸对PPARmRNA表达的时间效应,P0.05（12h组与48h组比）汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University实验结果 AQP7与PPAR mRNA相关分析相关分析AQP7与PPAR mRNA表达相关性分析，r=0.6749，P0.01 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University讨论1 1、AQP7AQP7可能参与了游离脂肪酸导致的胰岛素抵抗可能参与了游离脂肪酸导致的胰岛素抵抗FFA 可以导致脂肪细胞胰岛素抵抗的发生。甘油释放减少主要因为脂肪细胞的甘油通道AQP7表达减少。游离脂肪酸（FFA）抑制AQP7表达，AQP7在游离脂肪酸导致的胰岛素抵抗中起到了作用。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University讨论2 2、FFAFFA、PPARPPAR与与AQP7AQP7之间可能存在的信号通路之间可能存在的信号通路FFA对PPAR表达有抑制作用，是导致AQP7表达减少的原因之一。FFA可能是通过PPAR这一核受体影响AQP7表达。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University结论1 1、棕榈酸可能通过影响脂肪细胞、棕榈酸可能通过影响脂肪细胞AQP7AQP7表达，进而促进脂肪细胞表达，进而促进脂肪细胞胰岛素抵抗。胰岛素抵抗。2 2、棕榈酸可能通过、棕榈酸可能通过PPARPPAR这一核受体，进而影响脂肪细胞这一核受体，进而影响脂肪细胞AQP7AQP7的表达。的表达。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University本研究不足不足：没能在蛋白水平进一步证实FFA与AQP7的关系。对FFA与AQP7之间信号通路也只是初步的涉及。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University致谢 首先衷心感谢尊敬的导师陈永松老师三年来对我的精心指导和培养。恩师严谨的治学态度、高尚的人格魅力、渊博的学识、进取的精神是我们永远学习的榜样。感谢导师在学习生活上给予我的关心和帮助，在论文的选题、课题设计以及论文完成过程中，给予的严格指导。衷心感谢附一分子实验室张勇刚主任、吴利标老师,内分泌科李卫平老师在实验过程中所给予的指导和帮助。衷心感谢附一内十科医护人员在我临床实习期间所给予的悉心指导。衷心感谢师兄师姐、师弟师妹及08级朋友们对我学习和生活上的帮助。再次感谢答辩主席和各位答辩委员的辛勤劳动。汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University 汕头大学医学院汕头大学医学院 Medical College of Shantou University谢谢大家！谢谢大家！