1、牛奶中蛋白质的提取与鉴定牛奶中蛋白质的提取与鉴定内蒙古农业大学生物化学与分子生物学实验教学中心制作人：王瑞刚实验原理实验试剂实验步骤实验原理 牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质，其中主要是酪蛋白。酪蛋白在羊乳中约占总蛋白量的3/4，牛乳中约占总蛋白 量的5/6。酪蛋白是一种含磷蛋白的不均一混合物。蛋白 质在其等电点pH溶液中溶解度降低。根据这个原理，将牛 乳的pH调整至4.8，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀 出来。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到纯 的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴定。除去酪蛋白的滤液中，尚含有球蛋白、清蛋白等多种 蛋白质。实验试剂 1醋酸钠缓冲液(0.2mol/LpH4.6)
2、2米伦(Millon)试剂 将汞100g溶于140ml(密度1.42)的浓 硝酸中(在通风橱内进行)。然后加两倍量的蒸馏水稀释。3 95%乙醇。4乙醚。5 10%NaCl 6 0.5%Na2C03。7 0.lmol/LNaOH。8 0.2%HCl 9饱和氢氧化钙(Ca(OH)2)。10 5%醋酸铅。实验步骤(一)酪蛋白的制备 取新鲜牛乳30ml，放人100ml烧杯中加热至40。加入 30ml加热至同样温度的醋酸缓冲液，一边加一边摇动，并 用pH计检测，调整混合液的pH为4.8（实际中准确加入牛奶 与醋酸缓冲液体积相同时，可以不用调节pH）。冷却至室 温，继续放置5分钟，然后将溶液转入离心管中离
3、心 3000r/min，时间5分钟（注意离心时要对角配平注意离心时要对角配平），离心 后上清液保留做鉴定实验。所得沉淀物悬浮在约30ml等量的 醇醚混合液中，搅匀，离心3000r/min，时间5分钟，弃清 液，所得沉淀摊在表面皿上，使醇醚混合液挥发。称其干重 计算其产量。（二）酪蛋白的性质鉴定（二）酪蛋白的性质鉴定 1溶解度：取试管6支，分别加入水、10%氯化钠、0.5%碳酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化 钙溶液各2ml。于每管中加入少量酪蛋白。不断摇荡，观 察记录各管中的酪蛋白溶解度。2米伦反应 取酪蛋白少许，放置于试管中。加入lml蒸 馏水，再加入米伦试剂10滴，振摇，并徐徐加热。观察其 颜色变化。3含硫(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)测定:取少量酪蛋 白溶于lmlO.1 mol/L氢氧化钠溶液中，再加入1-3滴5%醋酸 铅，加热煮沸，溶液变为黑色。（三）乳清中可凝固性蛋白质的鉴定（三）乳清中可凝固性蛋白质的鉴定 将制备酪蛋白时所得的清液移入烧杯中，徐徐加热。即出现蛋白质沉淀。此为乳清中的球蛋白和清蛋白。
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