区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌.ppt

区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌 范聪聪目的：用革兰氏染色法区分金黄色葡萄球和沙门氏菌用革兰氏染色法区分金黄色葡萄球和沙门氏菌原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。药品：金黄色葡萄球菌，沙门氏菌；金黄色葡萄球菌，沙门氏菌；草酸铵结晶紫，番红水溶液，碘液，草酸铵结晶紫，番红水溶液，碘液，95%95%乙醇，乙醇，仪器：仪器：载玻片，接种环，酒精灯，打火机，吸水纸，显微镜，载玻片，接种环，酒精灯，打火机，吸水纸，显微镜，香柏油，擦镜纸，废水缸香柏油，擦镜纸，废水缸操作步骤：1 1）涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，把沙门氏菌和金）涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，把沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分别涂在两个载玻片的中央，用烧红冷却后的黄色葡萄球菌分别涂在两个载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大2 2）干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心）干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形3 3）固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-32-3次，共约次，共约2-32-3秒种，秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过6060），放置待冷后，进行染色。），放置待冷后，进行染色。4 4）初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-21-2滴，使染色滴，使染色液覆盖涂片，流水冲洗液覆盖涂片，流水冲洗媒染：将碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，媒染：将碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，流水冲洗流水冲洗吸吸 脱色：斜置载玻片，滴加脱色：斜置载玻片，滴加95%95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时紫色为止，大约需时20-30S20-30S，随即水洗，随即水洗 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-21-2滴，使染色液覆盖涂片，滴，使染色液覆盖涂片，染色约染色约1min1min。水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止洗下的水呈无色为止 5 5）干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干）干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察沙门氏菌和金黄色葡萄球浸油在玻片上，用油镜观察沙门氏菌和金黄色葡萄球的形态及颜色。的形态及颜色。结果：金黄色葡萄球菌被染成紫色为革兰阳性菌，金黄色葡萄球菌被染成紫色为革兰阳性菌，沙门氏菌被染成红色为革兰阴性菌沙门氏菌被染成红色为革兰阴性菌注意事项：1 1选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。染成红色而造成假阴性。2.2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。3.3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴脱色过度造成假阴后面内容直接删除就行后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用主要经营：网络软件设计、图文设计制作、主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！到让客户满意！致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPTPPT设计、计划书、策划案、学习课件、各设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求类模板等方方面面，打造全网一站式需求The user can demonstrate on a projector The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a and make it into a film to be used in a wider fieldwider field