仪器分析期考重点固定相与流动相.pptx

2024/4/22 周一3.3.流动相选择流动相选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序常用溶剂的极性顺序：水(最大)甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)2024/4/22 周一4.4.选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。10:15:20二、分离类型选择二、分离类型选择 choice of separation types2024/4/22 周一 气气相相色色谱谱过过程程：待待测测物物样样品品被被蒸蒸发发为为气气体体并并注注入入到到色色谱谱分分离离柱柱柱柱顶顶，以以惰惰性性气气体体（指指不不与与待待测测物物反反应应的的气气体体，只只起起运运载载蒸蒸汽汽样样品品的的作作用用，也也称称载载气）将待测物样品蒸汽带入柱内分离。气）将待测物样品蒸汽带入柱内分离。其分离原理是基于待测物在气相和固定相之间的吸附-脱附（气固色谱）和分配（气液色谱）来实现的。因此可将气相色谱分为气固色谱和气液色谱。气固色谱：利用不同物质在固体吸附剂上的物理吸附-解吸能力不同实现物质的分离。五、检测器五、检测器 气气相相色色谱谱检检测测器器种种类类繁繁多多，本本节节将将介介绍绍最最为为常常用的几种检测器：用的几种检测器：1.热导检测器(TCD);2.氢火焰离子化检测器(FID);3.电子捕获检测器(ECD);4.火焰光度检测器(FPD);5.氮磷检测器（NPD）也称热离子检测器(TID);6.原子发射检测器(AED)7.硫荧光检测器（SCD）相对极性P：规定非极性固定液角鲨烷的极性为0，强极性固定液,-氧二丙腈的极性为100，其余物质的P 在0100 之间，每20 单位为一级，即将极性分为5 级：0,+1(非极性)；+1,+2(弱极性)；+3(中等极性；+4,+5(强极性)固定液分类及选择：固定液分类及选择：固定液选择：按固定液选择：按“相似相溶相似相溶”原理选择固定液。原理选择固定液。非非极极性性组组分分非非极极性性固固定定液液沸沸点点低低的的物质先流出；物质先流出；极极性性物物质质极极性性固固定定液液极极性性小小的的物物质质先流出；先流出；各类极性混合物极性固定液极性小的物质先流出；氢键型物质氢键型固定液不易形成氢键的物质先流出；复杂混合物两种或以上混合固定液柱温柱温降低降低升高升高传质快、传质快、柱效高柱效高纵向扩散强、纵向扩散强、峰拖尾过峰拖尾过高造成固定高造成固定液流失液流失分析时分析时间长间长恒温恒温程序升程序升温温(宽沸宽沸程混合程混合物物)实验实验确定确定2024/4/22 周一二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2024/4/22 周一(5)液相色谱检测器液相色谱检测器 a.紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm 10mm，容积 8L）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。2024/4/22 周一一、一、液液-固吸附色谱固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 固固定定相相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是510m的硅胶吸附剂；流动相流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；2024/4/22 周一二、二、液液-液分配色谱液分配色谱liquid-liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流流动动相相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正正相相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反反相相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化化学学键键合合固固定定相相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。2024/4/22 周一三、三、离子交换色谱离子交换色谱ion-exchange chromatography 固定相固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流流动动相相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基基本本原原理理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：RSO3H +M+=RSO3 M +H+阴离子交换：RNR4OH +X-=RNR4 X+OH-应用应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。2024/4/22 周一五、五、离子对色谱离子对色谱ion pair chromatography 原原理理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；阴阴离离子子分分离离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子；阳阳离离子子分分离离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；反反相相离离子子对对色色谱谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X-后；在两相间分配。2024/4/22 周一六、六、排阻色谱色谱排阻色谱色谱size-exclusion chromatography 固定相固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；原原理理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离