免疫实验室基础常识.ppt

免疫免疫实验实验室基室基础础常常识识 免疫学检测方法的简介基本原理免疫学检测方法的应用抗原、抗体的定义免疫室检测的项目感染性疾病检查项目细胞、体液免疫检查项目肿瘤标志物电化学发光检测项目自身免疫性疾病检查项目4/18/20241-免疫学检测方法的简介n 方法 原理n免疫间接凝集方法 RBC、乳胶颗粒+Ag n免疫沉淀反应方法 琼脂板+Ab n酶免疫分析技术（EIA）HRP+Ag或Abn放射免疫方法（RIA）I*125+Ag或Abn免疫光散射比浊分析 Ag+Ab=CIC、微粒+Agn免疫胶体金检测方法 胶体金+抗人IgGn免疫荧光显微镜方法 FITC+抗人IgGn化学发光免疫分析技术 ABEL+抗CEAn电化学发光免疫分析技术Ru（bpy）3*+抗AFP 4/18/20242-免疫学检测常用的基本技术n凝集方法 MP-IgMMP-IgM、TPPATPPA、WidalWidal、Weil-FWeil-FnASO、RF、CRP、冷凝集实验等n沉淀方法 IgG、A、M、C3、C4、CRP、等n酶联方法 病毒抗体IgG、IgM及蛋白抗原n放射方法 肿瘤标志物等n光散射比浊方法 Ig、ASO、RF、微量蛋白n胶体金方法 TB-Ab、HBsAg、HCG、LP-IgMn荧光显微方法 自身抗体、呼吸道V-IgM等 n化学发光技术 肿瘤标志、甲状腺功能、n电化学发光技术 肝炎标志、性腺分析等4/18/20243-免疫学检测常用的基本技术n现代常用的免疫方法n酶免疫分析、荧光免疫分析、光散射比浊分析、化学发光技术、电化学发光免疫分析技术、仪器方法。还有凝集、沉淀、金标记等方法。性激素、细胞因子、肿瘤标志、免疫球蛋白等，都为标准曲线定量方法。以上检测都可视为抗原抗体反应的方法。抗原抗体的内容、免疫的基本概念还需复习一下，以便更充分了解免疫实验检测的基本原理。4/18/20244-抗原与抗体n一.抗原、抗体的定义1n1.抗原的定义n(1)凡是能够刺激机体免疫系统产生抗体的免疫物质、并能在体内外与抗体发生特异性结合反应的物质称为抗原。n(2)抗原指能与T细胞的TCR何B细胞的BCR结合，促使其增殖、分化、产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与之结合，发挥免疫效应的物质。n（3）抗原两个特性：免疫原性、抗原性。n2.医学上重要的抗原2na.病原微生物：细菌、病毒、立克次氏体。(表面抗原、核心抗原、鞭毛抗原等)4/18/20245-抗原与抗体na.自身抗原：n一般自身组织对机体自身没有抗原性，但在外伤、感染、电离辐射、药物等影响下可以发生变性成为自身抗原，刺激机体产生免疫反应引起自身免疫性疾病，ANA.dsDNA等。na.肿瘤抗原：如AFP、CEA、PSA等。nb.同种异体抗原：红细胞血型抗原、白细胞抗原（人类白细胞抗原又称HLA）等等。n2抗体的定义：n（1）抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的一类具有与抗原发生特异性结合反应的球蛋白。4/18/20246-n（2）抗体是介导体液免疫的重要分子，是指B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中。能与抗原特异性结合，具有免疫功能。n（3）4/18/20247-抗原与抗体nl抗体产生的一般规律n抗原刺激机体后可产生免疫球胆白G、A、M。一般2-3周后才有抗体产生，其出现顺序；IgM最早,但消失也快,在血液中只维持数周至数月。（所以临床检测IgM抗体利于早期诊断）IgG出现稍迟于IgM，当IgM接近消失时，IgG达高峰阶段，它在血液维持时间较长可达数年之久。IgA继IgM和IgG后出现。4/18/20248-抗体的基本内容n用电泳的方法可将血清或血浆蛋白分离成白蛋白和球蛋白两个组分。大多数抗体位于r球蛋白区域内。抗体的另一个常用名为免疫球蛋白（Ig），意为r球蛋白中与免疫相关的组分。n抗体在血液中检出，但它在其他部位存在；细胞质内质网和高尔基体的膜和B淋巴细胞膜上、NK细胞和肥大细胞的细胞膜上、组织液和血浆中、还在乳汁和分泌液中。n抗体分类；IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。nIgG亚类IgG1-4、IgA亚类1-24/18/20249-抗体的基本内容n抗体的功能n对有害因子，如毒素、药物、病毒、细菌、和其它寄生虫可通过与特出细胞受体结合而造成机体的损害，而分泌抗体可通过与其结合了阻止与响应受体结合，起到了中和作用。nIgG的调理作用促进吞噬细胞对抗原的吞噬。nIgG、IgE和IgM介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。（NC、MC、NK细胞）nIgE所介导的超敏反应nIgA介导的粘膜免疫n母体的IgG介导的新生儿免疫4/18/202410-应用抗原抗体结合原理检测的项目 n感染性疾病检测项目n肝炎病毒筛查：A、B、C、D、E、G、TTV、CMVn呼吸道病原体筛查：EB、AD、CB、RSV、MP、CPn感染性疾病检查项目：Uu、CT、NG、USR.TPPA、HIVn自身免疫性疾病项目 n免疫全项：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA、Ig.C3、C4、CRP、ASO、RF、CIC n肝病自身抗体：ANA、ds-DNA、SMA、AMA、LKM、SLA可溶性 肝抗原、LC1抗肝溶质型抗原 n自身抗体：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA n肾病自身抗体：ANA,ds-DNA,GBM,ANCN.ENAn糖尿病自身抗体：IAA、ICA、GAD 4/18/202411-应用抗原抗体结合原理检测的项目n电化学发光定量分析仪检查项目 参考值nAFP 肝 15.0 ng/mln CEA 结肠、胃、乳腺 3.40 ng/mlnPSA/fPSA 前列腺 PSA 4.0 ng/mlnCA15-3 乳腺 25.0 U/mlnCA125 卵巢 35.0 U/mlnCA19-9 胰腺、胆囊 27.0U/mlnCA724 胃、卵巢 6.9U/mlnNSE 小细胞肺Ca 12.5/mlnCYFRA2 非小细胞肺Ca 3.3ng/ml4/18/202412-应用抗原抗体结合原理检测的项目n 性激素6项 参考值n黄体生成素（LH）青春期、成年期n卵泡激素（FSH）、n泌乳素（PRL）3.4-24.1 ng/mln雌二醇（E2）卵泡期、黄体期、绝经期n孕酮（PRO）、n睾酮（T）0.06-0.820.06-0.82 ng/mln糖尿病项目n胰岛素nC肽4/18/202413-免疫指标与临床疾病n.HBsAg：急、慢性乙肝无症状携带者n2.HBsAb：疫苗接种后、既往感染后，有免疫力。n3.HbeAg：病毒复制，传染性强。nre-S1：病毒复制，传染性强。n4.HBeAb：病毒复制降低或消失，传染性很弱。n5.HbcAb：乙肝感染后产生，持续性强，可终生不消失。n6.HbcIgM：乙肝感染早期，为早期诊断标志。n7.HAVAbIgM：急性甲肝，2个月后阳性消失。n8.HCV-Ab：感染过丙肝，阳性可持续 1年以上。n9.HDV-Ab：感染过丁肝，一般在乙肝感染后出现。n10.HEV-IgM：戊肝感染的早期。n11.HGV-Ab：感染过庚肝。n12.CMV-IgM：感染CMV，偶发可引起肝细胞炎症。n13.TTV-Ab：感染TTV而引起的肝细胞炎症。4/18/202414-免疫指标与临床疾病n 乙型肝炎乙型肝炎标标志物模式分析及志物模式分析及临临床意床意义义n n 临床诊断、免役接种、临床分期、传染判断、母婴检查等n常常见见乙肝的乙肝的8 8种模式：种模式：nsAg sAb eAg eAb cAb 临床意义n HBV感染，急、慢性乙肝，传染性强n 急、慢性乙肝，传染性弱，或携带者n 急慢性乙肝，或携带者。查HBV-DNAn 既往感染过乙肝病毒，有免疫力n 既往感染，乙肝恢复期，有免疫力n 接种乙肝疫苗后，HBV感染后的恢复 既往感染，乙肝恢复期基本无传染n 既往感染，排除检查HBV-DNA4/18/202415-免疫指标与临床疾病n不常不常见见乙肝的乙肝的6 6种模种模nsAg sAb eAg eAb cAb 临临床意床意义义n 早期HBV感染.慢性携带传染性强n 急性HBV，趋向恢复，慢性肝炎n 不同亚型HBV二次感染，感染早期n 同上n 非典型性急性感染n 同上n+不同亚型HBV二次感染Ag-Ab转换期4/18/202416-免疫指标与临床疾病呼吸道病菌抗体呼吸道病菌抗体IgMIgM检测检测的的临临床意床意义义n呼吸道病毒并非分类上的名称，而是习惯上指由呼吸道传播并能引起呼吸道感染的病毒总称。n1MP-IgM(肺炎支原体抗体IgM)nMP通过呼吸道传播引起原发性非典型肺炎（肺炎病历10-20%），可并发鼻窦炎、皮炎、心包炎、心肌炎等，检出MP-IgM阳性可判断进期有的感染。n2CP-IgM(肺炎衣支体抗体IgM)n CP是一类介于细菌和病毒之间的微生物，传播途径主要是呼吸道，可引起肺炎有时还侵犯心脏、心包、脑膜、肝脏等部位，检出CP-IgM阳性可判断进期有CP的感染。4/18/202417-免疫指标与临床疾病n3EBV-IgM(EB病毒抗体IgM)nEBV是传染性单核细胞增多症的病原体，主要通过唾液传播，EBV对儿童及青少年易感，阳阳性性见见于于儿儿童童期期扁扁桃桃体体炎炎和和炎炎颊颊炎炎偶偶发发的的病病历历，EBVEBV偶偶发发波波及及中中枢枢神神经经系系统统和和肝肝炎炎，EBV与非洲儿童恶性淋巴瘤和鼻烟癌密切相关。n4CBV-IgM(柯萨奇病毒抗体IgM)nCBV可经口或呼吸道侵入人体，在局部繁殖，通过病毒血症扩散，除局部症状外可产生一系列综合症，如感冒、急急性性心心肌肌炎炎、心心包包炎炎、无菌性脑膜炎、疱疹性咽炎、皮炎、肝炎等疾病。4/18/202418-免疫指标与临床疾病n5ADV-IgM(腺病毒抗体IgM)n ADV从脾体细胞分离而得名，能引起呼吸道和眼部的疾患，急性病为发热、咽炎、咳漱，常有角、结膜炎、鼻炎、气气管管炎炎、非非典典型型肺肺炎炎等，并伴有全身症状，检出ADV-IgM阳性可判断进期有ADV的感染。n6RSV-IgM(合胞病毒抗体IgM)n RSV是引起婴幼儿下呼吸道感染的病原体，也是肺肺炎炎和和支支气气管管炎炎的的病病因因，成年多表现发热性感冒，老年人可使气管炎和肺气肿加重，检出RSV-IgM阳性可判断进期有RSV 的感染。4/18/202419-应用抗原抗体结合原理检测的项目n7冷凝集素实验n冷凝集素本质是IgM，正常人血清中可含少量，1%的人.1：32以上，60%的肺炎支原体肺炎病人病后2周可达1：32-64或更多，某某些些疾疾病病如如传传单单增增多多症症、重重症症贫贫血血、雷雷诺诺氏氏症症、肝肝硬硬化化等等亦亦可可呈阳性。呈阳性。n8.肥达（Widal）氏凝集实验n伤寒和副伤寒是由伤寒沙门氏菌及甲、乙、丙3种副伤寒沙门氏菌所致的肠道传染病。“O”菌体”H”鞭毛抗原菌液检查血清中的抗体。n参考值：“O”、甲、乙、丙 1：40n ”H”、25%前列腺癌可能性小（10%），fPSA/tPSA比值0.75ng/mL/年，前列腺癌可能性增加。4/18/202445-n 12.血清铁蛋白（SF）是一种储铁蛋白。uSF升高见于肺癌、胰癌、白血病、肝脏疾病。uSF减低见于缺铁性贫血、大量失血、长期腹泻。4/18/202446-部分肿瘤标志物的阳性顺序项项目名称目名称主主诊诊阳性阳性顺顺序序CA50广谱胰、肝、卵巢、肠、胃、肺CA125卵巢卵巢、胰、肺、乳、肠CA15-3乳房乳房CA19-9消化道胰、胆、胃、肠MGAg/CA724胃胃、肠、肺、乳SCC/CYFRA211鳞癌肺、食道、上颚、宫颈、皮肤n 4/18/202447-肿瘤标志物检测图谱十十 肿肿瘤瘤标标志物志物检测图谱检测图谱癌癌肿肿部位部位肿肿瘤瘤标标志物志物选择顺选择顺序序肝肝AFP CEA SF结结直直肠肠CEA CA19-9 CA242 CA50 胰腺胰腺CA19-9 CA242 CEA CA50胃胃MGAg CA724 CEA CA19-9食道食道SCC肺肺 NSE CYFRA21-1 SCC CEA乳房乳房CA15-3 CA125 CEA卵巢卵巢CA125 -HCG CEA AFP 子子宫宫SCC SF -HCG前列腺前列腺fPSA PSA甲状腺甲状腺HTG CEA CA19-9血液病血液病SF 2-MG4/18/202448-自身抗体的分自身抗体的分类类及命名及命名 1、以抗体在细胞或组织中存在的位置进行命 名：ANA、AMA、LKM等。2、以靶细胞或靶组织进行命名：抗骨骼肌抗体、抗胰岛细胞抗体等。3、以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写进行命名：抗Sm、抗Ro、抗La等。4、以相关疾病的名字的缩写进行命名：抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B等。5、以抗原的化学性质进行分类命名：抗RNP、抗ss-DNA、抗dsDNA等。4/18/202449-自身免疫性疾病项目u免疫全项：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA、IgC3、C4、CRP、ASO、RF、CIC u肝病自身抗体：ANA、ds-DNA、SMA、AMA、LKM、SLA可溶性 肝抗原、LC1抗肝溶质型抗原 u自身抗体：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA u肾病自身抗体：ANA,ds-DNA,GBM,ANCN.ENAu糖尿病自身抗体：IAA、ICA、GAD 4/18/202450-自身抗体与相关疾病自身抗体与相关疾病 标志抗体 相关疾病 平滑肌抗体(SMA)I 型自身免疫性肝炎 肝肾微粒体抗体(LKM-1)型自身免疫性肝炎 可溶性肝抗原抗体（SLA抗体）型自身免疫性肝炎 线粒体抗体2型(M2)原发性胆汁性肝硬化(PBC)肾小球基底膜(GBM)抗体 肺出血肾炎综合征 中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)多种系统性血管炎 双链DNA抗体 系统性红斑狼疮 Sm抗体 系统性红斑狼疮 SSA-B抗体 干燥综合征 Scl-70 进行性系统性硬化症 Jo-1抗体 多发性肌炎皮肌炎 高滴度RNP抗体 混合性结缔组织病4/18/202451-