高效液色谱.pptx

2024/4/25 周四经典液相色谱经典液相色谱高效液相色谱高效液相色谱常压或减压常压或减压高压高压404050Mpa50Mpa填料颗粒大填料颗粒大填料颗粒小填料颗粒小2 250um50um柱效低柱效低柱效高柱效高40000-60000plate40000-60000plate分析速度慢分析速度慢分析速度快分析速度快色谱柱只用一次色谱柱只用一次色谱柱可重复多次使用色谱柱可重复多次使用不能在线检测不能在线检测能在线检测能在线检测2024/4/25 周四气相色谱气相色谱高效液相色谱高效液相色谱分析挥发物质（约分析挥发物质（约2020）几乎可以分析各种物质几乎可以分析各种物质不能用于热不稳定物质不能用于热不稳定物质可以用于热不稳定物质可以用于热不稳定物质毛细管色谱有很高柱效毛细管色谱有很高柱效柱长有限，柱效不很高柱长有限，柱效不很高有灵敏的检测器有灵敏的检测器无较灵敏的通用检测器无较灵敏的通用检测器运行和操作容易运行和操作容易运行和操作难一些运行和操作难一些仪器制造难度小一些仪器制造难度小一些仪器制造难度大一些仪器制造难度大一些2024/4/25 周四1.目前尚无通用的高灵敏检测器目前尚无通用的高灵敏检测器;2.仪器昂贵仪器昂贵;3.维持成本高维持成本高;4.溶剂通用甲醇，有毒溶剂通用甲醇，有毒,所以能用所以能用GC,尽量不用尽量不用HPLC.2024/4/25 周四二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速、高灵敏度特点：高压、高效、高速、高灵敏度 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2024/4/25 周四三、流程及主要部件三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC1.1.流程流程2024/4/25 周四2.主要部件主要部件(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：150350105 Pa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小小的的固固定定相相（甲酰胺甲酰胺 乙腈乙腈 甲醇甲醇 乙醇乙醇 丙醇丙醇 丙酮丙酮 二氧六环二氧六环 四氢呋喃四氢呋喃 甲乙酮甲乙酮 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 乙醚乙醚 异丙醚异丙醚 二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿溴乙烷溴乙烷苯苯四氯化碳四氯化碳二硫化碳二硫化碳环己烷环己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)2024/4/25 周四4.4.选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。检测器时，流动相不应有紫外吸收。2024/4/25 周四一、一、影响分离的因素影响分离的因素 factors influenced separation1.1.影响分离的因素与提高柱效的途径影响分离的因素与提高柱效的途径 在在高高效效液液相相色色谱谱中中,液液体体的的扩扩散散系系数数仅仅为为气气体体的的万万分分之之一一，则则 速速 率率 方方 程程 中中 的的 分分 子子 扩扩 散散 项项 B/U较较 小小，可可 以以 忽忽 略略 不不 计计，即即：H=A+C u 故液相色谱故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。2024/4/25 周四 液液体体的的黏黏度度比比气气体体大大一一百百倍倍，密密度度为为气气体体的的一一千千倍倍，故故降低传质阻力是提高柱效主要途径。降低传质阻力是提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可能通过液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。增加柱温来改善传质。恒温恒温 改变淋洗液组成、极性是改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。改善分离的最直接的因素。2024/4/25 周四 2.2.流速流速 流速大于流速大于0.5 cm/s时时,Hu曲线是一段斜率不大的直线。曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。降低流速，柱效提高不是很大。但但在实际操作中，流量仍是一在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。要可选择参数。3.3.固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。2024/4/25 周四二、分离类型选择二、分离类型选择 choice of separation types2024/4/25 周四三、三、HPLC的的应用应用 application of HPLC 1.1.环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相固定相：薄壳型硅胶薄壳型硅胶(37 50 m)流动相：正己烷流动相：正己烷 流流 速：速：1.5 mL/min 色谱柱：色谱柱：50cm 2.5mm(内径内径)检测器：差示折光检测器检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析残留量进行分析。2024/4/25 周四2.2.稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。固定相固定相：十八烷基硅烷化键合相十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：20%甲醇甲醇-水水 100%甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/min 流流 速：速：1mL/min 柱柱 温：温：50 C 柱柱 压：压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器