生殖道抗HPV生物蛋白应用体会@北京协和医院杨毅.ppt

把握防治宫颈癌前病变和宫颈癌的关键采用抗采用抗HPVHPV生物蛋白敷料生物蛋白敷料进行进行生殖道HPV感染早诊早治北京协和医院 妇产科杨 毅接接接接种种种种疫疫疫疫苗苗苗苗（美美美美国国国国疾疾疾疾控控控控中中中中心心心心推推推推荐荐荐荐11-1211-12岁岁岁岁，适适适适合合合合13-2613-26岁岁岁岁）初次初次HPVHPV感染感染抗抗HPVHPV生物蛋白敷料阻断生物蛋白敷料阻断HPVHPV感感染染，灭活灭活HPVHPV病毒，病毒，预防预防CCCC持续性持续性HPVHPV感染感染CINCIN 1 1CINCIN 2/32/3宫颈宫颈癌（癌（CCCC）HPV感染到宫颈癌的过程HPVHPV阴性阴性目目的的：预预防防HPVHPV感感染，预防宫颈癌染，预防宫颈癌从从本本质质上上来来看看，无无论论疫疫苗苗还还是是抗抗HPVHPV生生物物蛋蛋白白敷敷料料都都是是在在宫宫颈颈癌癌未未发发病病前前进进行行干干预预，目目的的都是为了降低宫颈癌的发生率，只不过干预的时间点和采用的方式方法不同都是为了降低宫颈癌的发生率，只不过干预的时间点和采用的方式方法不同宫宫颈颈癌癌前前病病变变期期病病情可逆转情可逆转80%（1year）91%（2years）HPV（+）持续性感染HPV感染Over 2 years4-5 years2-5 years9-10yearsCIN 1CIN 2/3浸润性癌变物理治疗：冷冻、激光、电凝手术切除：LEEP、冷刀锥切或全子宫切除等目前处理方法：随访观察国外HPV感染干预理论中的悖论重视HPV疫苗的预防接种忽视HPV已经感染的治疗病毒特点45nm-55nm、小型环状双链DNA 病毒l安全套并不安全！表面密布壳微粒（72个），88%是病毒蛋白(包括L1主要衣壳蛋白和L2）在自然界中稳定性好，即便在没有宿主的寒冷的条件下也能独立存活数个月l要警惕HPV间接传播途径侵染特点常见症状HPV病毒HPV病毒表面的L1蛋白5聚体 MBio.2014 Aug 5;5(4):e01104-14.doi:10.1128/mBio.01104-14.L1的五聚体的五聚体近年来，越来越多的研究发现：接触患者用过的毛巾、内衣裤、盆、床单、便器等生活用品可以被传染HPV；通过为病人检查、手术、上药等治疗时的接触感染；用激光治疗尖锐湿疣时，产生的烟雾中有HPV存在生殖道HPV的亚临床感染等是HPV感染传播中不可忽视的途径。患有外生殖器或肛门尖锐湿疣的患者，在手接触尖锐湿疣后，通过手传染到身体其他部位皮肤粘膜而引起尖锐湿疣由于HPV病毒感染粘膜，故伴侣之间的接吻也能传播病毒HPV感染的间接途径是什么？HPV感染粘膜基底层细胞必备的二个条件：有感染能力的HPV病毒从皮肤、黏膜表面深达基底膜的创口病毒特点感染的靶细胞：有高度增殖能力的黏膜上皮细胞，即基底层细胞基底层细胞常覆有多层分化成熟细胞，只有物理保护屏障受损（如性生活，炎症等）时，病毒才有机会进入基底层细胞子宫颈鳞状、柱状上皮连接处的上皮细胞容易损伤，故容易感染HPV病毒；同时此处也是储备干细胞集中的区域，细胞的修复、增生及转化等也更为活跃，易发生病变。近来的一些研究显示，在直肠肛门、咽喉、食管甚至是胃等部位的肿瘤中也发现有HPV的踪影（约30%）。侵染特点常见症状HPV病毒皮肤、粘膜系统的共同敌人对HPV需要重视，更需要治疗 A、病毒结合至基底膜上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖受体 B、暴露L2易感位点，被前体蛋白转化酶（弗林蛋白酶或PC5/6）消化 C、之后L1的未暴露区与基底细胞膜的一个未知的第二受体结合 HPV 病毒侵染宿主细胞的过程（一）The Journal of Biological Chemistry Vol.286,No.4,Pp.26172624,January 28,2011作用机制：HPV的正电荷区域结合基底细胞的负电荷受体细胞受体5*HPV-L1图中蓝色为正电荷，红色为负电荷 内涵体病毒基因组和L2的复合体释放 胞吞作用病毒通过胞吞作用进入基底细胞，24小时后病毒DNA进入宿主细胞核开始复制。然后随着基底细胞的分化成熟向表层移动，细胞内病毒衣壳蛋白表达并包装病毒DNA形成完整的病毒颗粒，修饰后可释放到上皮表面，继续传播。HPV 病毒侵染宿主细胞的过程（二）HPV持续性感染的原因之一被忽视的生殖道内的恶性循环1230/4XXHPV病毒颗粒共识：HPV持续性感染会导致HPV-DNA与人体DNA整合，因此是引发宫颈癌的根本原因HPV与人体DNA整合的过程IIII：5%5%IIIIII：16%16%CISCIS：87%87%Tips：随着HPV感染时间延长，DNA整合比例增加，癌变风险提高，因此，尽可能早的、快的干预，可有效避免病情进一步恶化I I：0%0%CCCC：100%100%持续性HPV感染的致癌机制 更大机会发生整合，诱导宿主癌变E6基因表达 E7基因表达 X抑癌基因p53，PDZ等X 抑癌基因pRb，最新研究显示，E7还影响宿主细胞周期调控基因p130。E2基因缺失病毒DNA整合到宿主细胞基因组 结合癌变HPV病毒在宿主细胞内的生命周期（约56天）角质层 （14天）透明层颗粒层 棘细胞层（14-42天）基底层 基因转录（13-19天）真皮56天E6/E7表达，增进细胞分裂。HPV病毒DNA随着细胞的分裂和分化逐步上移随着细胞分化，E1/E2/E4/E5蛋白表达.E1/E2/E4涉及病毒基因组复制，E5 编码转化蛋白当被感染细胞进入分化末期，L1/L2 外壳蛋白表达，新病毒随着死亡的粘膜细胞脱落释放。生殖道HPV治疗的疗程：56天国内妇科诊疗适宜技术对HPV干预的推荐明确提出HPV感染的治疗目标：（1）打破HPV感染持续状态（2）清除HPV病毒（3）HPV的干预至少需要连续使用抗病毒治疗3个月（90天）HPV感染的治疗的要点:足量足疗程一个疗程为一个疗程为90天天2012“妇产科研究前沿与生殖道感染诊疗适宜技术专家研讨会”严格禁止性生活积极治疗阴道和宫颈的HPV感染HPV的临床对策HPV感染或者宫颈癌前病变的治疗目标是降低癌变风险持久高效清除HPV病毒尽快及早打破HPV持续性感染，避免病情恶化 HPV感染的“科学”的治疗观点 高危型HPV病毒感染的两种方式“活动感染”和“潜伏感染”与“一过性感染”和“持续性感染”相关。病毒感染初期HPV DNA不整合到宿主细胞DNA中，HPV还会在宿主细胞内产生较多的外壳蛋白。此时感染HPV的宿主细胞没有发生恶变，又比较容易被识别，是清除HPV感染的最佳阶段。一旦由“一过性感染”转为“持续性感染”，HPV DNA整合到宿主细胞DNA后，HPV不再产生外壳蛋白，很难被免疫系统识别，再清除病毒就比较困难了。另外宿主细胞如被诱导发展为宫颈癌前病变或宫颈癌，治疗成本和对女性的损害会明显增加。防治宫颈癌前病变和宫颈癌的关键：早筛查、早治疗，足量足疗程及时清除生殖道HPV感染选择生殖道HPV感染治疗药物：三个“有效”原则有效直接灭活HPV病毒有效促进生殖道粘膜机械性损伤/炎性损伤的修复 有效治疗生殖道的其他炎症目的：阻断生殖道内HPV反复感染的恶性循环！从而避免/减少发生HPV的持续性感染！抗HPV生物蛋白敷料杀毒、促损伤愈合和控制感染全方位的治疗发发明明人人：姜姜世世勃勃教教授授，国国家家“千千人人计计划划”特特聘聘专专家家，复复旦旦大大学学病病原原微微生生物物研研究究所所所所长长，抗抗病病毒毒（AIDSAIDS、SARSSARS、HPVHPV等等）药药物物和和疫疫苗苗研研究究领领域域著著名名科科学学家家美国纽约血液中心和复旦大学联合研制美国纽约血液中心和复旦大学联合研制作用作用机制独特、快速高效机制独特、快速高效-靶向所有靶向所有HPVHPV亚型，灭活病毒亚型，灭活病毒临床疗效突出、安全无副作用临床疗效突出、安全无副作用五项美国专利，两项国家专利五项美国专利，两项国家专利药监局批准用于药监局批准用于HPVHPV感染和宫颈癌前病变的临床治疗性产品感染和宫颈癌前病变的临床治疗性产品茶多酚茶多酚JBJB蛋白蛋白卡波姆卡波姆修复局部微损伤，促进创面愈合极强的粘附吸附，缓释JB蛋白，长时间保持灭活HPV的效果（临床推荐：隔天一次给药）独家专利抗病毒成分JB蛋白来自纽约血液中心靶向结合HPV簇状蛋白，特异性阻止HPV结合基底层细胞，使得HPV失去感染能力缓解阴道炎症及并发症提高局部免疫力，增强抗氧化酶活性、抑制脂质过氧化而抗癌，抑制肿瘤发生、发展抗HPV生物蛋白敷料杀毒、促损伤愈合和控制感染全方位的治疗抗抗HPVHPV生物生物蛋白敷料组成蛋白敷料组成1、茶多酚类化合物抗癌的生物化学和分子生物学基础；2茶多酚的药理作用研究进展靶向灭活HPVJB蛋白靶 向 HPV病 毒，破 坏HPV蛋白外壳结构，并由卡波姆包裹排出体外修复微损伤卡波姆修复粘膜及上皮的微损伤，防止再次感染、复发作用机制打破持续性感染靶向结合HPV簇状蛋白，特异性阻止HPV病毒感染人体的唯一途径JB蛋白提高免疫力茶多酚提高局部免疫力，缓解阴道炎症及并发症，减少HPV再次感染概率临床适用范围1、治疗生殖道高危型HPV的感染；用于高危型HPV感染引起的低级别宫颈病变（CIN I级）的治疗；2、阻断生殖道HPV感染，预防宫颈癌前病变（CIN）及宫颈癌的发生。临床使用经验1、单纯生殖道HPV感染（宫颈、阴道及外阴HPV感染）及CIN1：单独使用抗HPV生物蛋白，用法：隔日一次，每次一支，连用三个月，月经期间停用2、宫颈或阴道高级别病变：结合手术，术后使用，清除残留HPV病毒。用法：止血后使用，隔日一次，每次一支，连用三个月，月经期间停用JB蛋白的生物活性基础研究JB蛋白在实验条件下可100%灭活HPV病毒，阻断HPV与基底细胞直接结合基础研究发表在Microbes and infection(影响因子IF=3.10)100%100%1、JB蛋白表面负电荷与HPV表面的正电荷结合发挥功能证据：JB蛋白的抗HPV活性与其表面负电荷成正相关，JB蛋白表面负电荷越多则活性越好。支持文献：Li L,Jiang S.et al.(2013).J.Antimicrob.Chemother.68(3):573-576.Li L,Jiang S.et al.(2010).Retrovirology 7,37.Neurath AR,Jiang S.et al.(1996).Nature Med.2,230-234.JB蛋白作用机制研究（一）2、JB蛋白表面与HPV表面的空间结构匹配发挥功能支持文献：（1）Li L,Jiang S.et al.(2013).J.Antimicrob.Chemother.68(3):573-576；（2)Li L,Jiang S.et al.(2010).Antimicrob.Agents Chemother 55,1700-1711；(3)Neurath AR,Jiang S.et al.(1997).Antiv.Chem.Chemother 8,141-148；(4)Neurath AR,Jiang S.et al.(1996).Lancet 347,1703-1704；(5)Neurath AR,Jiang S.et al.(1996).Nature Med.2,230-234；(6)Jiang S.et al.(1996).AIDS Res.Hum.Retroviruses 13,461-462.JB蛋白作用机制研究（二）JB蛋白与HPV-L1结合模式JBJB蛋蛋白白通通过过表表面面负负电电荷荷与与HPVHPV表表面面的的正正电电荷荷密密集集区区的的电电荷荷+空空间间结结构构匹匹配配结结合合而发挥功能而发挥功能空白对照组（60例）抗HPV生物蛋白敷料组（60例）8.3%78.3%临床观察（中国人民解放军总医院孟元光主任）治疗3个月，4-6周复诊，HPV分型检测研究结果证实：抗HPV生物蛋白敷料确实可以短期内有效清除生殖道HPV感染！治疗生殖道HPV感染的建议方案1、单纯性HPV感染的治疗：足量足疗程（90天/疗程）可单独使用抗HPV生物蛋白敷料，用法：隔日一次，每次一支，连用三个月，月经期停药。也可联合物理疗法：如生殖道湿疣等物理治疗后使用抗HPV生物蛋白敷料，隔日一次，每次一支，连用三个月。2、CIN及宫颈癌术后也要抗HPV治疗！创面修复后阴道内使用抗HPV生物蛋白敷料，隔日一次，每次一支，连用三个月/疗程。美美美美国国国国纽纽纽纽约约约约血血血血液液液液中中中中心心心心对对对对JBJB蛋蛋蛋蛋白白白白进进进进行行行行了了了了细细细细胞胞胞胞毒毒毒毒性性性性实实实实验验验验和和和和动动动动物物物物体体体体内内内内试试试试验验验验，均均均均证实证实证实证实JBJB蛋白极蛋白极蛋白极蛋白极为为为为安全。安全。安全。安全。临临临临床研究及上百家医院的床研究及上百家医院的床研究及上百家医院的床研究及上百家医院的临临临临床使用都床使用都床使用都床使用都证实证实证实证实JBJB蛋白极其安全、可靠。蛋白极其安全、可靠。蛋白极其安全、可靠。蛋白极其安全、可靠。Preclinical Studies of Chemically Modified-Lactoglobulin(B69)for Prevention of Sexual Transmission of HIV-1,Herpesviruses and Chlamydia trachomatis安全性评估北京大学第一医院 中国人民解放军总医院哈尔滨医科大学附属第一医院 哈尔滨医科大学附属第二医院成都军区总医院 苏州大学附属第一医院广州军区总医院 浙江大学附属第二医院西京医院 河南省肿瘤医院湖北省妇幼保健院 鹤壁市人民医院等等国内已有上百家医院在临床使用，临床反馈效果极佳，给HPV感染和宫颈癌前病变的女性带来了福音！该产品已为以下医院患者服务临床体会 一有些HPV感染治疗后转阴比较快，而有些感染转阴却较长？分析：HPV感染早期 病毒颗粒完整，没发生整合，有外壳蛋白，容易识别。抗HPV生物蛋白敷料可以通过直接灭活HPV病毒、激活免疫反应等就能有效、快速、彻底地清除病毒。因此转阴比较快。而HPV感染后期 病毒DNA与宿主细胞基因组进行整合，常无病毒衣壳蛋白，宿主免疫系统不容易识别，感染转阴所需要治疗的时间较长。建议：对HPV早诊早治，切勿“养虎为患”！临床体会 二持续HPV感染，药物治疗无效者如何处理？分析：长期持续感染高危型HPV，经常发生HPV DNA 和宿主基因组的整合，单纯药物治疗比较困难。建议：首先采用物理/手术方法去除宫颈的转化区（HPV的易感区），清除大量已经发生了整合的宿主细胞。术后及时足量足疗程使用抗HPV生物蛋白敷料清除生殖道残余、零散的HPV病毒，常可达到很快转阴的疗效。生殖道HPV感染治疗总结不轻视，不恐惧正确认知HPV与宫颈癌的关系HPV需要早诊早治宫颈病变术后也要抗HPV治疗3个有效的原则有效灭活HPV病毒有效治疗其它感染有效促进黏膜修复 足量足疗程用药时长用药选择用药理念3个月/疗程个体化治疗方案阻断HPVHPV感染 远离宫颈癌