DB37∕T 4252—2020 灵芝菌种质量要求(山东省).pdf

ICS 65.020.20 CCS B 05 山东省地方标准 DB37/T 42522020 37 灵芝菌种质量要求 Quality requirements of Ganoderma lingzhi spawn 2020-12-04 发布 2021-01-01 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 42522020 I 目次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 质量指标 . 1 4.1 固体菌种 . 1 4.1.1 母种质量 . 1 4.1.2 原种质量 . 2 4.1.3 栽培种质量 . 3 4.2 液体菌种 . 4 4.2.1 摇瓶液体菌种质量 . 4 4.2.2 发酵罐液体菌种质量 . 5 5 检验规则 . 6 6 留样 . 6 附录 A（规范性） 母种栽培性状检验方法和检验项目 . 7 DB37/T 42522020 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。 本文件由山东省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位： 泰安市农业科学研究院、 山东省农业技术推广总站、 山东三秀生物科技有限公司。 本文件主要起草人：王庆武、高霞、丛倩倩、赵淑芳、崔晓、孙振福、唐丽娜、马化彬、李秀梅、司元明、兰玉菲、张燕、安秀荣、于清伟、曹子英。 DB37/T 42522020 1 灵芝菌种质量要求 1 范围 本文件规定了灵芝菌种质量要求的术语和定义、质量指标、检验规则、留样等技术要求。 本文件适用于灵芝菌种质量要求。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 150.1 压力容器 第1部分：通用要求 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 3 术语和定义 GB/T 12728、NY/T 528界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 液体菌种 liquid spawn 用液体培养基，在发酵罐中，通过深层培养技术生产的液体形态的食用菌菌种。 3.2 终止 pH terminal pH value of medium 液体菌种达到放罐指标时的培养基pH。 4 质量指标 4.1 固体菌种 4.1.1 母种质量 4.1.1.1 容器 容器及封口物应符合NY/T 528的规定。 4.1.1.2 感官要求 母种感官要求应符合表1的规定。 表1 母种感官要求 DB37/T 42522020 2 项目 检测方法 要求 容器 肉眼观察 完整、无损、洁净 试管塞 肉眼观察 棉塞或硅胶塞，应干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌 培养基灌入量 肉眼观察 试管总容量的 1/51/4 斜面长度 肉眼观察、测量 斜面顶端距试管塞底部距离 40 mm50 mm 接种块大小 肉眼观察、测量 边长 3 mm5 mm，厚 2.5 mm3 mm 菌种外观 菌丝生长量 肉眼观察 长满斜面 菌丝体特征 整齐浓密、丝状或绒毛状，白色 菌丝体表面 均匀、平整、无角变 菌落边缘 整齐 菌丝分泌物 无 杂菌菌落 无 斜面背面外观 肉眼观察 培养基贴壁、不干缩，颜色均匀、无暗斑、无明显色素 气味 鼻嗅 有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 子实体原基 肉眼观察 无 纯度 肉眼观察，必要时5放大镜观察 纯培养物，无虫（螨）体等生物 菌种微观 菌丝显微形态 显微镜 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 4.1.1.3 菌丝长速 采用PDA培养基， 接种后26 28 避光培养， 48 h内菌丝萌发定植， 8 d10 d菌丝长满18 mm180 mm试管斜面。 4.1.1.4 母种栽培性状检验 在棉籽壳68 %、阔叶木屑20 %、麦麸10 %、石膏1 %、石灰1 %、pH 6.06.5，含水量55 %60 %的培养基上，应符合附录A的方法，确证母种栽培性状合格后，方可生产原种和栽培种。 4.1.1.5 贮存要求 常温下贮存时间不超过7 d，4 6 下贮存时间不超过90 d。 4.1.2 原种质量 4.1.2.1 容器 容器应符合NY/T 528的规定。菌种瓶封口应使用透气和滤菌的棉塞或无棉盖体，菌种袋封口应使用套环或扎口。 4.1.2.2 感官要求 DB37/T 42522020 3 原种感官要求应符合表2的规定。 表2 原种感官要求 项目 检测方法 要求 容器 肉眼观察 完整、无损、洁净 封口物 肉眼观察 干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌 培养基上表面距瓶（袋）口的距离 肉眼观察、测量 （505） mm 接种量 肉眼观察、测量 每瓶（袋）接 1.5 cm2 cm 的母种一块 菌种 外观 菌丝生长量 肉眼观察 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健 培养物 紧贴瓶（袋）壁，无干缩，无菌皮 培养物表面菌丝体 均匀一致，无角变，无高温抑制线 培养物表面分泌物 无，允许有少量无色或浅黄色透明水珠 杂菌菌落 无 拮抗现象 无 子实体原基 无 气味 鼻嗅 有灵芝菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味 纯度 肉眼观察，必要时 5放大镜观察 纯培养物，无虫（螨）体等生物 菌种 微观 菌丝显微形态 显微镜 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 4.1.2.3 菌丝长速 在棉籽壳47 %、 阔叶木屑40 %、 麦麸10 %、 葡萄糖1 %、 石膏1 %、 石灰1 %、 pH 6.06.5， 含水量55 %62 %的培养基上，接种后，26 28 ，空气相对湿度50 %70 %条件下，避光培养，菌丝应在35 d37 d长满750 mL菌种培养瓶。 4.1.2.4 贮存要求 在清洁、 通风、 干燥 （空气相对湿度50 %70 %） 、 避光的室内， 常温下贮存时间不超过10 d， 4 6 下贮存时间不超过30 d。 4.1.3 栽培种质量 4.1.3.1 容器 容器应符合NY/T 528的规定，容器封口应符合4.1.2.1规定。 4.1.3.2 感官要求 栽培种感官要求应符合表3的规定。 DB37/T 42522020 4 表3 栽培种感官要求 项目 检测方法 要求 容器 肉眼观察 完整、无损、洁净 封口物 肉眼观察 干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌 培养基上表面距瓶（袋）口的距离 肉眼观察、测量 （505） mm 接种量 肉眼观察、称量 12 g15 g/瓶（袋） 菌种外观 菌丝生长量 肉眼观察 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健、饱满 培养物 紧贴（瓶）袋壁，无干缩，无菌皮 不同部位菌丝体 生长均匀，色泽一致，无角变，无高温抑制线 培养物表面分泌物 无，允许有少量无色或浅黄色透明水珠 杂菌菌落 无 拮抗现象 无 子实体原基 无 气味 鼻嗅 有灵芝菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味 纯度 肉眼观察，必要时 5放大镜观察 纯培养物，无虫（螨）体等生物 菌种微观 菌丝显微形态 肉眼观察 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 4.1.3.3 菌丝长速 在棉籽壳48 %、阔叶木屑40 %、麦麸10 %、石膏1 %、石灰1 %、pH 6.06.5、含水量55 %62 %的培养基上，接种后26 28 避光培养，空气相对湿度50 %70 %，菌丝应在35 d40 d长满17 cm35 cm菌种袋。 4.1.3.4 贮存要求 在清洁、 通风、 干燥 （空气相对湿度50 %70 %） 、 避光的室内， 常温下贮存时间不超过15 d， 4 6 下贮存时间不超过45 d。 4.2 液体菌种 4.2.1 摇瓶液体菌种质量 4.2.1.1 容器 使用1 L2 L三角烧瓶或抽滤瓶，瓶口应使用能透气和滤菌的封口膜或瓶塞封口。 4.2.1.2 感官要求 摇瓶液体菌种感官要求应符合表4的规定。 DB37/T 42522020 5 表4 摇瓶液体菌种感官要求 项目 检测方法 要求 菌液色泽 肉眼观察 菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色 菌液气味 鼻嗅 有灵芝液体菌种培养时特有的气味，无异味 菌液形态 肉眼观察 菌液澄清透明不浑浊，菌丝体密集 菌种微观 显微镜 菌丝有隔膜、有锁状联合，无杂菌 4.2.1.3 理化性状要求 在葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、牛肉膏3 g/L、磷酸二氢钾1 g/L、硫酸镁0.5 g/L，维生素B1 5 mg/L的培养基中， pH 自然， 接种78块2 mm3 mm的母种菌块， 避光静置24 h后置于恒温摇床上， 25 28 、140 r/min160 r/min培养4 d6 d，摇瓶液体菌种理化指标应符合表5的规定。 表5 摇瓶液体菌种理化指标 项目 检测方法 要求 终止 pH pH 计或 pH 试纸 4.05.5 菌丝体湿重（mg/mL） 10 000 r/min 离心 5 min，去掉上清液称重 50 4.2.1.4 贮存要求 在清洁、通风、干燥（空气相对湿度50 %70 %）、避光的室内，常温下贮存时间不超过2 d，4 6 下贮存时间不超过7 d。 4.2.2 发酵罐液体菌种质量 4.2.2.1 容器 使用100 L800 L食用菌液体菌种培养专用发酵罐，不锈钢材质、应符合GB 150.1的要求，经有关部门检验合格。 4.2.2.2 感官要求 发酵罐液体菌种感官要求应符合表6的规定。 表6 发酵罐液体菌种感官要求 项目 检测方法 要求 菌液色泽 肉眼观察 菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色 菌液气味 鼻嗅 有灵芝液体菌种培养时特有的气味，无异味 菌液形态 肉眼观察、手感 菌液澄清透明不浑浊，稍粘稠；菌丝体密集、均匀悬浮于液体中不分层 菌种微观 显微镜， 营养肉汤固体和液体培养基 菌丝粗壮、分枝密度高、有隔膜，可见锁状联合，无杂菌 4.2.2.3 理化性状要求 DB37/T 42522020 6 在葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L， 牛肉膏3 g/L， 磷酸二氢钾1 g/L，硫酸镁0.5 g/L，维生素B1 5 mg/L，消泡剂0.3 g/L的培养基中，pH 自然，接种量为0.5 %1.0 %，发酵罐持续通入无菌空气，维持罐压0.02 MPa0.03 MPa，25 28 培养6 d7 d，发酵罐液体菌种理化指标应符合表7的规定。 表7 发酵罐液体菌种理化指标 项目 检测方法 要求 终止 pH pH 计或 pH 试纸 3.65.5 菌丝体湿重（mg/mL） 10 000 r/min 离心 5 min，去掉上清液称重 50 4.2.2.4 贮存要求 发酵罐液体菌种生产后应及时使用。如不能及时使用，发酵罐内需持续通无菌空气，保持罐压0.02 MPa0.03 MPa，常温下贮存时间不超过2 d。 5 检验规则 各类菌种按质量指标要求和NY/T 1742规定进行检验，检验项目全部符合质量指标要求时，为合格菌种，其中任何一项不符合要求，均为不合格菌种。 6 留样 除液体菌种外， 各级菌种都要留样备查， 每个批号各级菌种留样数量为35支 （瓶、 袋） ， 均于4 6 贮存至该批菌种正常条件下第一潮芝采收。 DB37/T 42522020 7 附录A （规范性） 母种栽培性状检验方法和检验项目 将被检母种制成原种，采用4.1.1.4规定的培养基配方，制作栽培袋90个，以该母种的出发菌株为对照，3次重复，试验棚内随机排袋常规管理出芝，调查记录表5中所列项目，统计检验结果。对比二者的检验结果，以时间计的检验项目中，被检母种任何一项的时间，较对照菌株推迟5 d以上（含5 d）者为不合格；产量显著低于对照菌株者为不合格；芝体外观形态与对照明显不同或畸形者为不合格。 表A.1 母种栽培性状检验记录 检验项目 检验结果 检验项目 检验结果 母种长满所需时间/d 第一潮芝生物学效率/（%） 原种长满所需时间/d 总生物学效率/（%） 栽培袋长满所需时间/d 子实体形态 出原基所需时间/d 芝盖直径、厚度，柄长、柄径/cm