高效液相色谱法测定消乳散结胶囊中香附烯酮和α-香附酮的含量.pdf

年第 卷第 期 作者简介 张大勇，男，主管药师，研究方向：药物分析。：通讯作者 马，男，主任药师，研究方向：药品质量控制及评价。：高效液相色谱法测定消乳散结胶囊中香附烯酮和 香附酮的含量张大勇，崔业波，马晓静，孙艳杰，马（四平市食品药品检验所，吉林 四平 ）摘要 目的：建立 色谱法测定消乳散结胶囊中香附烯酮和 香附酮的含量。方法：采用 （，）为色谱柱，以甲醇 水（）作为流动相，流速为 ；检测波长为 ；柱温 ；进样体积 。结果：香附烯酮在 范围内线性关系良好，相关系数为 ，香附酮在 范围内线性关系良好，相关系数为 ；香附烯酮和 香附酮的精密度、稳定性（）、重复性实验的 均小于 （），平均加样回收率分别为 ，为 和 ，为 。结论：该检测方法专属性高，准确度良好，简单易行，为消乳散结胶囊的质量控制及评价提供依据。关键词 消乳散结胶囊；香附烯酮；香附酮；高效液相色谱法 中图分类号 文献标志码 文章编号 （），（，）：（，）（）：，（）（）（）（），：，；（）消乳散结胶囊为临床妇科用药，主要治疗因肝郁气滞导致的乳腺结节、乳腺增生和乳房胀痛，其由 味中药组成，包括醋柴胡、醋香附等 ，。该品种质量标准最早收载于国家药品中药标准外科妇科分册，标准编号为 （）。年，国家药典委员会对该品种质量标准进行了提高，现行质量标准为原国家食品药品监督管理局国家药品标准，标准编号为 （），该标准增加了丹参药味的薄层色谱鉴别，并未对醋香附设置含量测定项 。现阶段对其报道多为对芍药苷、迷迭香酸、黄苓苷、丹酚酸 、汉黄苓苷、丹皮酚、柴胡皂苷 、柴胡皂苷 等 药味成分的定量分析，对醋香附成分的含量测定方法鲜有报道，因此，建立香附药味含量测定有助于消乳散结胶囊中醋香附的质量控制。消乳散结胶囊中的醋香附长于疏肝理气，并能行气止痛；用治肝气郁结所致的月经不调、经行腹痛、乳房胀痛或经闭等证；常与当归、柴胡、川芎等配伍，为消乳散结胶囊功效主要药味 。现行质量标准仅对醋香附药味中 香附酮的薄层色谱鉴别做了质控，为了提高该品种中醋香附的质量能力，逐渐完善质量标准，确保临床用药效果，本文以醋香附中香附烯酮 ，评价技术与方法和 香附酮为目标，采用 法同时测定种成分含量，为消乳散结胶囊的质量控制提供一种有效的分析方法。仪器与材料 仪器高效液相色谱仪 型（美国安捷伦科技有限公司），型电子天平（北京赛多利斯公司），冷水循环机 性（公司）。试剂试药香附 烯 酮 对 照 品（批 号：）来 自 ，香附酮对照品（批号：）购自中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯，公司）；水为超纯水。消乳散结胶囊共 批，为同一生产单位，批号分别为 、和 ，前 批来源为 年四平市食品药品检验所检验样品，后 批为辖区内药店购买。方法与结果 色谱条件色谱柱：（，）；以 甲醇水溶液为流动相，流速为 ，检测波长为 ，进样量为 ，柱温：；理论板数以 香附酮色谱峰计不小于 。溶液的配制 对照品溶液精密称取香附烯酮和 香附酮对照品 和 ，分别置 和 量瓶中，加入适量甲醇使溶解，再稀释至刻度；再精密吸取 和 上述溶液置 量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即可。供试品溶液精密称取消乳散结胶囊内容物约 ，置 圆底烧瓶中，照挥发油测定装置连接，自挥发油测定管加入 水，并加入乙酸乙酯约 ，开始蒸馏，并开启冷水循环机，设置温度。加热至沸腾，保持沸腾 后，分取乙酸乙酯层，用少量甲醇自冷凝管上端，分 次洗涤，合并溶液，转移置 量瓶并稀释至刻度，摇匀即可。阴性对照溶液取除醋香附外的 味药材，按照消乳散结胶囊标准制法同法制备约 粒量的阴性样品，称取约相当于 粒的量，按照 项下的方法制备阴性对照溶液。专属性考察取上述 项下的种溶液各 ，按照 项下的色谱图条件分析，获得色谱图。通过色谱图 ，可知阴性对照在香附烯酮和 香附酮保留时间相应位置处未检出响应的色谱峰，且供试品溶液中，目标色谱峰与相邻色谱峰达到基线分离，且峰形对称度良好，符合要求。线性关系量取 项对照品溶液 、，按照 项下色谱条件分析，并记录色谱图并计算目标成分的峰面积，以香附烯酮和 香附酮质量数为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果香附烯酮与 香附酮分别在 和 范围内线性关系良好，回归方程依次为 ，和 ，。精密度考察取 项对照品溶液，按照 项下的色谱条件连续分析 次，记录目标成分色谱峰。以香附烯酮和 香附酮峰面积计算精密度，香附烯酮峰面积 ，香附酮峰面积 ，仪器精密度良好。重复性考察取同一批（批号：）消乳散结胶囊 粒（约 ），按照 同法制备供试品溶液，共计 份，按照 项下色谱条件分析，供试品中含有香附烯酮 粒，值为 ，含 香附酮 粒，为 ，本方法重复性满足实验要求。稳定性考察取重复性项下供试品溶液 份，分别与 、时注入高效液相色谱仪中，同条件分析，分别记录目标成分色谱峰峰面积，计算 内 依次为 和 ，说明溶液稳定性良好。加样回收率取同一批号（批号：）消乳散结胶囊 粒内容物（约 ），再加入等量的香附烯酮和 香附酮（取香附烯酮 和 香附酮对照品 ，分别置 和 量瓶中，用乙酸乙 酯 溶 解，分 别 精 密 量 取 和 ），按照 同法制备，平行处理 份，得供试品溶液，进样分析，计算各样品中目标成分的回收率，结果见表 。样品测定从 个批号的消乳散结胶囊，按照 项下方法平行处理 份，按照上述色谱条件进样测定，计算样品中香附烯酮灰分 香附酮的平均含量，结果见表 。年第 卷第 期注：阴性对照；对照品溶液；供试品溶液；香附烯酮；香附酮图 消乳散结胶囊高效液相色谱图表 加样回收率试验结果名称样品中含量（）测定量（）加入量（）回收率（）平均回收率（）（）香附烯酮 香附酮 ，评价技术与方法表 消乳散结胶囊中香附烯酮和 香附烯酮含量测定结果批号香附烯酮含量（粒）（）香附烯酮（粒）（）讨论 色谱条件的选择香附烯酮和 香附酮的分析报道较多 ，主要采用气相色谱法，本文选择液相 二极管阵列检测器分析，通过计算峰纯度和光谱图，调整色谱条件，已达到满意的分析结果和色谱峰，与气相色谱法比较，液相 二极管阵列检测器方法优势明显。通过 检测器在 范围内全波长扫描，香附烯酮（）与 香附酮（）的最大吸收波长相差 ，结合样品中的香附稀酮含量较高的特点，优选 香附酮（）的最大吸收作为检测波长。本文并考察了 （）、和 三 款 同 规 格（，）色谱柱，均可将二者完全分离，且与相邻色谱峰分离度大于 。供试品溶液的制备消乳散结胶囊中包含 味中药，成分较为复杂，本文利用香附药材中香附烯酮和 香附酮具有挥发的特性，采用挥发油提取的方式制备供试品溶液，对目标成分进行了净化处理，提高分析准确度和专属性，避免对目标成分的干扰。前期试验分别考察乙酸乙酯、二甲苯、石油醚（）和甲苯对挥发油的接收能力，结果发现二甲苯和甲苯在供试品溶液制备过程中存在溶剂兼容性问题，故未采用；石油醚则挥发性较强，在蒸馏过程中减少明显，因此，最后选择乙酸乙酯，且冷凝水温度为。醋香附挥发油中主要目标成分为香附烯酮和 香附酮。目前，有关香附的研究报道认为药理活性与其挥发油成分相关 。本文建立了 法测定消乳散结胶囊中醋香附的香附烯酮和 香附酮含量测定，其结果建议以二者总量表示更为合理准确。本研究的分析方法，为香附饮片原粉入成药的品种的含量分析提供思路和参考。参考文献 刘国勋 消乳散结胶囊治疗乳腺增生症临床疗效观察 中国中医药咨讯，（）：赵依雯，王霖 消乳散结胶囊致罕见不良反应一例 中国疗养医学，（）：国家药典委员会 国家食品药品监督管理局国家药品标准 （）许丽丽，林林，于凤蕊，等 消乳散结胶囊多指标含量测定及化学计量学分析 药物分析杂志，（）：周灿，安军，邓言欢，等 探索消乳散结胶囊中柴胡的鉴别及含量测定 首都食品与医药，（）：张静，杨俊，李娟 法测定消乳散结胶囊中芍药苷的含量 中医药导报，（）：夏玲，严辉，郭盛，等 经典名方中香附的本草考证 中国实验方剂学杂志，（）：纪亮，雷敬卫，张维方，等 基于 技术研究不同产地加工方法对香附挥发性成分的影响 中国药学杂志，（）：纪亮，雷敬卫，张维方，等 不同产地加工方法对香附质量的影响 中国药房，（）：纪亮，雷敬卫，张维方，等 基于 定性分析结合多成分含量测定评价香附不同部位药用价值 中华中医药学刊，（）：，许娜，梁媛媛，李文兵，等 香附挥发油研究进展 中成药，（）：许娜，牟玉侦，李文兵等 基于 法和多元统计分析的不同产地香附挥发油中 种成分含量的比较研究 中国药房，（）：李卓亚，袁继承 高效液相色谱法测定散结止痛颗粒中 香附酮的含量测定 海峡药学，（）：王凤霞，钱琪，李葆林，等 香附化学成分和药理作用研究进展及质量标志物（）预测分析 中草药，（）：赵威，于志勇 香附烯酮与卡铂联合应用对三阴性乳腺癌细胞株 增殖、凋亡的影响及其机制 山东医药，（）：叶晓滨，孙越 含香附治疗肝郁脾虚证的中成药干预抑郁症伴功能性消化不良的研究进展 中医研究，（）：张晶，刘莉，徐慧荣，等 香附化学成分及药理作用研究新进展 化学工程师，（）：，潘少斌，孔娜，李静，等 香附化学成分及药理作用研究进展 中国现代中药，（）：（收稿日期：）