藁本内酯调控PKD1_HIF-1α_VEGF通路对心力衰竭大鼠的改善作用.pdf

第 50 卷 第 1 期2024年 1 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.1Jan.2024DOI：10.13481/j.1671587X.20240106藁本内酯调控 PKD1/HIF-1/VEGF通路对心力衰竭大鼠的改善作用张岚,武永新,张涛,王东伟（郑州大学附属郑州中心医院心血管内科，河南 郑州 450001）摘要 目的目的：探讨藁本内酯对心力衰竭大鼠心功能和血管生成的影响，并分析其对蛋白激酶 D1（PKD1）/缺氧诱导因子 1（HIF-1）/血管内皮生长因子（VEGF）通路的调节作用。方法方法：SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、藁本内酯组、PKD1/HIF-1/VEGF 信号通路阻断剂 CID755673（CID）组和藁本内酯+CID组，采用冠状动脉左前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型，藁本内酯组大鼠尾静脉注射藁本内酯 20 mg kg1，CID 组大鼠腹腔注射 CID 50 mg kg1，藁本内酯+CID 组大鼠腹腔注射 CID 50 mg kg1后尾静脉注射藁本内酯 20 mg kg1，每日 1次，连续 4周。采用心脏超声检查各组大鼠心功能指标，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法检测各组大鼠心肌梗死面积百分率，HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现，实时荧光定量 PCR法（RT-qPCR）法和蛋白印迹法 检 测 各 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、CD31 和 VEGF mRNA 及 蛋 白 表 达 水 平。结果结果：与假手术组比较，模型组和 CID 组大鼠心肌细胞形态发生改变，细胞间隙增宽，排列紊乱，可见肌纤维断裂和炎性细胞浸润；藁本内酯组和藁本内酯+CID 组大鼠心肌纤维排列相对整齐，心肌纤维断裂相对较少，炎性细胞数减少。与假手术组比较，模型组大鼠左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短率（LVFS）降低（P0.05），左心室收缩末期内径（LVESD）和左心室舒张末期内径（LVEDD）增大（P0.05），心肌组织中 PKD1、HIF-1、CD31和 VEGF mRNA 及蛋白表达水平降低（P0.05）；与 模 型 组 比 较，藁 本 内 酯 组 大 鼠 LVEF 和 LVFS 升 高（P0.05），LVESD 和LVEDD减小（P0.05），心肌梗死面积百分率降低（P0.05），心肌组织中 PKD1、HIF-1、CD31和 VEGF mRNA 及蛋白表达水平升高（P0.05）；与模型组比较，CID 组大鼠 LVEF 和 LVFS 降低（P0.05），LVESD 和 LVEDD 增大（P0.05），心肌梗死面积百分率升高（P0.05），心肌组织中 PKD1、HIF-1、CD31和 VEGF mRNA 及蛋白表达水平降低（P0.05）；与藁本内酯组比较，藁本内酯+CID 组大鼠 LVEF 和 LVFS 明显降低（P0.05），LVESD 和 LVEDD 增大（P0.05），心肌梗死面积百分率升高（P0.05），心肌组织中 PKD1、HIF-1、CD31和 VEGF mRNA 及蛋白表达水平降低（P0.05）；与 CID 组比较，藁本内酯+CID 组大鼠 LVEF 和 LVFS 升高（P0.05），LVESD 和 LVEDD 减小（P0.05），心肌梗死面积百分率降低（P0.05），心肌组织中 PKD1、HIF-1、CD31 和 VEGF mRNA 及 蛋 白 表 达 水 平 升 高（P0.05）。结 论结 论：藁 本 内 酯 可 通 过 激 活PKD1/HIF-1/VEGF 通路发挥促进心力衰竭大鼠血管生成、缩小其心肌梗死面积和改善心功能的作用。关键词 心力衰竭；血管再生；藁本内酯；蛋白激酶 D1；缺氧诱导因子 1；血管内皮生长因子中图分类号 R285.5;R541.6文献标志码 A文章编号 1671587X(2024)01004208收稿日期 20221011基金项目 河南省卫健委医学科技攻关计划项目（2018010047）作者简介 张 岚（1982），女，北京市人，副主任医师，主要从事心血管系统疾病临床方面的研究。通信作者 张岚，副主任医师（E-mail：）42张岚，等.藁本内酯调控 PKD1/HIF1/VEGF通路对心力衰竭大鼠的改善作用Improvement effect of ligustilide on rats with heart failure by regulating PKD1/HIF-1/VEGF pathway ZHANG Lan,WU Yongxin,ZHANG Tao,WANG Dongwei（Department of Cardiology，Affiliated Zhengzhou Central Hospital，Zhengzhou University，Zhengzhou 450001，China）ABSTRACT Objective：To discuss the effect of ligustilide on the cardiac function and angiogenesis in the rats with heart failure，and to clarify its regulatory effect on protein kinase D1（PKD1）/hypoxia-inducible factor-1（HIF-1）/vascular endothelial growth factor（VEGF）pathway.Methods：The SD rats were randomly divided into sham operation group，model group，ligustilide group，PKD1/HIF-1/VEGF signaling pathway inhibitor CID755673（CID）group，and ligustilide+CID group.The heart failure rat model was established by ligation of the left anterior descending coronary artery.The rats in ligustilide group were injected intravenously with 20 mg kg1 ligustilide，the rats in CID group were injected intraperitoneally with 50 mg kg1 CID，and the rats in ligustilide+CID group were injected intraperitoneally with 50 mg kg1 CID followed by intravenous injection of 20 mg kg1 ligustilide，once per day for 4 consecutive weeks.The cardiac function indexes of the rats in various groups were detected by echocardiography；the percentages of myocardial infarction areas of the rats in various groups were detected by 2，3，5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）staining；the pathomorphology of myocardium tissue of the rats in various groups was observed by HE staining；the expression levels of PKD1，HIF-1，CD31，and VEGF mRNA and proteins in ischemic area of myocardium tissue of the rats in various groups were detected by real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）and Western blotting methods.Results：Compared with sham operation group，the rats in model group and CID group had altered myocardial cell morphology，increased intercellular gaps，disorganized arrangement，visible muscle fiber breaks and inflammatory cell infiltration；the rats in ligustilide group and ligustilide+CID group had relatively orderly myocardial fiber arrangement，fewer myocardial fiber breaks and decreased number of inflammatory cells.Compared with sham operation group，the left ventricular ejection fraction（LVEF）and left ventricular fractional shortening（LVFS）of the rats in model group were decreased（P0.05），the left ventricular end-systolic diameter（LVESD）and left ventricular end-diastolic diameter（LVEDD）were increased（P0.05），and the expression levels of PKD1，HIF-1，CD31，and VEGF mRNA and proteins in myocardium tissue were decreased（P0.05）.Compared with model group，the LVEF and LVFS of the rats in ligustilide group were increased（P0.05），the LVESD and LVEDD were decreased（P0.05），the percentage of myocardium infarction area was decreased（P0.05），and the expression levels of PKD1，HIF-1，CD31，and VEGF mRNA and proteins in myocardium tissue were increased（P0.05）；compared with model group，the LVEF and LVFS of the rats in CID group were decreased（P0.05），the LVESD and LVEDD were increased（P0.05），the percentage of myocardium infarction area was increased（P0.05），and the expression levels of PKD1，HIF-1，CD31，and VEGF mRNA and proteins in myocardium tissue were decreased（P0.05）；compared with ligustilide group，the LVEF and LVFS of the rats in ligustilide+CID group were decreased（P0.05），the LVESD and LVEDD were increased（P0.05），the percentage of myocardium infarction area was increased（P0.05），and the expression levels of PKD1，HIF-1，CD31，and VEGF mRNA and proteins in myocardium tissue were decreased（P0.05）；compared with CID group，the LVEF and LVFS of the rats in ligustilide+CID group were increased（P0.05），the LVESD and LVEDD were decreased（P0.05），the percentage of myocardium infarction area was decreased（P0.05），and the expression levels of PKD1，HIF-1，CD31，43第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）and VEGF mRNA and proteins in myocardium tissue were increased（P0.05）.Conclusion：Ligustilide can promote the angiogenesis，reduce the myocardium infarction area，and improve the cardiac function in the rats with heart failure；it works through activation of the PKD1/HIF-1/VEGF pathway.KEYWORDS Heart failure；Vascular regeneration；Ligustilide；Protein kinase D1；Hhypoxia induced factor-1；Vascular endothelial growth factor 心力衰竭是多种心脏疾病发展的终末阶段，是心血管疾病患者死亡的主要原因。心力衰竭患者临床上主要表现为血液输出量不足、心脏充盈能力低下和全身组织器官灌注不足等症状，其发病率和死亡率均较高1。血管生成是发生心肌缺血后对心肌损伤修复的一种重要补偿机制，因此促进心肌缺血区血运重建成为缺血性心血管疾病治疗和研究的重点关注领域2。研究3显示：大蒜素通过促进心力衰竭大鼠心肌梗死区血管生成，从而抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化，提高心脏射血功能。藁本内酯主要来源于当归和川芎等传统中药材，其在呼吸系统、循环系统和免疫功能等方面具有较强的药理作用4-5。研究6表明：藁本内酯可促进局灶性脑缺血大鼠缺血区血管生成，从而保护缺 血 性 脑 损 伤 和 神 经 功 能 损 伤。蛋 白 激 酶 D1（protein kinase D1，PKD1）/缺 氧 诱 导 因 子 1（hypoxia induced factor-1，HIF-1）/血管内皮生长因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）信号通路在血管生成、稳定和成熟中发挥重要作用7。体内外研究8表明：藁本内酯对阿霉素所引起的心肌损伤具有保护作用。目前关于藁本内酯对心力衰竭动物模型保护作用的相关研究较少，因此本研究主要探讨藁本内酯是否能够通过调节PKD1/HIF-1/VEGF 信号通路对心力衰竭大鼠心功能和血管生成产生影响，并分析其具体机制，为心力衰竭的治疗提供理论依据。1 材料与方法 1.1实验实验动 物动 物、主 要 试 剂 和 仪 器主 要 试 剂 和 仪 器 SPF 级 雄 性SD 大鼠 60 只，8 周龄，体质量 200220 g，购自北京科兴中维生物技术有限公司，动物使用许可证号：SYXK（京）2020-0054，大鼠自由进食进水，在室温（202）、湿度 50%80%和 12 h 明暗交替环境中适应性饲养 3 d 后用于实验。藁本内酯（纯度98%，批号：B20492）购自上海源叶生物科技有限公司，PKD1/HIF-1/VEGF 信号通路阻断剂 CID755673（简称 CID，批号：S718802）购自美国 Selleck 公司，引物序列由广州锐博生物科技 有 限 公 司 合 成，GAPDH、PKD1、HIF-1 和VEGF 抗 体（批 号 分 别 为 ab8245，ab234670，ab179483和 ab32152）购自美国 Abcam 公司，逆转录试剂盒（批号：BTN63826）购自北京百奥莱博科技有限公司。Vevo2100 型小动物超声系统购自加拿大 Visual Son公司，VentElite型小动物呼吸机购自北京友诚生物科技有限公司，1645050 型电泳仪购自美国 Bio-Rad公司。1.2大鼠心力衰竭模型的制备大鼠心力衰竭模型的制备随机取 50只大鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，气管插管，连接小动物呼吸机。在心脏左侧第 34 肋间开胸，暴露心脏，在左心耳和肺动脉圆锥中间位置找到左冠状动脉前降支并进行结扎，直至左心室壁发白，逐层缝合切口。连接心电图机，出现 ST 段抬高说明结扎成功，另 10 只大鼠仅在冠状动脉左前降支挂线，不进行结扎，其余操作同上。术后 4周进行心脏超声检查，若左心室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）50%则为造模成功9。1.3动物分组及给药动物分组及给药50 只造模成功大鼠随机分为模型组（12 只）、藁本内酯组（12 只）、CID 组（13 只）和藁本内酯+CID 组（13 只），另 10 只仅行冠状动脉左前降支挂线大鼠作为假手术组。从造模成功后第 2 天开始，藁本内酯组大鼠尾静脉注射藁本内酯 20 mg kg1 10，其余组大鼠尾静脉注射等量生理盐水，CID组大鼠腹腔注射CID 50 mg kg1，藁本内酯+CID 组大鼠腹腔注射 CID 50 mg kg1后尾静脉注射藁本内酯 20 mg kg1，其余组大鼠腹腔注射等量生理盐水，每日 1次，连续 4 周。模型组大鼠死亡 2 只，CID 组大鼠死亡 4 只，藁本内酯+CID组大鼠死亡 1只，其余组大鼠无死亡。1.4心脏超声检查各组大鼠心功能指标心脏超声检查各组大鼠心功能指标给药结束后当日，麻醉所有大鼠，仰卧位固定于鼠板上，进行超声检查，测定各组大鼠 LVEF、左心室短轴缩短率（left ventricular fractional shortening，LVFS）、左心室收缩末期内径（left ventricular end-systolic diameter，LVESD）和左心室舒张末期内径（left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD）。44张岚，等.藁本内酯调控 PKD1/HIF1/VEGF通路对心力衰竭大鼠的改善作用1.5 2，3，5-三 苯 基 氯 化 四 氮 唑三 苯 基 氯 化 四 氮 唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色法检测各染色法检测各组大鼠心肌梗死面积百分率组大鼠心肌梗死面积百分率麻醉后打开大鼠胸腔取心脏，生理盐水冲洗干净，滤干水分，沿左室长轴切成 1 mm 薄片并加入 TTC 染料，37 水浴箱中水浴 20 min，甲醛固定，显微镜拍照，梗死区显示为白色，计算心肌梗死面积百分率。心肌梗死面积百分率=梗死区面积/心肌总面积100%。1.6HE 染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现现取各组大鼠梗死区心肌组织，常规脱水、包埋和切片，按照 HE 试剂盒说明书进行操作，显微镜下观察各组大鼠心肌组织病理形态表现。1.7 实 时 荧 光 定 量实 时 荧 光 定 量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）法检测各组大鼠缺血法检测各组大鼠缺血区 心 肌 组 织 中区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF 和和 CD31 mRNA 表达水平表达水平取各组大鼠缺血区心肌组织，组织匀浆至无明显组织块，加入 TRIzol 试剂提取组织中的总 RNA，采用逆转录试剂盒逆转录为cDNA，以 cDNA 为模板，GAPDH 为内参，加入PCR 引物，对所需基因进行 PCR 扩增，PCR 扩增条件：94 预变性 15 min；95 变性 30 s，60 退 火 30 s，75 延 伸 30 s，共 40 个 循 环。采 用2Ct法计算各组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 mRNA 水平，引物序列见表 1。1.8蛋白印迹法检测各组大鼠缺血区心肌组织中蛋白印迹法检测各组大鼠缺血区心肌组织中PKD1、HIF-1、VEGF 和和 CD31 蛋白表达水平蛋白表达水平取各组大鼠缺血区心肌组织，匀浆，加入裂解液置于冰上 30 min，12 000 r min1离心 10 min，取上清液。BCA 试剂盒测定蛋白浓度，煮沸变性。取总蛋白 30 g进行 SDS-PAGE，当蛋白电泳至分离胶底部时，将蛋白湿转至 PVDF 膜上，PVDF 膜用5%胎 牛 血 清 封 闭，GAPDH、PKD1、CD31、HIF-1 和 VEGF 一抗（11 000）4 孵育过夜，二抗（15 000）室温孵育 1 h，TBST 洗膜，滴加ECL 发光液进行显影，采用 Image J 软件分析蛋白条带灰度值，计算目的蛋白表达水平。目的蛋白表达水平=目的蛋白条带灰度值/GAPDH 蛋白条带灰度值。1.9统计学分析统计学分析采用 SPSS 21.0 统计软件进行统计学分析。各组大鼠心功能指标、心肌梗死面积百 分 率、缺 血 区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF和 CD31 mRNA 及蛋白表达水平均符合正态分布，以 xs表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数两两比较采用 LSD-t检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 结 果 2.1各组大鼠心功能指标各组大鼠心功能指标与假手术组比较，模型 组 大 鼠 LVEF 和 LVFS 降 低（P0.05），LVESD 和 LVEDD 增大（P0.05）；与模型组比较，藁本内酯组大鼠 LVEF 和 LVFS 升高（P0.05），LVESD 和 LVEDD 减小（P0.05）；与模型组比较，CID 组大鼠 LVEF 和 LVFS 降低（P0.05），LVESD 和 LVEDD 增大（P0.05）；与藁本内酯组比较，藁本内酯+CID 组大鼠 LVEF 和LVFS 降低（P0.05），LVESD 和 LVEDD 增大（P0.05）；与 CID 组比较，藁本内酯+CID 组大鼠 LVEF 和 LVFS 升 高（P0.05），LVESD 和LVEDD减小（P0.05）。见表 2。2.2各组大鼠心肌梗死面积百分率各组大鼠心肌梗死面积百分率与模型组（30.93%1.88%）比较，藁本内酯组大鼠心肌梗死 面 积 百 分 率（17.35%1.83%）降 低（P0.05），CID 组 大 鼠 心 肌 梗 死 面 积 百 分 率（38.88%2.06%）升高（P0.05）；与藁本内酯组比较，藁本内酯+CID 组大鼠心肌梗死面积百分 率（25.70%5.66%）升 高（P0.05）；与CID 组比较，藁本内酯+CID 组大鼠心肌梗死面积百分率降低（P0.05）。2.3各组大鼠心肌组织病理形态表现各组大鼠心肌组织病理形态表现假手术组大鼠肌纤维形态正常，排列整齐，几乎无炎性细胞浸润；与假手术组比较，模型组和 CID组大鼠心肌细胞形态发生改变，细胞间隙增宽，排列紊乱，可表表 1RT-qPCR引物序列引物序列TabTab.1 1Primer sequences of RTPrimer sequences of RT-qPCR qPCR GeneHIF-1VEGFPKD1CD31GAPDHPrimer sequenceF:5-ATCCATGTGACCATGAGGAAATG-3R:5-TCGGCTAGTTAGGGTACACTTC-3F:5-AGGGCAGAATCATCACGAAGT-3R:5-AGGGTCTCGATTGGATGGCA-3F:5-AGACCAACGATACCCTGTTCT-3R:5-GGCTGTACCTCACTAGGACTC-3F:5-AACAGTGTTGACATGAAGAGCC-3R:5-TGTAAAACAGCACGTCATCCTT-3F:5-CTGGGCTACACTGAGCACC-3R:5-AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG-345第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）见肌纤维断裂，炎性细胞浸润；与模型组比较，藁本内酯组和藁本内酯+CID 组大鼠肌纤维排列相对规整，肌纤维断裂相对较少，炎性细胞数减少。见图 1。2.4各组大鼠缺血区心肌组织中各组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF 和和 CD31 mRNA 表达水平表达水平与假手术组比较，模型 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 mRNA 表 达 水 平 降 低（P0.05）；与模型组比较，藁本内酯组大鼠缺血区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 mRNA 表达水平升高（P0.05），CID 组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 mRNA 表达水平降低（P0.05）；与藁本内酯组比较，藁本内酯+CID 组大鼠缺血区心肌组织中PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 mRNA 表达水平降低（P0.05）；与 CID 组比较，藁本内酯+CID组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF和 CD31 mRNA 表 达 水 平 升 高（P0.05）。见表 3。表表 2各组大鼠各组大鼠 LVEF、LVFS、LVESD和和 LVEDDTabTab.2 2LVEFLVEF,LVFS LVFS,LVES LVESD D,and LVEDD of rats in various groups and LVEDD of rats in various groups(xs）GroupSham operationModelLigustilideCIDLigustilide+CIDn101012 912LVEF（/%）71.388.4437.285.39*47.946.2233.585.7541.865.54#LVFS（/%）48.306.0730.445.31*41.596.9926.466.1536.896.35#LVESD（l/mm）3.490.556.880.63*4.740.538.090.755.790.34#LVEDD（l/mm）5.930.4411.370.97*7.050.7613.561.229.460.65#*P0.05 compared with sham operation group；P0.05 compared with model group；#P0.05 compared with ligustilide group；P0.05 compared with CID group.A：Sham operation group；B：Model group；C：Ligustilide group；D：CID group；E：Ligustilide+CID group.图图 1各组大鼠心肌组织病理形态表现各组大鼠心肌组织病理形态表现（HE，400）Fig.1Pathomorphology of myocardium tissue of rats in various groups（HE,400）表表 3各组大鼠缺血区心肌组织中各组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF和和 CD31 mRNA表达水平表达水平TabTab.3 3Expression levels of PKDExpression levels of PKD1,HIF HIF-1,VEGF VEGF,and CD and CD3 31 mRNA in ischemia area of myocardium tissue of rats in various mRNA in ischemia area of myocardium tissue of rats in various groupsgroups(xs）GroupSham operationModelLigustilideCIDLigustilide+CIDn101012 912PKD1 mRNA 7.590.382.810.33*6.050.461.560.444.770.34#HIF-1 mRNA 7.400.413.130.42*5.950.372.050.404.820.35#VEGF mRNA 9.570.744.310.57*7.550.532.630.416.240.50#CD31 mRNA 11.420.883.880.67*8.350.741.690.795.420.62#*P0.05 compared with sham operation group；P0.05 compared with model group；#P0.05 compared with ligustilide group；P0.05 compared with CID group.46张岚，等.藁本内酯调控 PKD1/HIF1/VEGF通路对心力衰竭大鼠的改善作用2.5各组大鼠缺血区心肌组织中各组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF 和和 CD31 蛋白表达水平蛋白表达水平与假手术组比较，模 型 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 蛋白表达水平降低（P0.05）；与模型组比较，藁本内酯组大鼠缺血区心肌组织中PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 蛋白表达水平升高（P0.05），CID 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 蛋白表达水平降低（P0.05）；与藁本内酯组比较，藁本内酯+CID 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 蛋白表达水平降低（P0.05）；与CID 组比较，藁本内酯+CID 组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF 和 CD31 蛋白表达水平升高（P0.05）。见表 4和图 2。3 讨 论 藁本内酯又名 3-丁烯基-4，5-二氢-1（3H）-异苯并呋喃酮，是传统中药当归挥发油的主要活性成分，具有广泛的药理学作用。研究11显示：藁本内酯可促进线粒体自噬，具有神经保护作用。藁本内酯对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤具有保护作用，通过 Toll 样受体 4（Toll-like receptor 4，TLR4）下调前列腺癌相关成纤维细胞血管内皮生长 因 子 A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）分泌，抑制肿瘤血管生成12-13。但关于藁本内酯在心血管疾病治疗方面的研究较少，因此本研究主要探讨藁本内酯对心力衰竭大鼠心功能和血管生成的影响及其机制。心脏收缩和舒张功能障碍是心力衰竭患者死亡的主要原因14。本研究中心力衰竭大鼠心功能指标检查结果表明：结扎冠状动脉左前降支造成大鼠心功能衰退，而藁本内酯可改善心力衰竭大鼠心功能障碍。本研究中 TTC 染色和 HE 染色结果显示：藁本内酯可改善心力衰竭大鼠心肌缺血状况，并可减轻大鼠心肌细胞损伤。赵香梅等15研究表明：藁本内酯可降低脂多糖导致的心肌细胞炎症反应，抑制心肌细胞凋亡。邹常超等16研究显示：理气活血滴丸主要成分之一藁本内酯可通过降低氧化应激和炎症反应治疗心肌缺血再灌注损伤。本研究与以上研究结果具有一致性，即藁本内酯对心肌损伤具有保护作用。血 管 内 皮 细 胞 增 殖 是 血 管 生 成 的 基 础，研究17显示：藁本内酯对糖氧剥夺-复糖氧损伤引起的人脐静脉血管内皮细胞具有保护作用，可抑制血管内皮细胞凋亡和自噬。此外，藁本内酯还具有促进体外模拟缺血环境下血管生成的能力18。因此本研究主要通过检测 CD31 mRNA 和蛋白表达水平，探讨藁本内酯对心力衰竭大鼠心肌缺血区血管表表 4各组大鼠缺血区心肌组织中各组大鼠缺血区心肌组织中 PKD1、HIF-1、VEGF和和 CD31 蛋白表达水平蛋白表达水平TabTab.4 4Expression levels of PKDExpression levels of PKD1,HIF HIF-1,VEGF VEGF,and CDand CD3 31 proteins in ischemia area of myocardium tissue of rats in various proteins in ischemia area of myocardium tissue of rats in various groupsgroups(xs）GroupSham operationModelLigustilideCIDLigustilide+CIDn101012 912PKD1 protein 0.980.040.300.03*0.810.040.100.020.730.04#HIF-1 protein 0.950.030.340.04*0.770.040.150.030.620.03#VEGF protein 0.930.050.130.04*0.830.040.070.020.330.03#CD31 protein 0.960.030.240.04*0.750.040.080.020.410.03#*P0.05 compared with sham operation group；P0.05 compared with model group；#P0.05 compared with ligustilide group；P0.05 compared with CID group.Lane 1：Sham operation group；Lane 2：Model group；Lane 3：Ligustilide group；Lane 4：CID group；Lane 5：Ligustilide+CID group.图图 2 各 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中 各 组 大 鼠 缺 血 区 心 肌 组 织 中 PKD1、HIF-1、VEGF和和 CD31蛋白表达电泳图蛋白表达电泳图Fig.2 Electrophoregram of expressions of PKD1,HIF-1,VEGF,and CD31 proteins in ischemia area of myocardium tissue of rats in various groups47第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）生成能力的影响。CD31主要表达于血管内皮细胞，是血管生成的重要标志物19。本研究结果表明：藁本内酯可促进心力衰竭大鼠心肌缺血区血管生成。PKD1 是胚胎发育进程中必不可少的调控蛋白，在心肌组织、血管内皮细胞和成纤维细胞中高表达，在介导心肌细胞对缺血反应及缺血后血管生成