221动物细胞培养和核移植技术时白.pptx

专题专题2.2 2.2 动物细胞工程动物细胞工程主备人：白积江主备人：白积江1.1.学习目标学习目标(1)(1)简述动物细胞培养的过程、条件及应用简述动物细胞培养的过程、条件及应用(2)(2)对比说出动物细胞培养与植物组织培养对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的原理、条件、结果、培养目的2.2.学习重点学习重点动物细胞培养的过程和条件动物细胞培养的过程和条件3.3.学习难点学习难点动物细胞培养的过程和条件动物细胞培养的过程和条件(第第1 1课时课时)动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养技术、动物细胞培养技术、动物细胞核移植技术、动物细胞核移植技术、动物细胞融合技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体技术生产单克隆抗体技术复习：复习：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养技术、植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞培养一、动物细胞培养自学指导：自学指导：阅读阅读P P4444-P-P4747中中“动物细胞培养动物细胞培养”的内的内容，思考下列问题容，思考下列问题:(:(5 5分钟分钟)1、动物细胞培养的概念是什么？该技术、动物细胞培养的概念是什么？该技术实实 施的原理是什么？施的原理是什么？特点是什么？特点是什么？2、原代培养和传代培养的区别？、原代培养和传代培养的区别？3、动物细胞培养的条件是什么？、动物细胞培养的条件是什么？4、动物细胞培养技术有哪些应用、动物细胞培养技术有哪些应用?一一.动物细胞培养动物细胞培养如何进行细胞培养如何进行细胞培养?从动物机体中取出相关组织，将它们从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。中，让这些细胞生长和增殖。1.1.概念概念2.2.原理：原理：细胞增殖细胞增殖 1.1.原代培养原代培养2.2.传代培养传代培养(1)(1)动物细胞培养的过程动物细胞培养的过程定义：定义：人们通常将人们通常将动物组织动物组织消化后消化后的的初次培养初次培养称为原代称为原代培养。培养。胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理取出组织取出组织胚胎或幼龄动物器官组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎剪碎单个细胞单个细胞细胞悬液细胞悬液转入培养瓶内培养转入培养瓶内培养(贴壁贴壁生长生长长成单层细胞。有长成单层细胞。有接触接触抑制抑制现象现象)。1.原代培养原代培养图示图示原代培养原代培养强调一：细胞贴壁强调一：细胞贴壁细胞贴壁：细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于帖附。帖附。当贴壁细胞分裂生当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞的接触抑制。强调二：细胞的接触抑制强调二：细胞的接触抑制 定义：定义：当原代培养的细胞处于当原代培养的细胞处于接触抑制后接触抑制后,用用胰蛋白酶胰蛋白酶处理处理,使细胞从瓶壁上使细胞从瓶壁上脱离脱离下来下来,然后加入新的培养液然后加入新的培养液,将将细胞分离稀释细胞分离稀释,并并从从原培养瓶内转接到新的培养瓶内原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程这个过程称称传代培养传代培养.(.(分瓶培养的过程分瓶培养的过程)2.2.传代培养传代培养总结：动物细胞培总结：动物细胞培养过程养过程动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释传代传代1010代以内，代以内，遗传物质不改变，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型保持正常二倍体核型。传代传代10-5010-50代左右，增长缓慢以至于完代左右，增长缓慢以至于完全停止，全停止，部分细胞核型可能发生变化部分细胞核型可能发生变化(遗传物质可能改变遗传物质可能改变)为什么用胰蛋白酶处理？为什么用胰蛋白酶处理？分瓶分瓶传代培养传代培养原代培养特点：原代培养特点：细胞贴壁、细胞贴壁、接触抑制接触抑制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不获得不死性死性，细胞突变细胞突变，遗传物质已经遗传物质已经改变改变，等同于癌细胞等同于癌细胞。原原代代培培养养(二二)动物细胞培养条件动物细胞培养条件1 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2 2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3 3、温度和、温度和PHPH 36.50.5,7.2-7.44 4、气体环境、气体环境 O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖O2是细胞代谢必须的；是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的维持培养液的PHPH思考：动物血清的作用？思考：动物血清的作用？主要是：提供有利于细胞生长增主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子或提供合成殖所需的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等。培养基所缺乏的营养物质等。获得细胞获得细胞 或细胞产物或细胞产物细胞的全能性细胞的全能性细胞数目增多细胞数目增多一般为植物体一般为植物体培养结果培养结果快速繁殖、培育快速繁殖、培育脱毒作物等脱毒作物等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清促生长因子促生长因子蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较(三三)动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用:1 1、生产生物制品、生产生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2 2、应用于基因工程、应用于基因工程 主要用于作为受体细胞主要用于作为受体细胞3 3、检测有毒物质，判断某种物质的毒性、检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4 4、细胞的生理、药理、病理研究、细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物 1、说出动物细胞培养的过程？、说出动物细胞培养的过程？2、简述动物细胞培养的条件？、简述动物细胞培养的条件？3、说出动物细胞培养的应用？、说出动物细胞培养的应用？4、对比说出动物细胞培养与植物组织培养、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的原理、条件、结果、培养目的你达到学习目标了吗？你达到学习目标了吗？1.1.用动、植物成体的体细胞进行离体培养，用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是下列叙述正确的是()()A都需用培养箱都需用培养箱 B都须用液体培养基都须用液体培养基 C都要在无菌条件下进行都要在无菌条件下进行 D都可体现细胞的全能性都可体现细胞的全能性C当堂训练当堂训练外界条件适外界条件适宜，植物细宜，植物细胞不需要。胞不需要。动物细胞培动物细胞培养一般需要养一般需要培养箱。培养箱。2、下列属于动物细胞培养与植物组织培养主、下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是要区别的是()A.培养基成分不同培养基成分不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株培养成植株A 3、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是()A.动物细胞融合动物细胞融合 B.单克隆抗体单克隆抗体 C.胚胎移植胚胎移植 D.动物细胞培养动物细胞培养D愈伤组织愈伤组织条件适宜条件适宜可以传代可以传代培养不分培养不分化。化。4 4、细胞株的特点是、细胞株的特点是()()A A遗传物质没有改变，可以无限传代遗传物质没有改变，可以无限传代B B遗传物质发生改变，不可无限传代遗传物质发生改变，不可无限传代C C遗传物质没有改变，不可无限传代遗传物质没有改变，不可无限传代D D遗传物质发生改变，且有癌变特点，遗传物质发生改变，且有癌变特点，可以无限传代可以无限传代 5 5、在动物细胞培养中有部分细胞可能在、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为称之为()()A A原代培养原代培养 B B传代培养传代培养 C C细胞株细胞株 D D细胞系细胞系CD6 6、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞其主要原因是这样的组织细胞()()A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B.具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D.分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D 7.（09江苏）下图是一个新生小鼠的肝脏小块江苏）下图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。培养装置示意图。请回答下列问题。（1）肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞）肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞 。（2）气室中充入）气室中充入5C02：气体的主要作用是：气体的主要作用是 。（3）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要注意选择抗生素的长，但要注意选择抗生素的 ，以，以保证抗生素对肝脏无害。保证抗生素对肝脏无害。吸收氧气和营养物质、排出代谢废物吸收氧气和营养物质、排出代谢废物维持培养液适宜的维持培养液适宜的pH种类和剂量种类和剂量08年宁夏卷年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题：回答下列有关动物细胞培养的问题：在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面生长到细胞表面 时，细胞会停止分时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的裂增殖，这种现象称为细胞的 。此时，。此时，瓶壁上形成的细胞层数是瓶壁上形成的细胞层数是 ，要使贴壁的细，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是 。随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现止，进而出现 的现象；但极少数的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成生改变而变成 细胞，该种细胞的黏细胞，该种细胞的黏着性着性 ，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白），细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量的量 。相互接触相互接触单层单层胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡接触抑制接触抑制不死性不死性降低降低减少减少检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观期的细胞用显微镜进行观察。察。在细胞培养过程中，通常在在细胞培养过程中，通常在 条件下保存条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中细胞，因为在这种条件下，细胞中 的活性降的活性降低，细胞的低，细胞的 速率降低。速率降低。给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作 进行攻击。进行攻击。中中冷冻冷冻酶酶新陈代谢新陈代谢抗原抗原 为什么不是取供体细胞核进行移植操作，而是为什么不是取供体细胞核进行移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？