动物细胞融合.pptx

动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合核移植技术核移植技术动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术胚胎移植技术胚胎移植技术单克隆抗体技术单克隆抗体技术细胞贴壁过程克隆步骤上克隆步骤下动物细胞能否融合呢？动物细胞能否融合呢？细胞细胞A A细胞细胞B B杂种杂种细胞细胞细胞细胞A A细胞细胞B B细胞细胞B B细胞细胞A A细胞细胞B B细胞细胞A A细胞细胞B B杂种杂种细胞细胞细胞细胞A A细胞细胞B B细胞细胞A A细胞细胞B B杂种杂种细胞细胞细胞细胞A A细胞细胞B B资料 太空中的太空中的“婚礼婚礼”2003年1月5日，“神舟”四号准备着陆。这次历时6天零18个小时的太空飞行开展了多项在轨研究，其中有一项被媒体描述成“太空婚礼”的生物实验。不过，“婚礼”中的“新郎”和“新娘”是一些体细胞：动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，植物细胞“新人”是有液泡的黄花烟草原生质体和脱液泡的革新一号烟草原生质体。作为“新房”的是一个黑色的小盒子-电融合仪。这是科技工作者在空间微重力条件下进行的细胞融合实验。160min后，中国首批“太空娃娃”终于顺利诞生。一、动物细胞融合一、动物细胞融合1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：4.4.诱导方式诱导方式指两个或多个动物细胞结合形成一个指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞的过程。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒5.5.过程：过程：注意：注意：动物细胞的融合也需要把多个两种动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞选杂交细胞细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法、化学法物理法、化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程病毒颗粒病毒颗粒黏附在细黏附在细胞表面胞表面病毒颗病毒颗粒穿通粒穿通细胞膜细胞膜细胞膜连接细胞膜连接结束的标志结束的标志6.6.意义：意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7.7.应用：应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体体植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法用途用途植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体1.1.什么是抗体？什么是抗体？2.2.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？抗体是具有免疫作用的蛋白质。抗体是具有免疫作用的蛋白质。B B淋巴细胞受抗原刺激后，增殖分化为淋巴细胞受抗原刺激后，增殖分化为浆细胞，浆细胞可以产生抗体。浆细胞，浆细胞可以产生抗体。问问 题题1 1）.每一个每一个B B淋巴细胞只分泌一种淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。特异性抗体。2 2）.每种抗体只能与特定的抗原发每种抗体只能与特定的抗原发生结合反应。生结合反应。3、抗体有哪些特点？、抗体有哪些特点？4 4、传统的抗体生产方法及缺陷是什、传统的抗体生产方法及缺陷是什 么？么？问问 题题常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞特异性差、纯度低；特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏浆细胞浆细胞 抗体抗体动物体动物体刺激刺激抗原抗原不能增殖产生大量抗体不能增殖产生大量抗体5、怎样才能获得单克隆抗体？、怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术可行吗？仅用细胞培养技术可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无我们所学的哪种细胞是可以无 限增殖的？限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使有什么方法能使B B细胞产生抗体细胞产生抗体 的能力和肿瘤细胞无限增殖能的能力和肿瘤细胞无限增殖能 力同时具备呢？力同时具备呢？5、怎样才能获得单克隆抗体？、怎样才能获得单克隆抗体？设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞 只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 能无限增殖能无限增殖 杂交细胞杂交细胞既能产生一种特异性既能产生一种特异性抗体，又能无限增殖抗体，又能无限增殖二、单克隆抗体二、单克隆抗体由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所，形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的产生的化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强的抗体称为的抗体称为单克隆抗体。单克隆抗体。1 1、单克隆抗体的概念、单克隆抗体的概念杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体单克隆抗体 2 2、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程筛选筛选,继续培养继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群细胞培养细胞培养细胞融合、筛选细胞融合、筛选骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞体体外外培培养养注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔腔B B淋巴淋巴细胞细胞注射抗原注射抗原具有两个亲本的特性，具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的又能产生足够数量的单一抗体。单一抗体。免疫原理，细胞融合原理和动物细免疫原理细胞融合原理和动物细胞培养原理胞培养原理1.1.本过程利用了哪些原理？本过程利用了哪些原理？2.2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有亲细胞的遗传物质，不仅具有B淋巴细胞淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，而且还有无限增分泌特异性抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可获得大量单克隆抗体殖的本领，因而可获得大量单克隆抗体思考：思考：三、单克隆抗体的应用三、单克隆抗体的应用单克隆抗体的单克隆抗体的优点：优点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高2、用于、用于运载药物运载药物：制成制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：治疗疾病：主要用于癌症治疗主要用于癌症治疗优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速优点：优点：疗效高、毒副作用小疗效高、毒副作用小1、作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与、作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与 抗原特异性结合抗原特异性结合小结小结两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势1、动物细胞工程技术的基础是：（）、动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C D C