改良亚甲蓝染色法对幽门螺杆菌的病理诊断价值.pdf

：318实用医技杂志2 0 2 3年5月第30 卷第5期Journal of Practical Medical Technigues，M a y 2 0 2 3Vo l.30,No.5改良亚甲蓝染色法对幽门螺杆菌的病理诊断价值廖子龙张培荣徐加誉广东省深圳市盐田区人民医院病理科，广东深圳通信作者：张培荣，Email：350 158 2 52 q q.c o m摘要】目的探讨改良亚甲蓝染色法检测幽门螺杆菌（Hp）的病理诊断价值。方法选取2 0 2 2 年10月至12 月深圳市盐田区人民医院病理科存档Hp阳性患者胃黏膜活检标本30 例，通过缩短亚甲蓝染色时间及稀释其浓度的方法检测Hp的感染情况,分析各方法Hp染色结果的差异。结果Hp染色结果显示,对照组Hp检出率10 0%，部分腺腔中Hp无法检出,腺体细胞核染色不清晰；实验组1、实验组2 和实验组3检出率与对照组一致,但实验组1在 Hp感染程度检测上最为精准，腺体细胞核染色清晰度也最高。结论缩短亚甲蓝染色液孵育时间为10 s的Hp染色方法能准确判断 Hp的感染程度,并且对周围腺体细胞核也能清晰显示，有助于做出精准的病理诊断。关键词】亚甲蓝；幽门螺杆菌；病理学；诊断基金项目：广东省深圳市盐田区医疗卫生类科技计划项目（YTWS20210104）DOI:10.19522/ki.1671-5098.2023.05.004Pathological diagnostic value of improved methylene blue staining method for detecting helicobacter pyloriLiao Zilong,Zhang Peirong,Xu JiayuDepartment of Pathology,Shenzhen Yantian Peoples Hospital,Shenzhen,Guangdong 518000,ChinaCorresponding author:Zhang Peirong,Email:Abstract Objective To explore the pathological diagnostic value of the improved methylene bluestaining method for detecting Helicobacter pylori(Hp).Methods Thirty biopsy specimens of Gastric mucosa fromHp-positive patients on file in the Pathology Department of Yantian District Peoples Hospital in Shenzhen wereselected from October to December 2022.The infection of Helicobacter pylori was detected by shortening theMethylene blue staining time and diluting its concentration,and the difference in Hp staining results of eachmethod was analyzed.Results The results of Hp staining showed that the detection rate of Hp in the controlgroup was 100%,Hp could not be detected in some gland cavities,and the staining of gland nuclei was not clearithe detection rate of experiment group 1,experiment group 2 and experiment group 3 was the same as that of thecontrol group,but experiment group 1 was the most accurate in detecting the degree of Hp infection,and theclarity of gland nucleus staining was also the highest,Conclusion The Hp staining method,which shortens theincubation time of methylene blue staining solution to 10 seconds,can accurately judge the degree of Hp infection,and can also clearly show the nucleus of surrounding glands,which is helpful to make accurate pathologicaldiagnosis:Key words Methylene blue;Helicobacter pylori;Pathologyi DiagnosisFund program:Medical and Health Science and Technology Planning Project in Yantian District,Shenzhen,Guangdong Province(YTWs20210104)DOI:10.19522/ki.1671-5098.2023.05.004幽门螺杆菌helicobacter pylori,Hp）是多种胃部疾病重要的致病因子,尤其与慢性胃炎、消化性溃疡、胃部肿瘤的发生相关。研究数据表明,胃部不同分型的Hp感染会导致其黏膜发生不同的病理性改变。然而,判断 Hp 感染程度和不同感染部位对518081周围细胞的病理性改变，需要一张优质的Hp染色切片，能够清晰显示Hp的不同部位分布以及周围细胞核染色情况；目前常规的Hp染色法主要是亚甲蓝染色法B。即使是经改良的亚甲蓝染色法仅能对腺体表面的Hp进行判断，无法清晰显示细胞轮实用医技杂志2 0 2 3年5月第30 卷第5期Journal of Practical Medical Techniques，M a y 2 0 2 3，Vo l.30,No.5319廓以及腺腔内的Hp。因此,本研究采用改变亚甲蓝染液浓度及缩短染色时间，检测Hp在组织中的分布以及周围细胞核染色效果。1资料与方法1.1临床资料选取广东省深圳市盐田区人民医院病理科2022年10 至12 月存档的诊断Hp阳性的30 例门诊及住院患者胃黏膜活检标本，其中男性12 例,女性18 例，年龄2 6 59岁，中位年龄42 岁。组织学分型包括慢性浅表性胃炎19例，增生性息肉6 例,慢性萎缩性胃炎5例。1.2方法标本均经10%中性甲醛固定，常规脱水、包埋、切片。30 例标本每一例各切4张切片,将亚甲蓝液染色10 s、30 s、1m i n 分为实验组1、实验组2、实验组3，传统亚甲蓝染色法为对照组。亚甲蓝液、苏木精染色液购自珠海贝索生物技术有限公司(中国,广东)。1.2.1对照组切片脱蜡至水,亚甲蓝染色液滴染5min，自来水冲洗，吹干、二甲苯透明、封片。1.2.2实验组 1切片脱蜡至水，亚甲蓝液进行滴染10 s;蒸馏水稍冲洗，95%乙醇溶液脱水、10 0%乙醇脱水、二甲苯透明、封片。1.2.3实验组 2切片脱蜡至水,亚甲蓝液进行滴染30 s;蒸馏水稍冲洗，95%乙醇溶液脱水、10 0%乙醇脱水、二甲苯透明、封片。1.2.4实验组3切片脱蜡至水,亚甲蓝液进行滴染1min;蒸馏水稍冲洗，95%乙醇溶液脱水、10 0%乙醇脱水、二甲苯透明、封片。1.3结果判读由2 位经验丰富的病理医师采用光学显微镜观察评估,在胃小凹或腺腔等部位观察到逗点状、弧形短杆状、形、S形、海鸥状”散在或簇状分布的细菌判定为 Hp 阳性。判读方法参考中国慢性胃炎共识意见2 0 17 版）4并结合染色强度、清晰度：阴性为切片上未见Hp，为偶见且染色欠清晰，$+为Hp分布显而易见且染色较清晰，$+”为Hp成堆存在且染色清晰。1.4 统计学分析应用SPSS22软件进行统计学分析，组间比较采用配对t检验及x检验评价组间差异性，以P0.05为差异有统计学意义。采用Kappa一致性检验评价2 种检测方法的一致性,Kappa值越大，一致性越高,Kappa0.75表示一致性较强,0.4Kappa0.75表示一致性一般,Kappa0.4表示一致性较弱。2 结 果2.1对照组30例标本染色结果显示：（)者0 例，4)者17例，4+）者11例，4+）者2 例,Hp检查率为100%。2.2实验组130例标本染色结果显示：孵育10 s（)者0 例，4)者13例，4+)者14例，+)者3例;Hp检出率为10 0%。2.3实验组 230例标本染色结果显示：孵育30 s（)者0 例，4)者15例，4+)者12 例，4+)者3例;Hp检出率为10 0%。2.4实验组3孵育1min（)者0 例，)者15例，4+)者14例，4+者1例,Hp检查率为10 0%。见表1。表1幽门螺杆菌亚甲蓝染色不同方法之间的染色组别时间对照组5 min实验组110s30s1 min实验组210s30s1 min实验组310s30s1 min2.5组间检测方法的差异性实验组1、2、3与对照组Hp检出率较为一致Kappa=0.711),两者差异无统计学意义（2=12.2 7，P=0.349）表2);但实验组1在Hp感染程度精准度上较对照组高，腺体细胞核染色清晰度也较后者高图 1 4)。3 讨 论Hp是诱发胃癌的一种病原体,其被认为是引起单位：例1+017515316019417015017013015015+1110111091212141214+2001031331要用95%乙醇溶液冲洗，随后进入无水乙醇脱水。另?320：表2 实验组1亚甲蓝染色10 s和对照组结果分析实验组1（0 s）一一0+0+0+0合计0胃癌的I类致癌物。Hp菌株的毒力因子在胃癌的早期发生发展中起到重要作用，在启动胃黏膜的初始病变和炎症反应环节中起关键作用51。Hp吸附在患者胃小凹内,定值于胃黏膜上皮细胞,能够释放空泡毒素A导致胃黏膜局部发生炎症反应和免疫反应，进而对患者局部胃黏膜造成破坏，反复、长期的破坏会导致腺体萎缩、化生与异常增生，同时还会引发大量胃酸、胃泌素的释放,对胃黏膜的破坏愈加严重6。有研究表明,患者感染Hp后,常见的临床表现为冒窦部炎性反应，并逐渐扩展至胃体部及胃底部，炎性反应程度可能取决于Hp菌株的感染程度，菌株的细胞毒性越强,则炎性反应程度越严重,慢性胃炎也越可能发展为重度萎缩性胃炎并伴肠上皮化生。因此,准确检测出Hp的感染程度有着重要意义。检测Hp 感染的方法有很多种，在病理特殊染色技术上就有石炭酸复红法、甲苯胺蓝法、亚甲蓝法等，而亚甲蓝染色法被认为是较优的Hp染色方法，具有着色能力强、染色清晰等优点8 。然而，根据传统操作方法，由于染色时间长，部分组织腺腔中的Hp被染料覆盖而无法辨别,只能显示出胃黏膜表层及胃小凹中的部分Hp，导致在判断Hp感染程度上容易出现偏差。本研究通过缩短亚甲蓝孵育时间,探索Hp染色效果。结果显示，亚甲蓝染色液孵育1min与对照组无明显差异,孵育10 s效果最佳，能够显示出对照组未能显示的腺腔中Hp，由于实验数据偏少,未体现出显著差异,但在判断Hp感染程度上表现为更精准；不仅能清晰显示不同部位Hp感染情况,腺体细胞核结构也染色清晰，能够同时判断Hp 感染对周围腺体细胞核是否存在病理性实用医技杂志2 0 2 3年5月第30 卷第5期Journal of Practical Medical Technigues，M a y 2 0 2 3Vo l.30,No.5改变,这对后续病理诊断可以提供参考依据。由于染色时间较短，在操作过程中有几点需要注意，由于低对照组浓度乙醇会导致亚甲蓝脱色,因此,亚甲蓝孵育后需+00130410011711+00022合计1314330外，该染色方法必须使用透明、湿封；干封会在腺体周围出现很多强折光小点样物，严重干扰镜下Hp的判断。综上所述，缩短亚甲蓝染色液孵育时间为10 s的 Hp 染色方法能有效判断 Hp 的感染程度,并且对周围腺体细胞核也能清晰显示，有助于判断Hp感染程度与周围腺体变化是否存在关联性,因此,该方法可在日常病理工作中推广。体文图1 4见封三)参考文献i Hwang JJ,Lee DH,Lee AR,et al.Characteristics of gastriccancer in peptic ulcer patients with Helicobacter pylori infection W o r l d J G a s t r o e n t e r o l,2 0 15,2 1(16):4954-496 0.D 0 I:10.3748/wjg.v21.i16.4954.2汤丽琼，丁小云.慢性萎缩性胃炎胃镜下不同病理改变与幽门螺杆菌感染的关系中国处方药，2 0 2 1，2 0 4）：16 1-16 2.D0I:10.3969/j.issn.1671-945X.2021.04.081.B赖妙玲，廖德贵，曾嘉敏，等.三种方法检测胃黏膜活检标本幽门螺杆菌感染的病理诊断价值 临床与实验病理学杂志，2021,37(1):1377-1380.4中华医学会消化病学分会。中国慢性胃炎共识意见2 0 17,上海）1胃肠病学，2 0 17,2 2（1):6 7 0-6 8 7.D0I:10.3969/j.issn.1008-7125.2013.01.007.5刘炯。幽门螺杆菌感染与胃癌发生 中国实用内科杂志，2014,34 6):538-544.D0I:10.7504/nk2014041002.6 Sinnett CG,Letley DP,Narayanan GL,et al.Helicobacter pylorivaca transcription is genetically-determined and stratifies the lev-el of human gastric inflammation and atrophy J.J Clin Pathol,2016,69(1):968-973.何星，徐凯进，黄伟，等。幽门螺杆菌感染与胃黏膜血清学活检 指标及病理改变的相关性分析 中华临床感染病杂志,2 0 19,12 ():50-55.D0I:10.3760/cma.j.issn.1674-2397.2019.01.008.B】张淑正，张效娟，张占蛟.Hp亚甲蓝染色改良法分析.临床与实验病理学杂志，2 0 2 2，38 2)）:2 43-2 44.D0I:10.13315/jcnki.cjcep.2022.02.030.收稿日期：2 0 2 3-0 4-0 6）改良亚甲蓝染色法对幽门螺杆菌的病理诊断价值(正文见第318 页）图1对照组5min标本染色效果图(亚甲蓝染色2 0)图2实验组110 s标本染色效果图(亚甲蓝染色2 0)图3实验组2 30 s标本染色效果图(亚甲蓝染色2 0)图4实验组31min标本染色效果图(亚甲蓝染色x20)肺结核病理特征及结核杆菌检测技术对比(正文见第356 页）图1苏木精一伊红染色肉芽肿区域(HE染色1 0 0 0)图2 苏木精-伊红染色坏死区域(HE染色1 0 0 0)图3抗酸染色见一条阳性杆菌(抗酸染色10 0 0)图4抗酸染色见簇状阳性杆菌(抗酸染色10 0 0)