亚硝酸盐的测定讲课稿.doc

亚硝酸盐的测定

盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的含量

1亚硝酸盐的测定(盐酸萘乙二胺法)
1.1原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸(H2N—C6H4-SO3H)重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm，测定其吸光度后，可与标准比较定量。

1.2仪器和试剂
1.2.1仪器
    ①小型粉碎机。
    ②分光光度计。
    ③25ml具塞比色管。
1.2.2试剂
    ①氯化铵缓冲溶液：在1 000ml容量瓶中加人500ml水，然后准确加入20.0ml盐酸，振荡混匀后，再准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试pH至9.6～9.7。
    ②硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000ml。
    ③氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1 000ml。
    ④对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
    ⑤盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)：称职0.1g盐酸萘乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周内稳定。
  ⑥显色剂：临用前，将盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。仅供1次使用。
    ⑦亚硝酸钠标准储备液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，用水溶解后移入500ml容量瓶中，加100ml氯化铵缓冲溶液，用水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
    ⑧亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准储备液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于5.0μg的亚硝酸钠。
1.3操作步骤
1.3.1样品的处理 
称取约10.00g(粮食称取5.00g)经绞碎混匀的样品，置于250ml烧杯中，加。70ml水和12ml氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH至8，定量转移至200ml容量瓶中，加l0ml硫酸锌溶液，混匀。如不产生白色沉淀，可再补加2～5ml氢氧化钠溶液，搅拌混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20ml，收集滤液备用。
1.3.2亚硝酸盐标准曲线的绘制 
吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml亚硝酸钠标准使用液(相当于0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的亚硝酸钠)，分别置于25ml具塞比色管中。分别加入4.5ml氯化铵缓冲溶液，2.5ml60％的乙酸，然后立即加入5.0ml显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。
1.3.3样品的测定 
吸取10.0ml样品滤液于25ml具塞比色管中，按标准曲线制备程序，自“分别加入4.5ml氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。 
1.4结果计算

式中：
X—样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg；
      m1—样品的质量，g；
      m2—测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg；
      V1—样品处理液的总体积，ml；
      V2—测定用样液体积，ml。
结果以算术平均值的二位有效数字表述。

1.5说明及注意事项
    硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用，也可用亚铁氰化钾和乙酸锌的混合溶液，利用产生的亚铁氰化锌与蛋白质共沉淀；实验中使用重蒸水可以减少试验误差。
2硝酸盐的测定
2.1原理
    样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，将样品提取液通过镉柱，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子。在酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，经比色测得亚硝酸盐总量，从还原前后亚硝酸盐量即可求得硝酸盐的含量。
2.2仪器和试剂
2.2.1仪器
（1）镉柱
    a.海绵状镉粉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于500ml200g/L的硫酸镉溶液中，经3～4h，当溶液中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌皮，使镉沉底，倾去上层清液，以蒸馏水用倾斜法洗涤，然后移入组织捣碎机中，加500ml水。捣碎约2s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20～40目之间的部分。置试剂瓶中，用水封盖保存，备用。
b.镉柱装填：如图8—3所示。用蒸馏水装满镉柱玻璃管，并装入2cm高的玻璃棉作垫。将玻璃棉压向柱底，并将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉至8～10cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆盖，上置一个储液漏斗，末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。

图8—3镉柱装置示意图
    如无上述镉柱玻璃管，也可用25ml酸式滴定管代用。
    当镉柱填装好后，先用25ml盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以蒸馏水洗2次，每次25ml，镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。镉柱每次使用完毕后，应先以25ml盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗2次，每次25ml，最后用水覆盖镉柱。
2.2.2试剂
    ①氨缓冲溶液(pH9.6～9.7)：量取20ml盐酸加50ml蒸馏水，混匀后加50ml氨水，用水定容至1 000ml。
    ②稀氨缓冲溶液：取50ml氨缓冲溶液，用水定容至500ml。
    ③对氨基苯磺酸溶液(4g/L)。
    ④盐酸萘乙二胺溶液(2g/L)。
    ⑤盐酸溶液(0.1mol/L)：吸取8.4ml盐酸，用水稀释至1 000ml。
    ⑥硝酸钠标准储备液：准确称取0.123 2g硝酸钠(已于110～120℃干燥至恒重，相当于0.1000g亚硝酸钠)，以重蒸水溶解，移于500ml容量瓶中并定容。此液浓度为200μg/ml亚硝酸钠。
    ⑦硝酸钠标准使用液：临用时吸取标准液2.50ml置于100ml容量瓶中，加水定容。此液浓度为5μmg/ml亚硝酸钠。
    ⑧亚硝酸钠标准使用液同亚硝酸盐的测定。
2.3操作步骤
2.3.1样品的处理。同亚硝酸盐测定。
2.3.2镉柱还原效率的测定   
    ①先以25ml稀氨缓冲溶液冲洗镉柱，流速控制在3～5ml/min(以滴定管代替的，可控制在2～3ml/min)。
    ②吸取20ml硝酸钠标准使用液，加入5ml稀氨缓冲溶液，混匀，注入储液漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当储液中溶液流完后，再加5ml水置换柱内留存溶液。将全部收集液如前经镉柱再还原一次，第二次流出液收集于100ml容量瓶中，再用20ml水洗涤镉柱，共洗涤3次，洗涤液收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。
    ③吸取10.00ml还原后的标准液(相当于10mg亚硝酸钠)于50ml比色管中，加人2.0ml对氨基苯磺酸溶液(4g/L)，混匀，静置3～5min，各加入1.0ml盐酸萘乙二胺溶液(2g/L)，加水至刻度，混匀，静置15min，用2cm比色杯，于538nm处测定吸光度并绘制标准曲线。根据标准曲线计算测得结果。还原效率大于98%为符合要求。

式中：
X—还原效率，％；
        A—测得亚硝酸盐的含量，μg；
        10—测定用溶液相当于亚硝酸盐的含量，μg。
2.3.3样品中亚硝酸盐总量测定
    ①样液还原：吸取20ml样品处理液于50ml烧杯中，加5ml氨缓冲溶液，混匀后注入储液漏斗中，使流经镉柱还原，以下按镉柱还原效率测定操作进行，收集还原后的样液于100ml容量瓶中并定容。
    ②吸取10～20ml还原后的样液于50ml比色管中，以下按镉柱还原效率测定操作进行，测得吸光度，从标准曲线上查出亚硝酸盐量。
2.3.4亚硝酸盐测定  
吸取40ml样品处理液于50ml比色管中，按亚硝酸测定操作进行，测定吸光度，从标准曲线上查出亚硝酸盐含量。
2.4结果计算

式中：
X—硝酸盐含量，mg/kg；
        A1—经镉柱还原后测得的亚硝酸盐量，μg；
        A2—不经镉柱还原直接测得的亚硝酸盐量，μg；
        V—测定用经镉柱还原后样液体积，ml；
        1.232—亚硝酸钠换算为硝酸钠的系数；
m—样品的质量，g。
5 注意事项
①实验前要对容量瓶进行检漏及清洁。
②要注意把握实验过程中的时间还有把握住试剂的用量。
③注意加入试管中样品的浓度不要太浓，反应后最后颜色最好处于标准液之间。
④实验后要注意搞好卫生。