食品微生物质量控制.ppt

食品微生物食品微生物检验的的质量控制量控制广广东出入境出入境检验检疫局疫局检验检疫技疫技术中心中心1.内容内容食品微生物食品微生物检验质量控制概述量控制概述食品微生物食品微生物检验的室内的室内质量控制量控制食品微生物食品微生物检验的室的室间质量控制量控制2.食品微生物食品微生物检验质量量控制概述控制概述3.一、一、质量控制相关定量控制相关定义l质量控制：量控制：满足足质量要求的操作技量要求的操作技术和活和活动。l质量保量保证：为了了满足足实验室室质量要求量要求，制定相，制定相应的的计划并划并实施所施所进行的一系列系行的一系列系统活活动l质量手册：是描述量手册：是描述质量系量系统元素的文件或文件元素的文件或文件的集合。的集合。4.二、食品微生物二、食品微生物检验质量控制概念量控制概念l质量控制量控制是食品微生物学是食品微生物学实验室室为了保了保证检验结果果实事求是地反映客事求是地反映客观存在而存在而建立的操作程序体系。建立的操作程序体系。5.三、食品微生物三、食品微生物检验质量控制目的量控制目的l食品微生物学的食品微生物学的质量控制量控制是保是保证食源性致病菌食源性致病菌的培养、分离、的培养、分离、鉴定及血清学定及血清学试验等的准确性，等的准确性，避免因操作避免因操作变化化导致致检验结果果错误。6.四、四、质量控制分量控制分类 分分为室内室内质量控制量控制和和室室间质量量评价价两两个个组成部分成部分l室内室内质量控制：量控制：实验室内部采取的以室内部采取的以对比分析、比分析、跟踪以及跟踪以及对实验室工作的室工作的连续性控制性控制计划。划。l室室间质量量评价：通价：通过互相校准和互相校准和/或或检验对实验室的操作和室的操作和结果所果所进行的行的评价。价。7.五、五、质量控制量控制内容内容l室内室内质量控制量控制 实验室内部室内部 质量保量保证的核心和基的核心和基础l室室间质量量评价价 外部外部组织或机构或机构 质量量评价价8.食品微生物学食品微生物学检验室内室内质量控制量控制9.室内室内质量控制量控制一、一、对检验人人员的要求的要求二、操作手册二、操作手册三、三、检测环境要求境要求四、四、设备/仪器要求器要求五、五、仪器器设备的功能的功能监测六、培养基的六、培养基的质量控制量控制七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控八、八、检验过程的程的质量控制量控制九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存十、十、实验室安全防室安全防护10.一、一、对检验人人员的要求的要求l相相应岗位的人位的人员，应具具备相相应的技的技术能力，相能力，相应的技的技术能力能力证明（明（证书及及证件）。件）。l微生物微生物检验室室应有相有相应技技术能力的人能力的人负责室内室内的技的技术工作，并工作，并设立立质量量监督督员。11.一、一、对检验人人员的要求的要求高度的主高度的主观判断力判断力 个人的技能、个人的技能、经验 细菌学的菌学的专业水平水平培培训班班实验室室进修修学学术交流交流专业期刊期刊12.二、操作手册二、操作手册l各各级人人员的的职责和和权限限l实验室安全措施室安全措施l样品采集和品采集和处理指南理指南l培养基和培养基和试剂的配制方法的配制方法l.等等等等13.三、三、检测环境要求境要求-房屋要求房屋要求l房屋要求：足房屋要求：足够宽敞、通敞、通风、有良好的照明。、有良好的照明。l房屋内房屋内墙面及地等面及地等应采用易于清采用易于清洁的材料。的材料。l房房间的的设置置应根据工作内容加以分用，根据工作内容加以分用，设立立专用房用房间。14.三、三、检测环境要求境要求-环境境设施要求施要求l专用房用房间的温湿度控制与的温湿度控制与记录（样品存放室）品存放室）l特殊特殊环境的微生物指境的微生物指标控制与控制与记录（无菌室等）（无菌室等）l专用工作室的用工作室的标准操作准操作规程和定期的程和定期的检测校准校准程序。（程序。（洁净室等）室等）l特殊特殊环境中的境中的专用用设施施质量控制量控制应符合有关要符合有关要求（求（净化工作台）化工作台）15.三、三、检测环境要求境要求l食品微生物学食品微生物学检验室要求布局合理，操作区室要求布局合理，操作区域与域与办公区域分开。洗公区域分开。洗涤室、培养室、消毒室、培养室、消毒间、无菌室、无菌室应分开。无菌室要分开。无菌室要设有套有套间或或缓冲冲间。微生物。微生物检验室室应备有自有自动或脚或脚踩式洗式洗手池和固定的消毒手池和固定的消毒设施。施。16.三、三、检测环境要求境要求l微微生生物物检验室室应制制定定合合理理、完完善善的的卫生生管管理理制制度度，采采用用湿湿式式保保洁，定定期期对操操作作环境境进行行消消毒毒。对废弃弃物物，应投投入入指指定定的的容容器器内内，经无无害害化化处理理后后方方可可排排放放，以防某些病原微生物以防某些病原微生物传播。播。17.三、三、检测环境要求境要求l需需在在无无菌菌条条件件下下工工作作的的区区域域应以以明明确确标识并并能能有有效效地地控控制制、监测和和记录。每每天天记录环境境检测报告告，并并经常常进行行空空气气落落菌菌实验：定定期期对无无菌菌室室进行室内行室内环境消毒。境消毒。18.三、三、检测环境要求境要求-环境境设施的相关技施的相关技术指指标l净化室、化室、净化工作区域、化工作区域、洁净环境按国家及部境按国家及部颁标准准进行行检测。l空气空气洁净度指度指标：l检测频率及率及检测方法。一次方法。一次/月；空气月；空气细菌菌检测（沉降法）。（沉降法）。级别0.5m尘粒粒(个个/L)5m尘粒粒(个个/L)活菌活菌颗粒平均数粒平均数(cfu/平板平板)1003.50.01.010000350.02.53.019.四、四、设备/仪器要求器要求-总则l满足开展相关足开展相关检测项目的要求。目的要求。l制定相关制定相关设备/仪器的作器的作业指指导书。l设备/仪器需器需进行行检定校准。定校准。l设备/仪器的运行状况器的运行状况记录。l维修后修后设备/仪器的再校准或器的再校准或检查，应具有完具有完整的整的检查记录。20.温度温度计l实验室必室必须要有工作温度要有工作温度计和参照温度和参照温度计。l工作温度工作温度计：用于日常温度：用于日常温度检查。l参照温度参照温度计：用于校正工作的温度：用于校正工作的温度计。l温度温度计运行运行检查：一般可采用一次：一般可采用一次/半年的运半年的运行行检查。l日常日常检查、校准、校准检查、运行、运行检查等都等都应做好相做好相应的的记录。21.培养箱、水浴箱和冰箱的温度控制培养箱、水浴箱和冰箱的温度控制l培养箱的温差要求，一般培养箱的温差要求，一般显示示值与与实测值相差相差不大于不大于1，箱体内各点温差（内部的温度均，箱体内各点温差（内部的温度均衡性）以及温度波衡性）以及温度波动同同样不大于不大于1。l温度温度监控方法：可将工作温度控方法：可将工作温度计置甘油中，放置甘油中，放入待入待测箱体内，箱体内，观察工作温度察工作温度计的温度，最好的温度，最好1-2次次/天天监控并控并记录。22.高高压灭菌菌锅的温度控制（一）的温度控制（一）l高高压灭菌菌锅；可用生物指示菌法（常用）、化；可用生物指示菌法（常用）、化学学变色色纸片及高片及高压灭菌菌锅温度温度计等方法等方法进行行检测。l生物指示菌法是一种高生物指示菌法是一种高压灭菌菌锅的效果的效果显示法。示法。l高高压灭菌菌锅由由专人操作，并做好作人操作，并做好作业记录。l高高压灭菌菌锅使用使用时，内置物品不能太多，内置物品不能太多，单位位体体积内的内容物（每瓶内的培养基）不能太多。内的内容物（每瓶内的培养基）不能太多。23.高高压灭菌菌锅的温度控制（二）的温度控制（二）l高高压灭菌菌锅温度波温度波动范范围：110，115和和1212。l高高压灭菌菌锅校准周期一般在半年。校准周期一般在半年。24.干燥干燥灭菌箱温度控制菌箱温度控制l干燥干燥灭菌箱的温度校准：用参考温度菌箱的温度校准：用参考温度计进行温行温度度测试。l干燥干燥灭菌箱温度要求与精确度：菌箱温度要求与精确度：1605 或或180 5。l干燥干燥灭菌箱校准周期一般菌箱校准周期一般为一年。一年。25.培养基配制用蒸培养基配制用蒸馏水的控制水的控制l按按设备说明，定期清明，定期清洁离子交离子交换器和更器和更换离子离子交交换材料。材料。l检测要求：西欧要求：西欧标准准为微生物微生物检验用蒸用蒸馏水的水的特定特定电导率率0.5ms/m；细菌数菌数50cfu/ml。我我们日常用的日常用的标准准为 10ms/m。l检测频率：率：1次次/每月。每月。l蒸蒸馏水定点供水定点供应，并做好相，并做好相应的的质量控制及量控制及记录。26.天平的管理天平的管理l天平放置要求：无振天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台、无气流影响及水平台面上。面上。l天平要有使用天平要有使用记录。l天平作天平作为计量量仪器是列入国家器是列入国家强制制检定的范定的范围，一般一般1次次/年年进行行检定。定。27.容容积的控制（一）的控制（一）l保保证高高压灭菌后的稀菌后的稀释剂满足足标准用量。准用量。l采取称中法来采取称中法来测定蒸定蒸发量，体量，体积100ml的稀的稀释剂起重量起重量为101g。高高压结束体束体积偏差不得偏差不得超超过1%。l采取先高采取先高压后定量分装，可避免因高后定量分装，可避免因高压造成造成的体的体积误差。差。l对保存的定量液体保存的定量液体应在使用在使用时，注意，注意补充容充容积。28.容容积的控制（二）的控制（二）l吸管的控制：通吸管的控制：通过小小计量容器校准后使用。量容器校准后使用。l小小计量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校准周期一般校准周期一般为1-2次次/一年。一年。l小小计量容器日常使用量容器日常使用检查可每周可每周进行一次，包行一次，包括容器的完整性，并做好相括容器的完整性，并做好相应的的记录。29.pH计lpH计使用前使用前应用用标准液准液进行校准。行校准。l缓冲液使用有效期：冲液使用有效期：PH4.00 约1年年 PH7.00 约6个月个月 pH9.00 约6个月个月lpH计的的维护：电极外表的定期清洗；极外表的定期清洗；电极敏感性极敏感性检测及极性恢复。及极性恢复。30.净化工作台的控制化工作台的控制l水平流水平流净化工作台工作区域，要求化工作台工作区域，要求洁净度度为100级。空气沉降。空气沉降30min，细菌数菌数1个个/皿。皿。垂直流垂直流净化工作台，化工作台，细菌数菌数0.49个个/皿皿.l净化工作台运行化工作台运行检查频次：次：1次次/月，采用月，采用细菌菌沉降沉降检测。l净化工作台高效化工作台高效过滤膜一般膜一般为一年更一年更换一次，一次，并同并同时进行粒子与行粒子与细菌沉降菌沉降检测。31.紫外紫外线灯的控制灯的控制l检测方法：方法：仪器器测试法和生物法和生物测试法。法。l前者是通前者是通过专用用仪器器检测紫外灯管紫外灯管发射的紫外射的紫外光光强度。国家消毒技度。国家消毒技术规范中表明在距离照射范中表明在距离照射源源1米米处，要求其，要求其强度度为90 lx。l生物生物测试法：采用一定的菌培养物，法：采用一定的菌培养物，经一定比一定比例稀例稀释，菌量控制在，菌量控制在200-250个个/0.5ml，涂布涂布平板在紫外灯光下照射平板在紫外灯光下照射2min，同同时设置普通置普通光源的光源的对照照组，置，置37培养培养48h，计算其算其杀灭率，要求率，要求杀灭率达率达99%。32.显微微镜的控制的控制l显微微镜应有作有作业指指导书，日常，日常维护记录及自校及自校记录。l显微微镜应置于无振置于无振动、避免灰、避免灰尘、防潮等要求、防潮等要求的的环境。境。33.其它微生物其它微生物检测专用用仪器的控制器的控制l细菌菌鉴定定仪、酶标仪等等设备，工作中常用阳性，工作中常用阳性对照照检测其功能的正常性。其功能的正常性。l仪器的器的检定定则按按检定或自校作定或自校作业指指导书进行。行。l仪器的使用登器的使用登记、校准、校准计划、校准划、校准记录等文件等文件存档。存档。l仪器器专人使用，操作者人使用，操作者应持持证上上岗。34.五、五、仪器器设备的功能的功能监测l高高压灭菌器：定期菌器：定期监测（每月一次）（每月一次）生物指示生物指示剂：嗜：嗜热脂肪芽脂肪芽孢杆菌杆菌 化学指示化学指示剂：变色的指示色的指示带l培养箱、冰箱、水浴箱：培养箱、冰箱、水浴箱：每日早、晚两次温度每日早、晚两次温度观测，绘制温度曲制温度曲线图35.五、五、仪器器设备的功能的功能监测l厌氧培养装置：氧培养装置：化学化学标记：美美蓝 生物学指生物学指标：铜绿假假单胞菌胞菌lCO2培养箱培养箱：每天每天检查箱内的箱内的CO2含量含量36.五、五、仪器器设备的功能的功能监测l生物安全柜：生物安全柜：定期更定期更换滤网，紫外网，紫外线每每3月月检查1次次l微生物微生物鉴定定仪 及及时更新更新软件件 每批号每批号鉴定卡用定卡用标准菌株准菌株测定定37.五、五、仪器器设备的功能的功能监测 表表1 仪器器设备的的质量控制量控制标准准设备控制控制标准准允允许范范围高高压灭菌器菌器121121培养箱培养箱351水浴箱水浴箱370.5冰箱冰箱42低温冰箱低温冰箱-205CO2培养箱培养箱5%10%10%38.培养基的有效性培养基的有效性试验l每每一一批批新新制制或或新新购的的培培养养基基，使使用用前前均均须取取标准菌株准菌株试验.l培培养养基基的的试验结果果需需要要加加以以记录，项目目包包括括试验日期、日期、试验结果以及果以及实验者的者的签名等。名等。六、培养基六、培养基质量控制量控制39.培养基培养基质量控制量控制培养基的量：培养基的量：l平板培养基的厚度一般平板培养基的厚度一般为3mm (90mm平皿平皿+15-20ml培养基）培养基）l斜面不超斜面不超过试管的管的2/340.常用培养基的质量控制（一）（一）l检验项目与方法：物物理理、化化学学及及生生物物学学指指标鉴定定lA：感感官官测定定，检查其其颜色色与与透透明明度度，培培养养基基应澄清，无澄清，无浑浊。lB：PH测定，按各种培养基要求的定，按各种培养基要求的PH0.2。lC：生生物物学学指指标检定定，无无菌菌实验、被被检培培养养基基相相应细菌生菌生长率率测试；菌落大小及特征的；菌落大小及特征的检测。41.常用培养基的质量控制（一）（一）无菌无菌试验：l 每批配好的培养基每批配好的培养基须进行无菌行无菌试验l随随机机选取取5%-10%的的量量，如如果果配配制制大大量量的的培培养养基基，则任任意意选取取10个个平平板板或或管管装装培培养养基基，35温温度度下下过夜夜培培养，养，证明无菌生明无菌生长为合格合格42.常用培养基的质量控制（二）（二）l生长率测试：适适用用于于液液体体和和固固体体培培养养基基：将将菌菌培培养养液液，用用生生理理盐水水做做倍倍比比稀稀释，取取合合适适稀稀释度度进行行平平板板计数数，同同时以以新新鲜配配制制的的国国标培培养养基基进行行对照。照。43.常用培养基的质量控制（三）（三）l菌菌落落大大小小测试：划划线分分离离测试菌菌，取取10个个菌菌落落测量量直直径径大大小小，其其直直径径均均值与与新新鲜配配制制的的国国标培养基无培养基无统计学差异。学差异。44.常用培养基检定用标准菌株表表2 常用培养基的常用培养基的质量控制量控制培养基培养基质控菌种控菌种生生长情况情况结果果血血琼脂脂巧克力巧克力琼脂脂营养养琼脂脂麦康麦康凯琼脂脂中国中国蓝琼脂脂SS琼脂脂沙保沙保罗琼脂脂化化脓链球菌球菌肺炎肺炎链球菌球菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌大大肠埃希菌埃希菌福氏志福氏志贺菌菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌大大肠埃希菌埃希菌福氏志福氏志贺菌菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌产气气肠杆菌杆菌鼠鼠伤寒沙寒沙门菌菌大大肠埃希菌埃希菌白色假白色假丝酵母菌酵母菌+-+-+-+明明显乙型溶血乙型溶血环甲型溶血甲型溶血环24h生生长生生长分解乳糖，菌落分解乳糖，菌落红色色不分解乳糖，菌落无色透明不分解乳糖，菌落无色透明不生不生长分解乳糖，菌落分解乳糖，菌落蓝色色不分解乳糖，菌落无色不分解乳糖，菌落无色不生不生长粉粉红色菌落色菌落无色菌落，中心黑色无色菌落，中心黑色45.常用培养基检定用标准菌株表表2 常用培养基的常用培养基的质量控制量控制生生长生生长，溶血溶血生生长部分抑制部分抑制生生长，黄色菌落，黄色菌落生生长，蓝绿色菌落色菌落大量生大量生长抑制生抑制生长+-脆弱脆弱拟杆菌杆菌产气气荚膜梭菌菌膜梭菌菌空空肠弯曲菌弯曲菌大大肠埃希菌埃希菌霍乱弧菌霍乱弧菌副溶血弧菌副溶血弧菌霍乱弧菌霍乱弧菌大大肠埃希菌埃希菌厌氧血平板氧血平板弯曲菌弯曲菌琼脂脂TCBS琼脂脂碱性蛋白碱性蛋白胨水水结果果生生长情况情况质控菌种控菌种培养基培养基46.培养基保存环境l制成的培养基保存制成的培养基保存环境境为4冰箱，如制成平冰箱，如制成平板板则用塑料袋包装置冰箱保存，用塑料袋包装置冰箱保存，l干燥培养基干粉含有活性物干燥培养基干粉含有活性物质或遇或遇热易分解的易分解的物物质应仔仔细查看存放条件，多数也看存放条件，多数也须放在放在2-8 条件保存。条件保存。l含有高含有高浓度胆度胆盐的培养基存放于的培养基存放于10-15。47.培养基配制的培养基配制的质量控制量控制l培养基的制作培养基的制作过程必程必须统一一l培培养养基基或或添添加加剂的的剂量量、pH值、高高温温灭菌菌的的时间或温度，都需遵照或温度，都需遵照规定定l培培养养基基名名称称、本本批批配配制制量量、配配方方、配配制制日日期期和和配配制制人人员姓名都必姓名都必须详细记录 48.培养基制备控制程序 l培养基配制所用的培养基配制所用的仪器器设备必必须经过相相应的的鉴定定。l配制培养基所用的用具及容器必配制培养基所用的用具及容器必须是清是清洁或是或是灭菌的。菌的。49.培养基的配制程序（一）培养基的配制程序（一）l不同的培养基配制不同的培养基配制时注意各注意各类成分的用途。成分的用途。l对于干燥培养基配制，同于干燥培养基配制，同样需要需要进行行PH测验。50.培养基的配制程序（二）培养基的配制程序（二）l配配制制好好的的培培养养基基（尤尤其其是是糖糖发酵酵管管）不不宜宜久久放放。因因为培培养养基基吸吸收收空空气气中中的的二二氧氧化化碳碳，会会使使培培养养基基变酸，从而影响酸，从而影响细菌的生菌的生长。l培养基中的抑制培养基中的抑制剂及指示及指示剂一定要精确称量。一定要精确称量。51.七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控染色液的染色液的质量控制量控制l 染色液要染色液要标明配制或明配制或购入日期，入日期，选用适当的用适当的标准菌株作阳性及阴性准菌株作阳性及阴性对照照鉴定。定。l革革兰氏染色用金黄色葡萄球菌和大氏染色用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌制埃希菌制备浓菌菌悬液液进行行质量控制，每次量控制，每次质控与控与标本本检测同同步步进行。行。52.七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控各种染色液的各种染色液的监控菌株控菌株染色液染色液 阳性阳性对照菌照菌 阴性阴性对照菌照菌 监控控频度度革革兰染色液染色液 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 大大肠埃希菌埃希菌 每天每天抗酸染色液抗酸染色液 结核分枝杆菌核分枝杆菌 每次每次 异染异染颗粒染色液粒染色液 白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌 每次每次荚膜染色液膜染色液 肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌 每批每批鞭毛染色液鞭毛染色液 普通普通变形杆菌形杆菌 福氏志福氏志贺菌菌 每次每次53.七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控试剂的的质量控制量控制l各各类试剂，在配制或，在配制或购入后均入后均应进行行“有效有效”试验，用已知阳性及阴性菌株，用已知阳性及阴性菌株进行行试验l试剂须根据根据标示配制，适当示配制，适当储存存l对较稳定的定的试剂如靛基如靛基质试剂应在配制在配制时及每周及每周予以予以检测，凡不，凡不稳定的定的试剂每天使用每天使用时均均应检测，合格后才能使用，合格后才能使用 54.七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控表表3 常用常用试剂的阳性、阴性的阳性、阴性对照菌株照菌株常用常用试剂 阳性阳性对照菌株照菌株阴性阴性对照菌株照菌株凝固凝固酶试剂金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌触触酶试验用用试剂化化脓链球菌球菌V-P试验用用试剂阴沟阴沟肠杆菌杆菌大大肠埃希菌埃希菌大大肠埃希菌埃希菌阴沟阴沟肠杆菌杆菌氧化氧化酶试剂铜绿假假单胞菌胞菌大大肠埃希菌埃希菌靛基靛基质试剂 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌55.七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控诊断血清的断血清的质量控制量控制l购入的沙入的沙门菌属、志菌属、志贺菌属、致病性大菌属、致病性大肠杆菌杆菌的的诊断血清必断血清必须立即立即记录其其购入日期、入日期、观察透察透明度、色彩有无明度、色彩有无变化和是否有沉淀物，然后置化和是否有沉淀物，然后置4冰箱保存冰箱保存l使用前使用前应注意注意检查诊断血清的批号、有效期，断血清的批号、有效期，如如发现浑浊或有絮状沉淀物或有絮状沉淀物时，很可能系，很可能系污染染所致，不能再所致，不能再继续使用使用56.七、七、试剂、染色液及抗血清的、染色液及抗血清的质控控诊断血清的断血清的质量控制量控制l使用前使用前应以阳性及阴性菌株以阳性及阴性菌株进行行检测，观察其效察其效价及特异性价及特异性l不得将不得将诊断血清置室温保存断血清置室温保存,各种各种诊断血清均断血清均应置置冰箱中冰箱中4保存保存l每月用每月用标准菌株准菌株进行一次行一次测定定 57.八、八、检验过程的程的质量控制量控制检测质量保量保证l定期使用有定期使用有证标准物准物质和次和次级标准物准物质（参考（参考物物质）进行内部行内部质量控制。量控制。l参加参加实验室室间的比的比对或能力或能力验证l利用相同或不同方法利用相同或不同方法进行重复行重复检测l对留存的留存的样品品进行再行再检测。58.重复重复计数要求数要求l菌落菌落计数精密度控制直接数精密度控制直接计数，数，选择同一同一标本，要求本，要求检验人人员进行菌落行菌落计数。数。l自身同一平皿重复自身同一平皿重复计数数误差差应小于小于7.7%l实验人人员之之间同一平皿重复同一平皿重复计数数误差差18.2%自身同一梯度平行加自身同一梯度平行加样两皿两皿间相相对误差小于差小于7.7%实验人人员之之间同一梯度同一梯度计数数误差差18.2%l不同梯度不同梯度间菌落菌落计数最数最终误差小于差小于7.7%59.菌种菌种鉴定定质控控l菌菌种种鉴定定质控控要要求求，对所所给的的微微生生物物菌菌种种，按按有有关关的的方方法法及及指指标进行行生生化化、血血清清等等方方面面的的鉴定。定。l鉴定定质量量评价价：鉴定定程程序序是是否否正正确确；鉴定定方方法法是是否否正正确确；具具体体操操作作技技术是是否否熟熟练，结果果报告告是否正确。是否正确。60.内部内部质量控制的推荐量控制的推荐频率率l菌落菌落计数精密度控制：数精密度控制：1次次/3月；月；l菌种菌种鉴定控制：定控制：1次次/半年或半年或1年年61.九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存标准菌株要求准菌株要求l 必必须是形是形态、染色反、染色反应、生理生化及血、生理生化及血清学特性典型而清学特性典型而稳定的菌株定的菌株l实验结果重复性好，极少果重复性好，极少发生生变异异l国国际社会社会认可可l来源于来源于专门机构机构62.九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存标准菌株来源准菌株来源l美国典型菌种保藏中心美国典型菌种保藏中心ATCCl卫生部生部药品生物制品品生物制品检定所菌种保藏中心定所菌种保藏中心 l国家医学微生物菌种保藏中心国家医学微生物菌种保藏中心63.九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法准菌株的保存方法 冷冷冻干燥法：干燥法：l最理想的保存方法，不改最理想的保存方法，不改变菌种性状，保菌种性状，保存存时间长l手手续繁繁琐，需，需专门的冷的冷冻干燥干燥设备l菌种保存中心均采用此法菌种保存中心均采用此法64.九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法准菌株的保存方法 冰冰冻保存法：保存法：l此法此法较简单，将，将细菌混菌混悬于脱于脱纤维羊血或脱羊血或脱脂牛奶中，置液氮或脂牛奶中，置液氮或-20冰箱保存冰箱保存l但但细菌菌经多次多次转种，性状可能种，性状可能发生生变异异65.九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法准菌株的保存方法培养基保存法：最培养基保存法：最简易方便的方法，适用于大多数易方便的方法，适用于大多数实验室室（1）普通）普通琼脂斜面保存法：适于一般脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置菌的保存，置4冰箱冰箱可保存可保存1个月。个月。（2）血）血琼脂斜面保存法：适于脂斜面保存法：适于链球菌，可半月球菌，可半月转种一次。种一次。（3）半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡，置）半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡，置4冰箱可冰箱可保存保存3-6个月，适用于个月，适用于肠杆菌科杆菌科细菌。菌。66.九、九、标准菌株的来源和保存准菌株的来源和保存食品微生物食品微生物检验实验室必室必备质控菌株：控菌株：l大大肠埃希菌埃希菌 ATCC25922l大大肠埃希菌埃希菌 ATCC35218l铜绿假假单胞菌胞菌 ATCC27853l金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 ATCC25923l粪肠球菌球菌 ATCC2921267.十、十、实验室安全防室安全防护培培训与告之与告之警示警示标志志防止空气防止空气污染染有毒有害物防有毒有害物防护消除消除污染和染和废物的物的处理理68.食品微生物学食品微生物学检验室室间质量量评价价69.室室间质量量评价价l室室间质量量评价价是是质量保量保证体系的重要体系的重要组成部成部分。分。l实验室室应参加外部的参加外部的质量控制活量控制活动，对其开展的其开展的每一每一项检测均均应参加相参加相应的室的室间质量控制。量控制。70.室室间质量量评价价l室室间质量控制的一般性量控制的一般性检查项目目1、仪器器设备的操作的操作书，使用、保养、，使用、保养、维修修记录。2、培养基和、培养基和试剂的配制的配制记录、培养基的保存方法、培养基的保存方法、灭菌菌质 量、有效期。量、有效期。3、室内全面、室内全面质量控制的建立，工作人量控制的建立，工作人员熟熟练程度的考核和盲程度的考核和盲样试验的的进行情况，行情况，检验操作手册及操作操作手册及操作规范性范性71.室室间质量量评价价熟熟练程度的考核程度的考核l用模用模拟食品食品标本做本做质量量评价价是目前国内外广泛采是目前国内外广泛采用的方法，主要用的方法，主要评价价实验室在病原菌的分离、室在病原菌的分离、鉴定定试验等方面的工作情况。等方面的工作情况。72.室室间质量量评价价熟熟练程度的考核程度的考核l由由质控管理机构控管理机构发放模放模拟标本或菌种，本或菌种，实验室按照室按照日常的操作方法日常的操作方法进行相行相应的分离的分离鉴定定试验。实验室室完成完成鉴定后在定后在规定定时间内将内将结果反果反馈至参考至参考实验室，室，进行行评价。价。73.室室间质量量评价价质控控结果的分析与果的分析与评价价 质控管理机构控管理机构对每次每次质控控结果果进行行统计分析，将分析，将每一每一实验室的室的结果与果与标准准进行比行比较和和统计分析，分析，发回回评估估报告。告。74.75.4/17/202476.