中国药典微生物限记录.pptx

20152015版中国药典微生物学版中国药典微生物学检验技术实施指导与修订解读检验技术实施指导与修订解读内容简介内容简介一、一、20152015年版中国药典微生物学检验的发展和修订年版中国药典微生物学检验的发展和修订二、非无菌产品微生物检查：微生物计数法二、非无菌产品微生物检查：微生物计数法.修修订订依依据据 .格格式式变变化化 .适适用用范范围围 .环环境境要要求求 .微微生生物物技技术术方方法法的的修修订订内内容容（a.a.方方法法适适用用性性试试验验修修订订 b.b.试试验方法的修订验方法的修订 c.c.培养基体系的修订）培养基体系的修订）三、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法三、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法四、四、20152015版药典制药用水检查法修订内容版药典制药用水检查法修订内容五、微生物检验超标结果（五、微生物检验超标结果（OOSOOS）情况的调查和处理）情况的调查和处理六、六、20152015版中国药典无菌检查法版中国药典无菌检查法七、生物安全实验室要素七、生物安全实验室要素一、20152015年版中国药典微生物学检验的发展和修订ICHICH：人用药物注册技术国际协调会：人用药物注册技术国际协调会协协调调各各国国对对药药品品注注册册所所需需的的质质量量、安安全全性性和和疗疗效效的的技技术术要要求求建建立立统统一一规规范范的的质质量量技技术术要要求求，减减少少国国际间贸易的障碍。际间贸易的障碍。PDGPDG：药典讨论组：药典讨论组19891989年年，由由欧欧洲洲药药品品质质量量管管理理局局、美美国国药药典典委委员员会会和日本药局方的三方代表组成了和日本药局方的三方代表组成了PDGPDG。(一）修订后微生物限度检查法的特点修修订订后后的的微微生生物物限限度度检检查查法法概概念念更更明明确确、体体例例更更合合理理修订前：一个通则：微生物限度检查法修订前：一个通则：微生物限度检查法修订后：三个通则：修订后：三个通则：非无菌产品微生物检查：微生物计数法非无菌产品微生物检查：微生物计数法非无菌产品微生物检查：控制菌检查法非无菌产品微生物检查：控制菌检查法非无菌药品微生物限度标准非无菌药品微生物限度标准修订后的特点概念明确，体例合理与国际接轨，兼顾了国情概念明确，体例合理与国际接轨，兼顾了国情1.1.试验环境的要求试验环境的要求2.2.菌种采用菌种采用CMCCCMCC3.3.检检验验量量依依照照中中国国药药典典20102010年年版版，主主要要工工艺艺剂剂型限制型限制4.4.微生物限度标准微生物限度标准5.5.控制菌检查：保留部分生化试验控制菌检查：保留部分生化试验6.6.修修订订后后，控控制制指指标标更更合合理理，计计数数方方法法及及标标准准合合理理、准确，反映真实污染情况准确，反映真实污染情况20152015版药典微生物检查法修订内容环境要求目目前前我我国国药药品品微微生生物物检检测测对对环环境境的的要要求求与与国国际际标标准准分级不一致。分级不一致。国际要求：只要洁净环境分为国际要求：只要洁净环境分为A A级、级、B B级、级、C C级、级、D D级。级。A A（百级）、（百级）、B B（千级）、（千级）、C C（万级）、（万级）、D D（十万级）。（十万级）。协协调调案案要要求求：试试验验在在经经过过设设计计的的可可避避免免外外来来微微生生物物污染供试品的环境下进行。污染供试品的环境下进行。我国修订后药品微生物限度检查对检测环境的要求：我国修订后药品微生物限度检查对检测环境的要求：无无菌菌环环境境下下符符合合微微生生物物技技术术检检验验要要求求，单单向向流流空空气气区域内进行。区域内进行。（二）20152015版药典微生物检查法修订内容环境要求1.1.强强调调了了“微微生生物物实实验验的的各各项项工工作作应应在在专专属属的的区区域域进进行行，以以降降低低交交叉叉污污染染、假假阳阳性性结结果果和和假假阴阴性性结结果的风险果的风险”。2.2.无菌检查无菌检查修订前修订前 万级（万级（C C级）下局部百级（级）下局部百级（A A）或隔离器）或隔离器修订后修订后 B+A B+A级或建议级或建议D D级背景下隔离器级背景下隔离器3.3.微生物限度检查微生物限度检查修订前修订前 万级（万级（C C）下局部百级（）下局部百级（A)A)修修订订后后 不不低低于于D D级级背背景景下下的的B B级级单单向向流流空空气气区区域域内内进行。进行。20152015版药典微生物检查法修订内容版药典微生物检查法修订内容环境要求环境要求既既要要最最大大可可能能防防止止微微生生物物污污染染，又又要要防防止止检检验验过过程程对环境和人员造成伤害。对环境和人员造成伤害。活活动动区区域域的的合合理理规规划划及及区区分分将将提提高高微微生生物物实实验验室室操操作的可靠性。作的可靠性。洁净环境检测洁净环境检测修订前修订前单单向向流流空空间间区区域域。工工作作台台面面及及环环境境应应定定期期按按医医药药工工业业洁洁净净室室（区区）悬悬浮浮粒粒子子浮浮游游菌菌和和沉沉降降菌菌的的测试方法的现行国家标准进行检测。测试方法的现行国家标准进行检测。（三）20152015版药典微生物检查法修订内容计数法修订前修订前细菌数细菌数营养琼脂营养琼脂霉菌及酵母菌数霉菌及酵母菌数玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂修订后修订后需氧菌总数需氧菌总数胰酪大豆胨琼脂（胰酪大豆胨琼脂（TSATSA）霉菌及酵母菌总数霉菌及酵母菌总数沙式葡萄糖琼脂（沙式葡萄糖琼脂（TSBTSB）20152015版药典微生物检查法修订内容控制菌检查法修订前修订前大大肠肠菌菌群群、大大肠肠埃埃希希菌菌、沙沙门门菌菌、铜铜绿绿假假单单胞胞菌菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌修订后修订后耐耐胆胆盐盐革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌、大大肠肠埃埃希希菌菌、沙沙门门菌菌、铜铜绿绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌20152015版药典微生物检查法修订内容结果判断微生物计数法和控制菌检查法结果判断微生物计数法和控制菌检查法结果判断不不再再规规定定复复试试，通通过过实实验验室室调调查查、回回顾顾、分分析析结结果果的准确性。的准确性。限度标准以指数方式表示：限度标准以指数方式表示：1010的一次方的一次方cfucfu：可接受的最大限度为：可接受的最大限度为2020；1010的的二二次次方方cfucfu，可可接接受受的的最最大大限限度度为为200200；以以此此类类推。推。20152015版药典通则非无菌产品微生物限度标准增订内容1.1.除除中中药药、化化学学药药和和生生物物制制品品的的限限度度标标准准外外，增增订订了了原原料料、敷敷料料、中中药药提提取取物物及及饮饮片片的的微微生生物物限限度度标准。标准。2.2.菌数计数结果以菌数计数结果以1010的的n n 次方表示。次方表示。3.3.以以需需氧氧菌菌总总数数取取代代细细菌菌数数，以以耐耐胆胆盐盐革革兰兰阴阴性性菌菌取代大肠菌群。取代大肠菌群。微生物限度标准解释菌数限度标准以菌数限度标准以1010的的n n次方表示次方表示1.1.不不应应理理解解为为限限速速标标准准是是放放宽宽，而而是是因因微微生生物物计计数数不不同同于于化化学学成成分分的的定定量量测测定定，微微生生物物在在供供试试液液中中的的分分布布及及取取样样时时的的不不均均匀匀性性都都将将带带来来结结果果的的不不准准确确性性，这这关关系系到到微微生生物物计计数数实验结果的精密度。实验结果的精密度。2.2.药药品品微微生生物物限限度度标标准准中中，药药用用原原料料、辅辅料料及及中中药药提提取取物物仅仅规定检查需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数。规定检查需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数。因因此此，在在制制定定其其微微生生物物限限度度标标准准时时，应应根根据据原原辅辅料料的的微微生生物物污污染染特特性性、用用途途、相相应应制制剂剂的的生生产产工工艺艺及及特特性性等等因因素素，还还应控制具有潜在危害的致病菌。应控制具有潜在危害的致病菌。20152015版药典抑菌效力检查法修订内容抑菌剂：是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。抑菌剂：是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。1.1.抑抑菌菌效效力力检检查查法法系系用用于于测测定定无无菌菌及及非非无无菌菌制制剂剂的的抑抑菌菌活活性性，以评价最终产品的抑菌效力。以评价最终产品的抑菌效力。2.2.用用于于指指导导生生产产企企业业在在研研发发阶阶段段制制剂剂中中抑抑菌菌剂剂浓浓度度的的确确定定，以以防防止止制制剂剂在在正正常常贮贮藏藏或或使使用用过过程程中中可可能能发发生生的的微微生生物物污污染染和和繁繁殖殖是是药药物物变变质质而而对对使使用用者者造造成成危危害害，尤尤其其是是多多剂剂量量包装的制剂。包装的制剂。3.3.抑抑菌菌剂剂不不能能替替代代药药品品生生产产的的GMPGMP管管理理，不不能能作作为为非非无无菌菌制制剂剂降低微生物污染的唯一途径。降低微生物污染的唯一途径。4.4.所所有有抑抑菌菌剂剂都都具具有有一一定定的的毒毒性性，制制剂剂中中抑抑菌菌剂剂的的量量应应为为最最低有效量。低有效量。修订内容修订内容1.1.培培养养基基、培培养养基基适适用用性性检检查查、检检查查方方法法所所用用菌菌种种名名称称、菌菌液液制制备备均均与与非非无无菌菌产产品品微微生生物物限限度度检检查查：微生物计数法中一致。微生物计数法中一致。2.2.方方法法的的适适用用性性试试验验中中各各试试验验菌菌的的回回收收率率：平平均均数数不不少少于于对对照照培培养养基基上上菌菌落落平平均均数数的的70%70%，且且菌菌落落形形态态、大大小小与与对对照照培培养养基基上上的的一一致致，判判该该培培养养基基的的适用性检查符合规定。适用性检查符合规定。3.3.结果判断中的初始值定为所加菌数值。结果判断中的初始值定为所加菌数值。二、中国药典非无菌产品微生物检查：微生物计数法微生物计数微生物计数供供试试液液制制备备方方法法、抑抑菌菌成成分分的的消消除除方方法法及及需需氧氧菌菌总总数、霉菌和酵母菌总数计数方法数、霉菌和酵母菌总数计数方法;1.1.应选择操作简便、快速的方法。应选择操作简便、快速的方法。2.2.应避免损伤污染的微生物。应避免损伤污染的微生物。3.3.抑抑制制作作用用较较强强的的供供试试品品，在在供供试试品品溶溶液液性性状状允允许许的情况下，应选薄膜过滤法。的情况下，应选薄膜过滤法。试验菌液的制备和使用 应应来来自自认认可可的的国国内内外外菌菌种种保保藏藏机机构构的的标标准准菌菌株株，或或使使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。试试验验用用菌菌株株的的传传代代次次数数不不得得超超过过5 5代代（从从菌菌种种保保藏藏中中心心获得的冷冻干燥菌种为第获得的冷冻干燥菌种为第0 0代）代）保藏方法v冷冷冻冻保保藏藏长长期期储储藏藏方方法法，一一般般在在低低于于-30-30或或-70-70冰箱内保藏，需要加入保护剂，如：甘油。冰箱内保藏，需要加入保护剂，如：甘油。v冻干法保藏冻干法保藏长期保藏法，例如冻干菌种。长期保藏法，例如冻干菌种。v冷藏冷藏短期储藏法，在短期储藏法，在2 288的冰箱保藏。的冰箱保藏。新鲜培养物制备用培养基修订前修订前营养琼脂培养基营养琼脂培养基营养肉汤培养基营养肉汤培养基改良马丁琼脂培养基改良马丁琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁培养基修订后修订后胰酪大豆胨琼脂胰酪大豆胨琼脂（TSA)胰酪大豆胨肉汤培养基胰酪大豆胨肉汤培养基(TSB)沙式葡萄糖琼脂沙式葡萄糖琼脂(SDA)沙式葡萄糖肉汤培养基沙式葡萄糖肉汤培养基(SDB)菌液制备枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌 胰酪大豆胨琼脂、胰酪大豆胨肉汤胰酪大豆胨琼脂、胰酪大豆胨肉汤 30 303535培养培养181824h24h白色念珠菌白色念珠菌 沙式葡萄糖琼脂、沙式葡萄糖液体培养沙式葡萄糖琼脂、沙式葡萄糖液体培养 20 202525培养培养2-32-3天天黑曲霉黑曲霉 沙式葡萄糖琼脂沙式葡萄糖琼脂 20 202525培养培养5-75-7天，或直到获得丰富的孢子天，或直到获得丰富的孢子。稀释液稀释液 0.9%0.9%氯化钠溶液氯化钠溶液 PH7.0 PH7.0无菌氯化钠无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液培养基修订前修订前细菌计数：营养琼脂细菌计数：营养琼脂霉菌和酵母菌计数：玫瑰红钠琼脂霉菌和酵母菌计数：玫瑰红钠琼脂酵母菌计数：酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂酵母菌计数：酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂试试验验菌菌株株：大大肠肠埃埃希希菌菌、金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌、枯枯草草芽芽孢孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉杆菌、白色念珠菌、黑曲霉修订后修订后需氧菌总数需氧菌总数测定：胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤测定：胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤霉菌和酵母菌总数测定：沙式葡萄糖琼脂霉菌和酵母菌总数测定：沙式葡萄糖琼脂试试验验菌菌株株：铜铜绿绿假假单单胞胞菌菌、金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌、枯枯草草芽芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉修订前修订前适用于固体培养基，加菌量适用于固体培养基，加菌量50-100cfu50-100cfu营养琼脂、营养肉汤营养琼脂、营养肉汤 30-35 30-35，48h48h玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂 23-28 23-28，真菌，真菌72h72h修订后修订后适用于液体、固体培养基，加菌量不大于适用于液体、固体培养基，加菌量不大于100cfu100cfu胰酪大豆胨琼脂、胰酪大豆胨肉汤、沙式葡萄糖琼脂胰酪大豆胨琼脂、胰酪大豆胨肉汤、沙式葡萄糖琼脂20-2520-25，好氧菌不超过，好氧菌不超过3 3天，真菌不超过天，真菌不超过5 5天。天。固固体体培培养养基基：与与对对照照培培养养基基比比较较，菌菌数数比比值值在在0.5-20.5-2（50%-50%-200%)200%)范围。范围。液体培养基：生长良好。液体培养基：生长良好。计数方法的增修订内容修订前修订前1.1.平皿法：倾注法平皿法：倾注法 2.2.薄膜过滤法薄膜过滤法修订后修订后1.1.平皿法：平皿法：（1 1）倾注法）倾注法 （2 2）涂布法：接种约）涂布法：接种约0.1-0.2ml0.1-0.2ml供试液，涂布均匀，培养。供试液，涂布均匀，培养。2.2.薄膜过滤法薄膜过滤法3.3.最大可能数法（最大可能数法（MPNMPN）以以细细菌菌在在胰胰酪酪大大豆豆胨胨液液体体培培养养基基（TSBTSB）中中生生长长后后的的浊浊度度比比较较做做判判断断，精精确确度度较较差差，仅仅适适用用于于无无适适宜宜方方法法时时的的需需氧氧菌菌总总数数计计数，不适于霉菌计数。数，不适于霉菌计数。微生物技术方法倾注法倾注法取取供供试试液液1ml1ml，置置直直径径90mm90mm的的无无菌菌平平板板中中，注注入入15-20ml15-20ml温温度度不超过不超过4545熔化的培养基，混匀，凝固，倒置培养。熔化的培养基，混匀，凝固，倒置培养。涂布法涂布法取取15-20ml1520ml温温度度不不超超过过4545的的培培养养基基，注注入入直直径径90mm90mm的的无无菌菌平平皿，凝固，制成平板。接种量不少于皿，凝固，制成平板。接种量不少于0.1ml0.1ml。使用范围：适宜好氧菌培养。使用范围：适宜好氧菌培养。注注：1.1.操操作作较较繁繁琐琐，增增加加污污染染几几率率，计计数数不不准准确确（涂涂布布棒棒会会沾少许微生物）沾少许微生物）2.2.一次只可加一次只可加0.1-0.2ml0.1-0.2ml样品。样品。薄膜过滤法1.1.孔孔径径应应不不大大于于0.450.45微微米米。直直径径一一般般为为50mm50mm，若若采采用用其其他他直直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。2.2.滤滤膜膜材材质质应应保保证证供供试试品品及及其其溶溶剂剂不不影影响响微微生生物物的的充充分分被被截截留。留。滤器注意点滤器注意点1.1.滤器及滤膜在使用前应采用适宜的方法灭菌。滤器及滤膜在使用前应采用适宜的方法灭菌。2.2.使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。3.3.水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以湿润滤膜。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以湿润滤膜。4.4.油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。5.5.供供试试液液经经滤滤膜膜过过滤滤后后若若需需要要用用冲冲洗洗液液冲冲洗洗滤滤膜膜，每每张张滤滤膜膜每每次次冲冲洗洗量量为为100ml100ml，总总冲冲洗洗量量不不得得超超过过1000ml,1000ml,以以避避免免滤膜上的微生物受损伤。滤膜上的微生物受损伤。三、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法 控制菌检查项目控制菌检查项目 培养基体系培养基体系 培养基适用性检查培养基适用性检查 检查方法适用性试验检查方法适用性试验检验项目修订前修订前大大肠肠杆杆菌菌、大大肠肠菌菌群群、大大肠肠埃埃希希菌菌、沙沙门门菌菌、铜铜绿绿假假单单胞胞菌菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌修订后修订后大大肠肠杆杆菌菌、耐耐胆胆盐盐革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌、大大肠肠埃埃希希菌菌、沙沙门门菌菌、铜铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌培养基的配制使用容器使用容器配制培养基使用的容器应该是玻璃器皿或搪瓷器皿等。配制培养基使用的容器应该是玻璃器皿或搪瓷器皿等。禁用金属容器如：铁、铜、铝容器。禁用金属容器如：铁、铜、铝容器。培养基制备方法实验室指南实验室指南溶解培养基应当用溶解培养基应当用水浴加热水浴加热进行溶解。进行溶解。测定测定pHpH值值矫正矫正pHpH，配制培养基必须矫正，配制培养基必须矫正pH,pH,并进行验证。并进行验证。培培养养基基灭灭菌菌后后冷冷却却至至室室温温（2525）进进行行pHpH测测试试。培培养基养基pHpH范围不得超过规定的正负范围不得超过规定的正负0.20.2。培养基的储藏琼琼脂脂培培养养基基不不得得在在00或或00以以下下存存放放，防防止止冷冷冻冻破破坏凝胶特性。坏凝胶特性。琼琼脂脂培培养养基基最最好好现现用用现现配配，如如置置冰冰箱箱保保存存，一一般般不不超超过过一一周周，且且应应密密闭闭包包装装，若若延延长长保保存存需需经经验验证证确定。确定。培培养养基基灭灭菌菌后后应应立立即即取取出出，不不得得储储存存在在高高压压灭灭菌菌器器中。中。培养基适用性试验修订内容修订内容控控制制菌菌检检查查用用培培养养基基数数量量减减少少7 7个个，在在增增菌菌过过程程中中，使用无选择性增菌培养基。使用无选择性增菌培养基。理由：理由：污污染染菌菌受受到到环环境境、加加工工过过程程及及储储存存等等影影响响，受受到到损损伤伤，使使用用无无选选择择性性增增菌菌培培养养基基培培养养，使使受受损损伤伤的的细胞得到修复，提高检出率。细胞得到修复，提高检出率。培养基适用性检查成成品品培培养养基基、脱脱水水培培养养基基或或按按处处方方配制的培养基的适用性检查配制的培养基的适用性检查促促生生长长能能力力、抑抑制制能能力力和和指指示示特特性性的检查。的检查。实验菌株的管理使用及鉴定菌种的保藏菌种的保藏低低温温、干干燥燥、缺缺氧氧、缺缺乏乏营营养养等等环环境境条条件件都都可可以以抑抑制制微微生生物物的的代代谢谢和和生生长长繁繁殖殖，因因此此，低低温温、干干燥燥和和真真空空是是菌菌种种保保藏藏的重要手段的重要手段。菌液制备用培养基菌株菌株培养基培养基培养温度（培养温度（）培养时间（培养时间（h h）枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌白色念珠菌黑曲霉黑曲霉胰胰酪酪大大豆豆胨胨琼琼脂脂或或胰胰酪酪大大豆豆胨胨肉肉汤。汤。沙沙氏氏葡葡萄萄糖糖琼琼脂脂或或沙沙氏氏葡葡萄萄糖糖肉肉汤汤沙氏葡萄糖琼脂沙氏葡萄糖琼脂30-3530-3520-2520-2520-2520-2518-24h18-24h232-3天天5-75-7天天，或或直直到到获得丰富的孢子获得丰富的孢子革兰染色方法方法涂涂片片干干燥燥固固定定初初染染媒媒染染脱脱色色复复染染冲冲洗洗滤滤纸纸干燥干燥显微镜观察显微镜观察注：注：1.1.涂片以匀薄为佳，涂太厚影响镜检结果。涂片以匀薄为佳，涂太厚影响镜检结果。2.2.复染：滴加番红染液复染：滴加番红染液30s1min30s1min。水洗，待干。水洗，待干。番红复染，增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌。番红复染，增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌。白色念珠菌白色念珠菌菌落形态：菌落形态：球形，表面光滑，球形，表面光滑，呈乳白色。呈乳白色。显微镜下形态：显微镜下形态：革兰阳性菌，有厚革兰阳性菌，有厚膜孢子，假菌丝、膜孢子，假菌丝、芽管，孢子长出短芽管，孢子长出短小芽管。小芽管。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌菌落形态：菌落形态：圆形凸起，呈金黄色，圆形凸起，呈金黄色，边缘整齐，周围有黄色边缘整齐，周围有黄色环，表面光滑湿润。环，表面光滑湿润。革兰染色：紫色，革兰革兰染色：紫色，革兰氏阳性菌。氏阳性菌。显微镜下形态：呈圆形显微镜下形态：呈圆形，葡萄状排列，无芽孢，葡萄状排列，无芽孢、无鞭毛。、无鞭毛。四、四、20152015版药典制药用水检查法修订内容版药典制药用水检查法修订内容定义定义制药用水是药物生产用量大，使用广的制药用水是药物生产用量大，使用广的一种辅料，用于生产过程及药物制剂的一种辅料，用于生产过程及药物制剂的制备。制备。分类分类根据使用的范围不同，分为饮用水、根据使用的范围不同，分为饮用水、纯化水、注射用水及灭菌注射用水。纯化水、注射用水及灭菌注射用水。制药用水的原水通常为饮用水。制药用水的原水通常为饮用水。纯化水质量标准修订纯化水质量标准修订适用性试验适用性试验试验菌试验菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌试验方法试验方法照通则照通则1105中计数培养基适用性检查法，中计数培养基适用性检查法，同胰酪胨大豆琼脂培养基同胰酪胨大豆琼脂培养基纯化水质量标准修订纯化水质量标准修订修订前修订前取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查，细取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查，细菌、霉菌和酵母菌总数每菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不超过不超过100个。个。修订后修订后取本品不少于取本品不少于1ml,按薄膜过滤法处理后，采用按薄膜过滤法处理后，采用R2A琼脂培养基，琼脂培养基，3035培养不少于培养不少于5天，依天，依法检查，法检查，需氧菌总数每需氧菌总数每1ml供试品中不得过供试品中不得过100cfu。制药用水的质量控制制药用水的质量控制1.1.制水系统应经过验证，并建立日常监控、制水系统应经过验证，并建立日常监控、检测和报告制度，有完善的原始记录备查。检测和报告制度，有完善的原始记录备查。2.2.制药用水系统应定期进行清洗与消毒制药用水系统应定期进行清洗与消毒，消毒可以采取热处理和化学处理等方法。消毒可以采取热处理和化学处理等方法。3.3.采用的消毒方法以及化学处理后消毒剂采用的消毒方法以及化学处理后消毒剂的去除应经过验证。的去除应经过验证。五、微生物检验结果超标情况的调查1.1.定义定义OOSOOS：属于偏差，是一种影响产品最终质量的偏差。：属于偏差，是一种影响产品最终质量的偏差。2.2.微生物检验结果超标的调查微生物检验结果超标的调查微微生生物物检检验验涉涉及及的的环环节节较较多多、污污染染呈呈不不均均匀匀状状态态，不不易易查查出出确确切切的的污污染染环环节节。需需根根据据具具体体情情况况将将重重新新取取样样（同同一一批批号号）进行复检并对检验结果分析判断。进行复检并对检验结果分析判断。微生物检验结果超标的调查如需再检验，应遵循以下要求如需再检验，应遵循以下要求1.1.按药典规定进行复检。按药典规定进行复检。2.2.控控制制菌菌检检验验结结果果不不合合格格，不不再再复复检检，以以一一次次检检验验结果报告。结果报告。3.3.限限度度检检查查项项不不合合格格，可可进进行行复复检检以以三三次次检检验验的的平平均值报告。均值报告。4.4.细细菌菌、酵酵母母菌菌选选取取菌菌落落数数小小于于300cfu300cfu，霉霉菌菌宜宜选选取取平平均均数数小小于于100cfu100cfu的的稀稀释释级级作作为为菌菌数数报报告告的的依依据。据。六、20152015版中国药典无菌检查法无菌检查的有关概念无菌检查的有关概念1.1.无菌无菌是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。2.2.无无菌菌操操作作是是指指在在无无菌菌环环境境条条件件下下，在在对对无无菌菌制制品品或或无无菌菌器器械械等等进进行行检检验验的的过过程程中中，能能防防止止微微生生物物污污染染与与干干扰扰的的一种常规操作方法。一种常规操作方法。3.3.无无菌菌技技术术是是指指在在微微生生物物实实验验工工作作中中，控控制制或或防防止止各各类类微微生生物物的的污污染染及及其其干干扰扰的的一一系系列列操操作作方方法法和和有有关关措措施施，其其中包括无菌环境设施、无菌实验器材及无菌操作。中包括无菌环境设施、无菌实验器材及无菌操作。4.4.无无菌菌环环境境是是用用物物理理或或化化学学的的方方法法以以某某一一可可控控的的空空间间内内使使悬悬浮浮粒粒子子、浮浮游游菌菌数数量量降降到到最最低低限限度度，接接近近于于“无无菌菌”的的一一种种空空间间。洁洁净净室室/区区、净净化化工工作作台台、隔隔离离系系统统等等就就是是按该设计要求创建的空间。按该设计要求创建的空间。5.5.无无菌菌药药品品指指法法定定药药品品标标准准中中列列入入无无菌菌检检查查项项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。6.6.无无菌菌检检查查的的性性质质是是一一种种有有关关药药品品安安全全的的定定性性试试验验。是是根根据据试试验验的的培培养养基基中中是是否否有有微微生生物物生生长长来来判判断断结结果果（液液体体培培养养基基变变浑浑浊浊一一般般表表明明样样品品受受到微生物的污染）到微生物的污染）七、生物安全实验室要素1.1.实验室生物安全屏障实验室生物安全屏障当当实实验验室室工工作作人人员员所所处处理理的的实实验验对对象象含含有有致致病病的的微微生生物物及及其其毒毒素素时时，通通过过使使用用个个体体防防护护装装置置（一一级级屏屏障障）、实实验验室室的的设设计计建建造造（二二级级屏屏障障）和和严严格格遵遵从从标标准准化化的的工工作作及及操操作作程程序序（三三级级屏屏障障）等等综综合合措措施施，确确保保实实验验室室工工作作人人员员不不受受实实验验对对象侵染。象侵染。2.2.病原微生物风险等级分类病原微生物风险等级分类 第一类病原微生物第一类病原微生物 第二类病原微生物第二类病原微生物 第三类病原微生物第三类病原微生物 第四类病原微生物第四类病原微生物一一类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物非非常常严严重重疾疾病病的的微微生生物物，以以及及我我国国尚尚未未发发现现或或者者已已经经宣宣布布消消灭灭的的微微生生物。物。二二类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物严严重重疾疾病病，比比较较容容易易直直接接或或者者间间接接在在人人与与人人、动动物物与与人人、动动物物与与动动物物间传播的微生物。间传播的微生物。三三类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物疾疾病病，但但一一般般情情况况下下对对人人、动动物物或或者者环环境境不不构构成成严严重重危危害害，传传播播风风险险有有限限，实实验验室室感感染染后后很很少少引引起起严严重重疾疾病病，并并且且具具备备有效治疗和预防措施的微生物。有效治疗和预防措施的微生物。四四类类是是指指在在通通常常情情况况下下不不会会引引起起人人类类或或者者动动物物疾疾病病的微生物。的微生物。3.3.实验室生物安全分级一级生物安全防护试验室（一级生物安全防护试验室（BSL1BSL1和和ABSL1ABSL1实验室）实验室）二级生物安全防护试验室（二级生物安全防护试验室（BSL2BSL2和和ABSL2ABSL2实验室）实验室）三级生物安全防护试验室（三级生物安全防护试验室（BSL3BSL3和和ABSL3ABSL3实验室）实验室）四级生物安全防护试验室（四级生物安全防护试验室（BSL4BSL4和和ABSL4ABSL4实验室）实验室）BSL1BSL1实验室实验室BSL2BSL2实验室实验室BSL3BSL3实验室实验室病原微生物风险等级与生物安全等级BSL1BSL1：第四类病原微生物第四类病原微生物BSL2BSL2：第三类病原微生物第三类病原微生物BSL3BSL3：第二类病原微生物第二类病原微生物BSL4BSL4：第一类病原微生物第一类病原微生物 人间传染的病原微生物名录规定药人间传染的病原微生物名录规定药典涉及的阳性菌的活菌操作应在典涉及的阳性菌的活菌操作应在BSL2BSL2实验室进行。实验室进行。