微生物的筛选.ppt

一一微生物筛选原理及介绍微生物筛选原理及介绍二二微生物筛选的流程微生物筛选的流程三三微生物筛选的操作微生物筛选的操作一、微生物筛选介绍一、微生物筛选介绍1 1、概念、概念2 2、筛选及纯化的方法、筛选及纯化的方法3 3、培养基的选择、培养基的选择 概念：概念：在混杂的微生物群体中，按照微生物的代谢在混杂的微生物群体中，按照微生物的代谢特征，分离出特定功能的微生物，并进行纯化直特征，分离出特定功能的微生物，并进行纯化直至获得单一菌株的操作过程。至获得单一菌株的操作过程。土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物，土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物，从中分离可得到只含有一种微生物的纯培养。从中分离可得到只含有一种微生物的纯培养。概念概念 筛选及纯化的方法筛选及纯化的方法 培养基的选择培养基的选择微生物筛选的方法有：稀释涂布法和平板划线法。微生物筛选的方法有：稀释涂布法和平板划线法。稀释涂布法：将土壤溶液稀释成一定的梯度，将其稀释涂布法：将土壤溶液稀释成一定的梯度，将其涂布到固体平板培养基上。涂布到固体平板培养基上。平板划线法：挑取稀释涂布后长出的菌落，在固体平板划线法：挑取稀释涂布后长出的菌落，在固体平板培养基上划线培养，获取纯菌落。平板培养基上划线培养，获取纯菌落。概念概念 筛选及纯化的方法筛选及纯化的方法 培养基的选择培养基的选择 细菌的筛选：选择性培养基细菌的筛选：选择性培养基 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而从而提高该提高该菌的筛选效率。菌的筛选效率。概念概念 筛选及纯化的方法筛选及纯化的方法 培养基的选择培养基的选择细菌的保存：牛肉膏蛋白胨培养基细菌的保存：牛肉膏蛋白胨培养基配方（配方（g g）：牛肉膏）：牛肉膏3,3,蛋白胨蛋白胨10,10,氯化钠氯化钠5 5，琼脂，琼脂15,15,蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml，pH7.2pH7.2。概念概念 筛选及纯化的方法筛选及纯化的方法 培养基的选择培养基的选择二、微生物筛选纯化的流程二、微生物筛选纯化的流程样样品品富富集集培培养养梯梯度度稀稀释释涂涂布布培培养养平平板板划划线线纯纯化化斜斜面面保保存存三三 微生物筛选纯化的操作微生物筛选纯化的操作注意事项：注意事项：筛选之前，提前制作好试验用的培养基。筛选之前，提前制作好试验用的培养基。与培养微生物相关的试验器材需要灭菌，方法为与培养微生物相关的试验器材需要灭菌，方法为在在 121 121 的条件下高压灭菌的条件下高压灭菌2020分钟。分钟。与微生物相关的操作需要在无菌操作台上进行。与微生物相关的操作需要在无菌操作台上进行。操作之前操作之前1515分钟打开紫外灯。分钟打开紫外灯。样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存采样：土壤样品，梅花形布点采样，采样：土壤样品，梅花形布点采样，取得的用四分法进行取样，将样品取得的用四分法进行取样，将样品放入放入4 4 冰箱中保存待用。冰箱中保存待用。富集培养：指从微生物混合群开始富集培养：指从微生物混合群开始,对特定种的数量比例不断增高而引向对特定种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种培养方法。在适于目标纯培养的一种培养方法。在适于目标微生物而不适于其他微生物生长的条微生物而不适于其他微生物生长的条件下继续培养，则目标微生物将成为件下继续培养，则目标微生物将成为优势种而得到纯培养。优势种而得到纯培养。样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存 以筛选产以筛选产DMSDMS功能微生物为例：功能微生物为例：取取2.5g2.5g土样置于土样置于50ml50ml改良基改良基础盐液体培养基中，础盐液体培养基中，28 28 震震荡培养荡培养4 4天。天。样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存 将菌种用无菌水制成悬液。将菌种用无菌水制成悬液。取若干只无菌试管，每只内盛取若干只无菌试管，每只内盛9ml9ml无菌无菌水。水。吸取上述菌悬液吸取上述菌悬液lmllml加入第加入第1 1只含有无只含有无菌水的试管内。也就是菌水的试管内。也就是1010-1-1。从第从第1 1只试管内只试管内(10(10-1-1)吸取吸取lmllml注入第注入第2 2只含有无菌水的试管内，也就是只含有无菌水的试管内，也就是1010-2-2。用同样方法，制成用同样方法，制成1010-3-31010-8-8的菌悬液。的菌悬液。样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存划线目的：逐步纯化，直至出现单菌划线目的：逐步纯化，直至出现单菌落，获得纯菌株。落，获得纯菌株。3 35 5次。次。样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存样品样品富集培养富集培养梯度稀释梯度稀释涂布培养涂布培养划线纯化划线纯化斜面保存斜面保存 将接种菌株的斜面放入将接种菌株的斜面放入4 4 冰箱中保存。冰箱中保存。至此，已经完成了微生物的初筛。有关微至此，已经完成了微生物的初筛。有关微生物的更多信息可以用鉴别培养基对其进生物的更多信息可以用鉴别培养基对其进行复筛，或者运用其他手段对其进行鉴别。行复筛，或者运用其他手段对其进行鉴别。