核型多角体病.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,病 毒 学,第一节 核型多角体病,第二节 质型多角体病,第三节 浓核病,第四节 病毒病的发病规律,第五节 病毒病的防治,病毒的发现？,19,世纪末，钱伯伦,创制细菌过滤器后，发现了许多毒素和过滤性因子。,1892,年，苏联学者伊万诺夫斯基,证明存在过滤性病毒（发现患花叶病的烟草叶汁通过过滤器后仍有侵染性）。,19,世纪末,20,世纪初,，已经找到许多过滤性病毒。,1915,年，,Twort,首先发现细菌病毒。,1935,年，美国生化学家,W.M.Stanleg,获得了烟草花叶病毒结晶。（第一位）,开始了对病毒本质的认识，促进病毒学的发展，而且成为分子生物学发展的里程碑。,超显微的，可以通过细菌过滤器。,病毒粒子只含一种核酸。,病毒粒子不能生长，也不能二等分裂。,无细胞结构。,病毒只能利用宿主细胞的核糖体进行,Pr,合成,。,病毒的主要特征,：,家蚕病毒病的研究历史,1149,年陈敷所著,农书,中关于家蚕脓病病症,“,高节,”,、,“,脚肿,”,的描述。,1639,年徐光启的,农政全书,中，有病蚕,“,游走而不安箔,”,的描述。,1874,年汪日桢,湖蚕述,记有病蚕,“,高节而足流白水,”,。,1912,年,Acqua,发现了第一个昆虫病毒,BmNPV,。,迄今已发现,12,目,1600,余种昆虫可被,16,个科的病毒所感染。,家蚕病毒病的种类,1,核型多角体病,由杆状病毒科的,家蚕,核型多角体病毒,（,BmNPV,）,寄生血细胞和体腔内各种组织的,细胞核,，并形成多角体。,2,质型多角体病,由呼肠病毒科的,家蚕质型多角体病毒,（,BmCPV,）,寄生中肠,圆筒,形细胞，并在,胞质,中形成多角体。,复习内容：家蚕幼虫中肠上皮细胞的类型？,家蚕病毒病的种类,3,浓核病,由细小病毒科的,家蚕浓核病病毒,（,BmDNV,）,寄生中肠圆筒形细胞的,细胞核,，不形成多角体。,4,病毒性软化病,由小,RNA,病毒科的,家蚕软化病病毒,（,BmFV,）,寄生中肠,杯形细胞胞质,中，不形成多角体，但形成类似多角体的包涵体（封入体）。,家蚕病毒病的,危害情况,病毒病是目前蚕茧生产中最为常见、,危害最重,的一类病害，给蚕茧生产造成的损失约占蚕病造成损失的,80%,。,上述四种病毒病在我国都有不同程度的发生，其危害也因各个蚕区而不同。南方蚕区以中肠型脓病为主；而北方蚕区则以血液型脓病造成的损失最大。浓核病常与,CPV,并发；病毒性软化病目前已很少发生。,因此，本章,重点,讲解,NPV,、,CPV,，,并介绍,DNV.,第一节 核型多角体病,核型多角体病,也称,血液型脓病,，农民常称之为,脓病,或,脓肿,。,一 病原,家蚕核型多角体病毒,（,Bombyx,mori,Nuclear,Polyhedrosis,Virus NPV,）。,存在形式有两种：,NPV,与,NPB,（,多角体）。,（一）,NPV,属杆状病毒科，核型多角体病毒属，,病毒粒子,杆状，,33080 nm,；,dsDNA,;,Tm,为,87.5,；,NPV,病毒粒子的,超微结构,NPV,膜,髓核（,dsDNA,）,囊膜,胶粘层,衣壳,核衣壳,一个囊膜内只含,一个,核衣壳,一个囊膜内包含,两个以上,核衣壳,模式图,单粒包埋型,（,SEV,）,与,多粒包埋型,（,MEV,）,寄生部位,血体壁气管上皮 脑脂肪卵巢皮膜 丝腺精巢皮膜,SEV,（,%,）,9798 7289 63,MEV,（,%,）,23 1128 37,环境温度25,28,多形成,SEV,，,33,35,多形成,MEV,。,（,二）,NPB,（,多角体）,1,构成,多角体,多角体蛋白,3%5%,病毒粒子,核糖核酸聚合酶,0.3%,Si,；,微量,Fe,、,Mg,与宿主细胞,Pr,和病毒,Pr,均不同，分子量,29000,，由,245,个,AA,残基组成。,2,理化特性,多为整齐,六角形,十八面体（偶有四方、三角或不正形）；,2,6,m,（,平均,3.2,）；光镜下,易观察,到；淡绿色，折光性强；比水重；不溶于水及有机溶剂；对浓酸不稳定；,易溶于碱,性溶液；苏丹,不能使其着色。,扫描电镜照片,NPB,的,形态,光镜照片,N.b,NPB,NPB,形态,NPB,形态受下列因素影响,1,寄生部位,：血细胞、气管上皮、体壁上皮、脂肪体中均,六角形,。而丝腺腺细胞中则巨型,三角形,。多角体且较其他组织大,2,倍左右。睾丸、精室内膜上寄生则,四方形,。,2,宿主,：,BmNPV,接种,二化螟,后：,1,代六角形，,7,代后四方形，再将四角形,NPB,反接种于,B.m,.,，,则：第一代少量六角形，第四代达,70%80%,，第六代全部为六角形。,3,与环境（,温度,）有关：,BmNPV,接种蛹体。接种后,2824hr,后，再经,35,则产生,四角形,NPB,28,下,4896hr,后,再经,35,则产生,六角形,。,35,下,2448hr,后,再经28,则产生,六角形,。,35,下,7296hr,后,再经,28,则产生,四角形,。,NPB,形态受下列,因素,影响,3 NPB,的,稳定性,处理 浓度 温度 失活时间,(min),日光,40 20h,干热,100 45,湿热,100 3,甲醛,2%25 15,漂白粉,0.3%25 3,石灰浆,1%25 3,石灰水 清,25 24h,盐酸 比重,1.025 25 3,二 病症,1,典型病症（共同症状）,2,不同时期发病,不眠蚕,：在蚕的,催眠,期间，蚕群体大部分快入眠时，,NPV,病蚕体壁紧张发亮，呈乳白色，行动活泼，不能入眠，终于体皮破裂，流脓而死。,起节蚕,：在,起蚕,时发病。病蚕生长停滞，体色乳白而不见转青。体壁松弛多皱，体躯缩小。前节的节间膜向后,套叠,，终于出现典型的病征而死。,高节蚕,：又称“竹节蚕”。源于病蚕各环节节间膜或环节后半部（靠近节间膜处）隆起，就象竹节。多在,4,、,5,龄蚕盛食期发病。,2,不同时期发病,脓蚕,：多发生于,5,龄后期至,上簇前,。环节肿胀拱起，呈算盘珠状，体壁紧张发亮，体色乳白，病重时，爬行缓慢，终因腹足失去把持力，从蚕匾或蔟中坠下，流脓而死。发病迟者死于蔟中或结薄皮茧而死亡，生产上比较,常见,。,斑蚕,：在生产上较少见，与蚕品种有关，现行品种少发生。发生时出现对称性的病斑，如黑褐色的焦脚、黑色气门及大的斑块等。,蛹期,病症：在,5,龄后期、熟蚕、初蛹期感染可造成蛹期发病。病蛹体色,暗褐或乳白,，体壁易破，一经震动即流出浓汁而死，造成茧层污染，即内印茧或死茏茧。,2,不同时期发病,高节,狂躁爬行,2,不同时期发病,腹足基部乳白,气门周围水渍状病斑,2,不同时期发病,2,不同时期发病,2,不同时期发病,三 病变,NPV,及其包涵体是在寄主细胞核内增殖和形成的，因而受感染的细胞核便发生一系列的病变过程。随着多角体的不断增多，使细胞核逐渐膨胀，随后细胞亦膨大破裂，这样多角体、病毒及细胞碎片就游离于血液中。,血细胞,、,气管,上皮,、,脂肪,组织及,真皮,细胞易形成多角体。在生殖腺和神经细胞中只能形成少量多角体，而蜕皮脱、唾腺和马氏管等则很难形成，在丝腺中除前部丝腺不能形成多角体，中、后部丝腺细胞核均能形成大量多角体。,目前已发现,NPV,可在,中肠,圆筒形细胞中增殖,但,不能形成多角体,.,病 变,病 变,四 致病机理,1,感染入侵,NPB,蚕食下,放出,NPV,污染桑叶,碱液溶解,肠腔,灭活,排出,RFP,围食膜,中肠上皮细胞,复制,胞核定位,血液,NPV,创伤,NPV,细胞间隙,血细胞核,定位,2,病毒复制,dsDNA,dsDNA,S,tRNA,rRNA,病毒,Pr,衣壳,Pr,NPB,Pr,ssDNA,mRNA,胞,质,NPV,NPB,细胞核,细胞质,E,3,装配,4,释放,5,病毒增殖,NPV,的增殖曲线,隐潜期缓慢增殖期,高速增殖期,稳定增殖期,五 发病特点,1,本病以,食下传染,为主（,NPB,），,也可经伤口感染（,NPV,）。,2,主要传染源为,病蚕血液,（脓汁）。,3,本病主要发生在,3,龄,老熟（蛹期），尤以,5,龄中期,老熟,前后最为严重。,4,本病属于亚急性传染病，小蚕感染后经,3,4,天发病死亡，大蚕经,4,6,天发病；外温高时，病程加快。,5,病蚕体壁破裂流脓之前，蚕座,二次,感染的可能性较小。,6,由于,NPB,对自然环境有强的抵抗力，故该病除具有,水平传播,外，尚具有较强的,垂直传播,能力。,7,恶劣的环境条件及一些理化因素刺激可,诱发,本病。,8,不同蚕,品种,对本病抗性不同。,六 诊 断,1,肉眼,鉴别,2,显微,镜检,查,此病在发病初期，外观病症往往不明显，但发育迟缓，有时迟眠。取可疑蚕剪断尾角或腹足，滴一滴血液于载玻片上，加盖片与,400600,倍显微镜下观察。,如有,折光性较强,，,大小较整齐的六角形,多角体，即可确诊。如病蚕处于感染中期，可观察血细胞,核内,有无折光性强、大小不等的颗粒，据此确诊。,镜检时，脂肪球与多角体的,区别,方法：（,1,）,Sudan,染色法；（,2,）有机溶剂溶解法；,六 诊 断,2,显微镜检查,3,PCR,检测与,血清学,方法,以,已知的抗体检查蚕体内是否存在相对应的抗原，从而做出蚕是否被某种病毒感染。,家蚕核型多角体病,录 像,