1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,BCA,法定量蛋白质浓度,为什么选用,BCA,法？,操作简便，快速，灵敏度高，准确，试剂稳定性好，经济实用，抗干扰能力强,基本原理,BCA(bicinchoninic,acid),法蛋白浓度定量：,在碱性环境下蛋白质与,Cu2+,络合并将,Cu2+,还原成,Cu1+,（,biuret,reaction,）。,BCA,与,Cu1+,结合形成稳定的紫蓝色复合物，在,562,nM,处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。,试剂盒组成,实验步骤,1.,先将,solutionA,摇晃混匀，根据样
2、品数量，按,50,体积,solution A,加,1,体积,solutionB,试剂（,50:1,）配制成,BCA,工作液，充分混匀。,BCA,工作液在,24,小时内稳定。,2.,稀释标准品：完全溶解蛋白质标准品（,5mg/mlBSA,-20,保存）,取,10,微升用,PBS,稀释至,100,微升（样品一般可用,PBS,稀释），,使终浓度为,0.5mg/ml,。,将稀释后的标准品（,0.5mg/ml,）按,0,2,4,，,6,，,8,12,16,20,微升分別加到,96,孔板的蛋白标准品孔中，加标准品稀释液补足到,20,微升。,体积,(,ul,),0,2,4,6,8,12,16,20,终浓度,（,ug/ul,),0,0.05,0.1,0.15,0.2,0.3,0.4,0.5,加适当体积样品到,96,孔板的样品孔中，加标准品稀释液不足道,20ul,。,即：将蛋白质样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作,2,倍、,4,倍、,8,倍稀释,4.,各孔加入,200,微升,BCA,工作液，用加样枪轻轻吹打混匀（注意：不要弄出气泡影响读数），,37,放置,30-60,分钟。,冷却到室温后，用酶标仪测定,A562nm,，或,540-590nm,之间的其他波长的吸光度，根据标准曲线计算出蛋白浓度。,
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