ALK的病理学和诊断指南.ppt

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,ALK,的病理学和诊断指南,返回目录,FISH,ALK,检测的现行标准,阳性结果,标准：分开的红,/,绿信号,非典型：单个红点,非典型：分开,+,单个红点,ALK,阳性的定义,:15%,的细胞呈阳性,Varella-Garcia et al.,ASCO 2010;Abs#10533,FISH,ALK,检测的现行标准,阴性结果,1,标准：融合信号,非典型：单个绿点,1Varella-Garcia et al.,ASCO 2010;Abs#10533,FISH,检测样本的制备及染色概述,肿瘤区域的确定,对一玻片进行,H&E,染色,标出肿瘤区域（不包括坏死区域、原位癌和小细胞癌）,用标记好的,H&E,染色玻片作为模板，在未染色玻片上标注肿瘤区域,*,(,后续步骤参见未染色玻片,),FFPE,样本的制备,从组织块上切下,2,段，厚度,51,m,置于表面带正电荷的载玻片上,去石蜡,预处理,蛋白酶处理,与探针杂交,清洗,(,杂交当日,),DAPI,复染,准备好玻片自以下步骤开始,*FISH,法中应使用来自,H&E,染色的连续,10,片内的切片,Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit Package Insert,ALK,FISH,信号解读指南,典型的信号形式,阴性信号：邻近或融合的橙色和绿色,阳性信号：分开或绿色丢失,Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit Package Insert,EML4-ALK,的,FISH,检测中需注意的问题,至少计数,50,个肿瘤细胞以确保结果的精确性,1,如果红色和绿色探针分离,2,个信号直径,，则认为,FISH,信号为阳性,1,ALK,重排可能遍及整个肿瘤而非局部,2,约,5%-11%,的细胞会出现假阳性分离,1,2,ALK,重排细胞比例的增加与克唑替尼治疗的肿瘤缓解程度并无关联,3,Varella Garcia et al.,IASLC 2011;Abs#MTE36.1,2.Camidge et al.,Clin Cancer Res,2010;16:5581-5590,3.Camidge,IASLC 2011;Abs#MO04.04,FISH,病理报告实例：显示,EML4-ALK,融合,Courtesy I.Wistuba,FISH,病理报告实例：显示无,EML4-ALK,融合,病理报告要使用准确的语言，如,“,EML4-ALK,重排,15%,”,“,ALK,异常,”,还包括其他变异，如,ALK,基因拷贝数增加，此变异未被确认为对,ALK,抑制剂应答的预测性标记物,1,Courtesy I.Wistuba,1.Raftopoulos et al.,IASLC 2011,Abs#O05.06,免疫组织化学,(IHC),检测,ALK,表达,使用高敏感度检测系统后，越来越多的数据支持,IHC,可用作初步筛查的方法,敏感度和特异度可达,100%,，尽管在不同研究中存在差异,与,FISH,相比，,IHC,是一种更常规的技术，成本低、工作量相对小,ALK IHC,FISH,患者,1:,IHC,显示,ALK,表达量高，,FISH,显示,重排,患者,2:,IHC,显示无,ALK,表达，,FISH,显示无重排,Mino-Kenudson,Clin Cancer Res,2010;16:1561-1571.,IHC,需要标准化,从临床试验过渡到大规模使用,IHC,前，还需要对以下方面进行规范：,最好的抗体和检测系统是什么,应采用哪种评分系统,有哪些生物学相关的截止点,采用适当的质量控制,抗体,研究数量,供货商,敏感度范围,特异度范围,ALK1,8,Dako,9%-100%,97%-100%,5A4,6,Abcam,Novocastra,18%-100%,96%-100%,D5F3,1,Cell Signaling,100%,99%,Adapted from Yi et al.,J Thorac Oncol,2011;6:459-465,and Mitsudomi et al.,ASCO 2011,Abs#7534,研究中的检测,ALK,重排的其他检测方法,多重,RT-PCR,用于筛查所有,ALK,融合变异体,1,2,显色原位杂交技术,(CISH),3,使用标准明视野显微镜，,数据可存档,465,例样本结果显示与,FISH(k=0.92),和,IHC(k=0.82),高度一致,分离型,CISH,探针显示,ALK,重排,Takeuchi,等报道的新发现的,EML4-ALK,变异体,4,的,RT-PCR,结果,1.Takeuchi et al.,Clin Cancer Res,2008;14:6618-6624,2.Li et al.,ASCO 2011;Abs#10520,3.Kim et al.,IASLC 2011;Abs#O05.02,EML4-ALK,融合变异体,V1,V2,V3A,V3B,V4,V5A,V5B,V6,V7,EML4-ALK.V1,+,-,-,-,-,-,-,-,-,EML4-ALK.V2,-,+,-,-,-,-,-,-,-,EML4-ALK.V3A,-,-,+,-,-,-,-,-,-,EML4-ALK.V3B,-,-,+,-,-,-,-,-,EML4-ALK.V3AB,-,-,+,+,-,-,-,-,-,EML4-ALK.V5A,-,-,-,-,-,+,-,-,-,EML4-ALK.V5B,-,-,-,-,-,-,+,-,-,EML4-ALK.V6,-,-,-,-,-,-,-,+,-,EML4-ALK.V5A/6,-,-,-,-,-,+,-,+,-,EML4-ALK.V4,-,-,-,-,+,-,-,-,-,EML4-ALK.V7,-,-,-,-,-,-,-,-,+,EML4-ALK.V4/7,-,-,-,-,+,-,-,-,+,RT-PCR,检测到的多个,EML4-ALK,变异体,Danenberg et al.,ASCO 2010,Abs#10535,非小细胞肺癌分子检测规程提议,现行指南中建议进行,EGFR,突变检测,提议在规程中增加,ALK,筛查,；,随着诊断时间的缩短以及更好利用标本，方法将不断被优化,Mitsudomi et al.ASCO,2011;Abs#7534,顺序,同时,Horn and Pao,临床肿瘤学杂志,2009;27:4232-4235,Koh et al.,J Thorac Oncol,2011;6:905912,优化,ALK,检测的主要因素,评价,时间范围,最好预先测试,顺序,/,平行检测,建议同时检测多个生物标记物,适用患者,任何可能出现,ALK,异位的患者,。,腺癌患者,不应根据患者年龄、种族、性别或吸烟史进行选择,