降钙素原的检测原理和溯源性.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,主要内容,降钙素原,PCT,生物特性、发展历史,降钙素原,PCT,检测原理,降钙素原,PCT,的溯源性,PCT,的生物学特点,血清降钙素,(CT),的前肽物质,分子量：,14.5 kDa,由,116,个氨基酸组成的糖蛋白质,无激素活性,11,号染色体上,的单拷贝基因,转录,甲状腺滤泡细胞,降钙素原前体,内源多肽酶,降钙素原,PCT,降钙素,分解,细胞内特殊蛋白酶,正常情况下,在细菌感染,/,脓毒血症状态下，,PCT,在各个组织、器官大量形成并释放进入血液循环系统,PCT,降钙素原,PCT,正常情况下,主要局限于甲状腺和肺的神经内分泌细胞表达并裂解成降钙素,脓毒血症及促炎症细胞因子可诱导全身各种组织多种类型细胞表达和释放,PCT,PCT,的生物学特点,快速：感染开始后,3,小时即可测得，,6-12,小时后达到峰值,峰值最高可达,1000 ng/ml,半衰期,:,接近,24 hrs,几乎不受肾功能状态影响,正常情况下，是降钙素的前体,健康人血液中浓度非常低，,0.05ng/ml,。,当细菌感染时，,PCT,可生成并释放入血液循环,PCT,发现历史,1983,年,1993,年,1994,年,在葡萄球菌中毒性休克的低钙血症机制研究中发现,PCT,，首次将,PCT,与脓毒症和炎症状态联系起来,首次将,PCT,水平与细菌感染与指导抗生素使用联系,在健康受试者中注射内毒素，发现,PCT,的动力学特点,1993,年，发表在,Lancet,的关于,PCT,在儿童脓毒症及感染患者的首项前瞻性研究,79,名疑似感染儿童：,无感染：,PCT,0.1ng/ml,重度感染：,PCT 6-56 ng/ml,无全身表现的局部感染和病毒感染：,PCT 0.3-1.5 ng/ml,重度感染者抗生素治疗后,PCT,水平下降,首次将,PCT,与细菌性感染及指导抗生素治疗联系起来,1994,年：在健康受试者中注射内毒素，发现,PCT,的动力学特点,在一次内毒素刺激的人体试验中,PCT,的动力学,变化,快速、高特异性的增长,在脓毒症情况下，,3-6,小时即可检测到其水平的增长,快速衰减,半衰期约,20-24,小时，可以快速反映治疗效果,血浆浓度,时间,(,小时,),PCT,CRP,IL-6,TNF-,IL-10,Dandona P,et al.J Clin Endocrinol Metab.1994;79(6):1605-8,主要内容,降钙素原,PCT,发展历史、生物特性,降钙素原,PCT,的检测原理,降钙素原,PCT,的溯源性,ECL,检测原理：,电化学发光免疫检测技术,E,lectro,C,hemi,L,uminescence(ECL),cobas e 601,立式型,结合,Ruthenium,结合,磁珠,转移至,电极,;,标,记后免疫,复合物与,游离组分,分离,施加电压,启动化学,发光反应,信号检测,ECL,检测原理,免疫复合物的形成,第一抗体标记生物,素,（与微磁珠结合）,第二抗体标记,Ruthenium,（产生光信号）,两种抗体皆能与靶抗原特异性结合,免疫复合物,抗体,抗原,生物素,Ruthenium,抗体,ECL,检测原理,生物素链霉亲和素特异性亲和作用,磁珠,生物素,链霉亲和素,抗原,抗体,ECL,检测原理,磁珠,-,提高反应灵敏度,磁珠,形成的免疫复合物转移至测量池,开始,ECL,反应,生物素与链霉素特异性亲和作用,反应体系中待测抗原可最大限度地与磁珠结合,提高检测反应的灵敏度,ECL,检测原理,光电倍增管检测光信号,系统优势,光信号产生迅速,ECL,信号强度,(000 counts),0,0.5,1.0,1.5,时间,(,秒,),电压作为反应的启动开关能有效地保证发光反应稳定而可控地进行,15,0,45,60,30,75,0,.4,.8,1.2,1.6,2.0,电压,(V),ECL,电压,罗氏,cobas e 601,开展项目,心肌标志物：超敏,TNT,、肌红蛋白、,NT-pro BNP,、,肌酸激酶同工酶,脓毒血症：,IL-6,、,PCT,肿瘤标志物：肿瘤相关抗原,72,4,、非小细胞肺癌相关抗原,21,1,骨标志：甲状旁腺素、骨钙素、,25-,羟基维生素,D3,、,总,I,型胶原氨基端延长肽、,胶原特殊序列,甲状腺功能：促甲状腺受体抗体,激素：促肾上腺皮质激素、皮质醇、人生长激素、雌二醇、促卵泡成熟激素、黄体生成激素、孕酮、催乳素,主要内容,状,降钙素原,PCT,发展历史、生物特性,降钙素原,PCT,的检测原理,降钙素原,PCT,的溯源性,解决溯源性,是临床检验结果,准确性,的关键,ISO/IEC17025,的质量体系中就提出,对检验结果的三点要求：,ISO/IEC17025:2005-5-15,检测和校准实验室能力的通用要求,溯源链上端,测量结果可以在计量上可,追溯至国际单位制（,SI,）,的被测量,如电解质，代谢物，甾体激素及一些甲状腺激素,测量结果,不能,在计量上可追溯至国际单位制（,SI,）的被测量,可用的国际约定的参考测量程序,国际约定校准物质,有,有,如糖化血红蛋白,有,无,如凝血因子,无,有,如蛋白激素，某些抗体和肿瘤标志物,无,无,如某些肿瘤标志物等，共,300,中组分,，,PCT,也是其中之一,制造商自行建立“自用”测量程序和标准品，为产品校准品定值,PCT,的溯源性,19,19.,冯仁丰,.,降钙素原的标准化,.,临床实验室,第,8,卷，,2014,年第,10,期，,46-47,PCT,的溯源性,不同产品之间的“可追溯性”,ISO17511,指出：,在相同的计量水平下，测量相同量的两个测量程序的测量结果具相关性，但这样的,水平相关性不提供计量可追溯性,相关系数尽管接近,1,，比对间还存在着“,显著差异,”，不能说明,结果一致，,在,y=ax+b,中会存在“斜率小于,1,，显著截距”等情况。,不同品牌产品应该通过大量临床试验，,建立自身的限值,与,BRAHMS PCT,比对的,相关性,并不代表具有,溯源性,BRAHMS PCT,TM,的双抗分别识别,PCT,肽链的,两个部位,双位点结合相比单位点结合大大,降低了假阳性率,，检测结果更精准,标记物,单克隆,抗,抗,钙抑肽,抗体,单克隆,抗降钙素,抗体,钙抑肽,降钙素,降钙素,钙抑肽,BRAHMS PCT,采用相同的,Cut off,值,中国现有的,BRAHMS PCT,梅里埃,PCT,20,PCT-Q,21,罗氏,PCT,22,PCT-LIA,23,Elecsys BRAHMS PCT,产品性能参数,参数,Elecsys BRAHMS PCT,规格,100 test/,盒,样本类型,血清，肝素锂或,K3-EDTA,抗凝的血浆,样本量,30,L,检测时间,18,分钟,检测范围,0.02-100 ng/ml,分析灵敏度,0.02 ng/ml,功能灵敏度,0.06 ng/ml,稀释,批内变异,0.01 ng/ml 7-9%,10 ng/ml 1-2%,批间变异,0.01 ng/ml 9-16%,10 ng/ml 3-4%,所需样本量少,宽广的检测范围,检测时间短,极佳的批内和批间的精密度,适用于所有罗氏免疫分析平台，且结果一致性高,Elecsys BRAHMS PCT,健康人的,Cut-Off,值,=0.05 ng/mL,95%percentile,0.046 ng/ml,n,=,492,目前所有的,PCT,均溯源至,BRAHMS PCT LIA,，均采用一致的,cut-off,值,Elecsys BRAHMS PCT,Cut-off,值,Elecsys BRAHMS PCT(ng/ml),PCT ng/ml,SIRS,脓毒症,重度脓毒症,临床意义,0.5,63,25,5,排除脓毒症,0.5,32,46,112,0.5-2,灰区,病例数,96,71,117,_,2,88,55,18,2-0.5,灰区,2,7,16,99,确诊脓毒症,PCT,水平,Cut-off=0.5 ng/ml,Cut-off=2 ng/ml,敏感度,特异性,敏感度,特异性,SIRS vs,脓毒症,65%,66%,23%,93%,SIRS vs,重度脓毒症,96%,66%,85%,93%,PCT2 ng/mL,提示：重度脓毒症的可能性较高,Elecsys BRAHMS PCT,cobas e 601,vs,LIA&,Kryptor(BRAHMS),方法学比较显示,Elecsys BRAHMS PCT,与两种方法都具有很高的一致性,PCT,鉴别细菌性感染的敏感度和特异性均高于传统标记物（如反应蛋白、白细胞，红细胞沉降率等）,PCT,具有,早期、及时、快速、准确的特性，,适用于脓毒症,/,严重细菌感染的实验室标志物。,BRAHMS PCT,的独特的抗体与制备技术，具有,可溯源性,，且多种检测平台结果具有,一致性,。,BRAHMS PCT,的,可靠性使得国内外权威指南均推荐,多种临床应用。,内容小结,