1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,种子,有,果皮包被着，（,胚珠,有,子房壁包被着,）,被子植物 裸子植物,种子,无,果皮包被着，（,胚珠,无,子房壁包被着,）,种子,花的结构,被子植物的,有性生殖,是在,花里,进行的，,雌蕊,和,雄蕊,是进行有性生殖的主要部分,。,雌蕊,雄蕊,雌蕊,的结构,花粉粒,花粉管,精子,(2,个,),卵细胞,极核,（一）、,被子植物的花粉发育,花丝,花药：,囊状结构，内有很多花粉粒,雄蕊：,一、,基础知识,药隔,：,由薄壁细胞构成，内有维管束,花药,花粉囊,（,4,或,2,）,囊壁,花粉粒,药隔,药隔,花粉囊,囊
2、壁,花粉,是,小孢子母细胞,经过,减数分裂,而形成的，因此，花粉是,单倍体,的,生殖细胞,花粉粒的形成,经历时期：,四分体时期、单核期、双核期,四分体时期,(,小孢子,),有丝,分裂,单核靠边期,(,小孢子,),单核居中期,(,小孢子,),花粉母细胞,（小孢子母细胞）,减数分裂,精子,精子,有丝,分裂,花粉管细胞核,生殖细胞核,生殖细胞,营养细胞,双核期,两个精子和一个营养细胞的基因型相同,1,个花粉母细胞,4,个小,孢子,减分,有分,4,个,花粉管细胞核,4,个,生殖细胞核,有分,8,个,精子,(,二,),、产生花粉植株的两条途径,（三）、影响花药培养的因素,1,、材料的选择,时期初花期,选
3、择合适的,花粉发育时期,是,提高诱导成功率的重要因素,只有某一个时期对离体刺激敏感。,最适合花药培养的小孢子发育时期为,单核靠边期,措施？,2,、培养基的组成,花药培养所采用的培养基因植物的不同而有所变化,3,、其他因素,亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响,六、实验操作,（一）材料的选取,某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用,焙花青,-,铬矾法，,这种方法能将,花粉细胞核染成蓝黑色。,最常用的方法有,醋酸洋红法,1,、方法,醋酸洋红法染色机理,醋酸洋红为,碱性染色剂,，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是,DNA,和蛋白质,易被碱性染料着色,染成红色
4、醋酸洋红的配置,2,、醋酸洋红法,将体积分数,45,的醋酸,100ml,煮沸，缓缓加入,1g,洋红，在加热回流,8h,，,冷却至,50,，过滤即可。,将花药放在载玻片上，加一滴质量分数,1,的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。,染色操作,3,、焙花青,铬钒法,将无水酒精与冰醋酸按体积比为,3,：,1,的比例混匀,卡诺氏固定液的配制方法,将,5g,铬明矾,K,2,SO,4,Cr,2,(SO,4,),24H,2,O,加入,90ml,蒸馏水中，溶解后加入,0.1g,焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸,5,分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至,100ml,。,焙花青,铬钒溶液的
5、配制方法,花药应该在,卡诺氏固定液中,固定,20min,，,然后取出放在载玻片上，,加焙花青,铬钒溶液染色，,盖上盖玻片后在显微镜下检查。,染色操作,（二）材料的消毒,1,、酒精处理,花蕾用体积分数,为,70%,的酒精,浸泡,30,秒，立即取出。,无菌水清洗,无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,2,、消毒液处理,放入,质量分数为,0.1%,的氯化汞,溶液中,24,分钟（也可质量分数,为,1%,的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液,）,无菌水冲洗,35,次,用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，,通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。,（三）接种和培养,在无菌条件下
6、除去萼片和花瓣用镊子取出花药,要彻底去除花丝，,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,1,、剥取花药,勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织,注意：,立即将花药接种于培养基上，通常每瓶,接种花药,7-10,个,。,2,、接种,培养条件：温度控制在,25,左右，不需要光照。,幼小植株形成后才需要光照。,3,、培养,培养：一般经过,20-30,天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体,长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株,注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，,必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，,分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。,在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是,营养核和生殖核融合,造成的）,4,、鉴定和筛选,5,、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：,项目,相同点,不同点,植物组织培养技术,离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。,外植体为,体细胞，染色体数无需加倍。,花药培养技术,取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。,
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