血细胞分析仪检验.ppt

产生脉冲电信号。”,脉冲次数,细胞数量，脉冲大小,细胞体积。,第三章 血液分析仪检验,电阻抗原理示意图,负压,血细胞,悬液,外电极,内电极,小孔,小孔管,小孔电流,样品杯,小孔近观,库尔特原理三要素：小孔、负压、电极,检测：阻抗大小,-,细胞体积，,脉冲,数量,-,细胞个数,第三章 血液分析仪检验,1,、电阻抗法,血细胞分析技术,（,1,）电阻抗原理,(,principle of electrical impedance),，,又称库尔特原理（,Coulter principle,）,第三章 血液分析仪检验,电阻抗原理,血细胞相对非导电，悬浮在电解质溶液中受负压吸引通过计数小孔时，引起电阻瞬间变化产生脉冲信号，脉冲振幅代表细胞体积，脉冲数量即细胞个数。,用于红细胞、白细胞、血小板计数和体积测定,第三章 血液分析仪检验,（,1,）电阻抗法白细胞检测原理,35-450fl,范围内分析白细胞（计数和 体积三分类）,%,35 90 160 300 400 450(fl),第三章 血液分析仪检验,检测区域,白细胞,白细胞通过小孔,白细胞计数示意图,示波镜,第三章 血液分析仪检验,白细胞体积,生理状态下：单核细胞,嗜酸细胞,中性粒细胞,嗜碱细胞,淋巴细胞,溶血素处理后：,中性粒细胞,嗜酸细胞,单核细胞,嗜碱细胞,淋巴细胞,第三章 血液分析仪检验,三分类原理：,白细胞经溶血素处理，胞质渗出，细胞皱缩，胞膜紧裹核与颗粒，体积发生变化,第一群,（,35,90fl,）,小细胞区,：淋巴细胞（体积最小，一般,在,35,90fl,）。,第二群,（,90,160fl,）,是,单个核细胞区,（中间细胞）：包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等,第三群,（,160fl,）,大细胞区,：嗜中性粒细胞（体积最大，一般在,135-350fl,）。,第三章 血液分析仪检验,Lymphocyte,Monocyte,Granulocyte,小细胞,单个核细胞,粒细胞,淋巴,嗜碱,单核,嗜酸,中性粒细胞,第三章 血液分析仪检验,仪器组成,1.,信号发生器,2.,放大器,3.,阈值调节4.,甄别器,5.,整形器,6.,技术系统,第三章 血液分析仪检验,（,2,）电阻抗法红细胞检测原理,红细胞计数和血细胞比容测定,36-360fl,范围内计数红细胞,100 200 300 400(fl),%,第三章 血液分析仪检验,检测区域,红细胞,红细胞通过小孔,红细胞计数示意图,Oscilloscope,示波镜,第三章 血液分析仪检验,血红蛋白检测原理,溶血剂破坏红细胞释放血红蛋白，,Hb,与溶血剂某些成分结合成血红蛋白衍生物，特定波长下比色，吸光度变化与血红蛋白含量成正比,ICSH,和,WHO,推荐氰化高铁血红蛋白法,第三章 血液分析仪检验,（,3,）电阻抗法血小板检测原理,血小板计数：,2-20fl,范围计数为血小板,因体积较小，可与红细胞在一个系统中进行检测。,直方图,在,2,30fl,（,不同仪器范围有差异）。,血小板平均体积,（,mean platelet volume,MPV,）,。,10 20 30(fl),%,第三章 血液分析仪检验,检测原理：,组合应用,电学,光学,细胞化学等,光散射法血细胞分析技术,第三章 血液分析仪检验,从三分群到五分类,三分群,：,淋巴细胞,单个核细胞,中性粒细胞,五分类,：,淋巴细胞,单核细胞,中性粒细胞,嗜酸细胞,嗜碱细胞,第三章 血液分析仪检验,3,、光散射法,血细胞分析方法,（,1,）容量、电导、光散射（,VCS,）,测量法,2,）电阻抗与射频技术联合检测法,（,3,）光散射与细胞化学技术联合检测法,（,4,）多角度偏振光散射检测法,第三章 血液分析仪检验,（,1,）容量、电导、光散射（,VCS,）,测量法,第三章 血液分析仪检验,白细胞接近原态的分析,Scatter Pak,双试剂系统的作用,溶血剂,(E-,lyse,):,溶解红细胞,终止剂,(S-,lyse,):,令溶解作用停止，并使白细胞恢复到“接近原态”,第三章 血液分析仪检验,接近原态的,WBC,分析,接近原态的白细胞,进入流式通道,第三章 血液分析仪检验,正常压力差：标本压力大于鞘流压力,第三章 血液分析仪检验,体积检测,(V),V,是以库尔特原理检测细胞的体积,获得的是完全的细胞体积,VCS,-DC,第三章 血液分析仪检验,细胞内部结构检测,(C),C,运用高频电磁探针检测细胞的内部结构,获得细胞核复杂程度、核质比例的信息,区分分叶核和非分叶核细胞,VCS-RF,第三章 血液分析仪检验,VCS-Laser,S,是激光单色光束扫描细胞产生,宽角度的散射光,（,10,-70,）来测量细胞表面形态及颗粒构型和质量，,更好地根据颗粒特性区分淋巴细胞,、中性粒细胞和嗜酸细胞,细胞颗粒特性检测,(S),第三章 血液分析仪检验,VCS,检测,八千多个白细胞逐个、直接、同时地在流式通道内接受,VCS,三重检测，得到各自的三维座标值,V,C,S,第三章 血液分析仪检验,五分类,VCS,技术,运用,V,、,C,、,S,三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。,V-,低频波，分析细胞体积；,C-,高频波，分析细胞核型；,S-,激光，分析细胞的颗粒特性。,第三章 血液分析仪检验,三维细胞定位,第三章 血液分析仪检验,第三章 血液分析仪检验,VCS,三维分析的技术特点,接近原态的白细胞分析,一个分类试剂包,增强型流式通道，,VCS,直接、同时、三重检测,分析细胞的视角与手工相似,真正的三维检测,VCS,，,汇集最全面的物理检测工具,三维分析的高分辨率,(256,256,256),白细胞五项分类,10,多种异常细胞的检测,第三章 血液分析仪检验,血液分析仪的不足,起筛查作用,识别异常细胞和幼稚细胞有局限性,识别血液寄生虫能力不足,血涂片显微镜形态学检查补充不足,第三章 血液分析仪检验,（,2,）电阻抗与射频法,（能透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少）：,RF:,射频电流,细胞内部结构信息,DC:,直流电,细胞大小的信息,第三章 血液分析仪检验,嗜酸性粒细胞检测系统,嗜碱性粒细胞检测系统,5,种白细胞分类检测系统：,直流电（,direct current,，,DC,）,为横坐标，以射频（,radio frequency,，,RF,）,为纵坐标的二维分析图。,幼稚细胞检测系统：,第三章 血液分析仪检验,（,3,）激光与细胞化学法,1,）过氧化物酶检测通道；,2,）嗜碱性粒细胞,/,分叶核检测通道,。,第三章 血液分析仪检验,1,）过氧化物酶光散射检测,光散射测细胞大小，根据过氧化物酶含量高低区分为,嗜酸粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、嗜碱粒细胞,物理、化学联合检测,第三章 血液分析仪检验,2,）嗜碱性粒细胞,/,分叶核检测通道,当血液进入嗜酸性粒细胞通道时，红细胞被溶解，除嗜碱性粒细胞外，其余所有白细胞膜均被破坏，胞质溢出，仅剩裸核。激光照射嗜碱性粒细胞后，产生散射光的变化，形成二维细胞图。,第三章 血液分析仪检验,（,4,）多角度偏振光散射,（multi-angle polarized scatter separation of white cell,MAPSS,）,法,0,：前角散射光,（,1,3,），可粗略测定细胞大小。,10,：狭角散射光,（,7,11,），可测定细胞内部结构相对特征。,90,：垂直散射光,（,70,110,），测定细胞内部颗粒和胞质情况。,90,：消偏振光散射,（,70,110,），区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。,第三章 血液分析仪检验,第三章 血液分析仪检验,光散射法红细胞检测原理,低角度,(2,3,),光散射,：测量红细胞体积与数量,高角度,(5,15,),光散射,：测定单个红细胞血红蛋白浓度,得到,MCV,、,MCH,、,MCHC,测定值。,第三章 血液分析仪检验,光散射法血小板检测原理,Mie,理论（,Mie theory of light scatter for homogeneous spheres,）：,当球形化的血小板一个一个通过激光照射区时：,第三章 血液分析仪检验,低角度,（,2,3,）：测量细胞大小，,高角度,（,5,15,）：检测细胞折射指数,（,reactive index,，,RI,）,与细胞密度有关；,大血小板与各种碎片如果体积相似，但由于内容物不同，,RI,相差较大，二维散射图能鉴别。,折射系数,:,血小板,1.35,1.40,RBC,含高浓度,Hb,1.35,1.44,第三章 血液分析仪检验,4,、血红蛋白检测原理,比色法,第三章 血液分析仪检验,血红蛋白检测原理,溶血剂破坏红细胞释放血红蛋白，,Hb,与溶血剂某些成分结合成血红蛋白衍生物，特定波长下比色，吸光度变化与血红蛋白含量成正比,ICSH,和,WHO,推荐氰化高铁血红蛋白法,第三章 血液分析仪检验,二 血细胞分析仪检验参数,（,一）检测参数,中高档仪器检测参数：,20,项左右至超过,40,项,（二）相关参数的临床应用,第三章 血液分析仪检验,血细胞参数介绍,WBC,、,NE%,、,NE#,、,LY%,、,LY#,、,MO%,、,MO#,、,EO%,、,EO#,、,BA%,、,BA#,；,RBC,Hgb,、,Hct,、,MCV,、,MCH,、,MCHC,、,RDW,PLT,、,MPV,、,PCT,、,PDW,RET%,、,RET#,、,MRV,、,RMI,第三章 血液分析仪检验,三 血液分析仪检验图形,（一）、血细胞直方图,横坐标为血细胞体积大小,纵坐标为不同体积细胞的相对频率（数量或百分比）。,1.,白细胞直方图,第三章 血液分析仪检验,（,1,）,.,正常白细胞直方图,%,35 90 160 300 400 450(fl),第三章 血液分析仪检验,（,2,）异常白细胞直方图,淋单区：异淋、嗜酸、嗜碱、原始细胞增多,单粒区：未成熟,N,、嗜酸、异常细胞增多,PLT,聚集、巨大,PLT,、,NRBC,、未溶,RBC,、脂质颗粒,中性粒细胞增多,第三章 血液分析仪检验,2.,红细胞直方图,（,1,）,.,正常红细胞分布：,50,200fl,100 200 300 400(fl),第三章 血液分析仪检验,（,2,）,.,异常红细胞直方图,波峰左移（,MCV,减小），峰底变宽（,RDW,增大），见于缺铁性贫血,波峰左移（,MCV,减小），,峰底基本正常（,RDW,正常），见于 珠蛋白生成障碍,第三章 血液分析仪检验,异常红细胞直方图,波峰右移（,MCV,增大），峰底变宽（,RDW,增大），见于巨幼细胞贫血,出现双峰，见于铁粒幼细胞性贫血、贫血治疗后,第三章 血液分析仪检验,3血小板直方图,（,1,）,.,正常血小板直方图呈左偏态分布：,2,30fl,分布，主要在,2,20fl,。,数量,体积,fl,第三章 血液分析仪检验,（,2,）,.,异常血小板直方图,波峰右移（,MPV,增大），与横坐标接近或重合点右移，见于巨大血小板增多,波峰左移（,MPV,减小），与横坐标接近或重合点左移，见于小血小板增多,第三章 血液分析仪检验,异常血小板直方图,波峰右移（,MPV,增大），不与横坐标重合，见于 血小板聚集干扰,峰右侧明显抬高上扬，可能是小红细胞或红细胞碎片干扰,第三章 血液分析仪检验,血细胞分析专利技术,脉冲编辑,重叠校正,三孔计数,延长计数,扫流技术,拟合曲线,燃烧电路,酶清洁剂,第三章 血液分析仪检验,