大肠菌群检测(二)LST肉汤接种.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大肠菌群检测（二）,实训目的,进一步理解大肠菌群检测流程,掌握无菌间内梯度稀释和液体接种操作步骤,会制备,BGLB,液体培养基,实训仪器及设备,吸量管,1mL 3,支，,带有,225mL,无菌水的三角瓶,1,只，,带有,9mL,无菌水的试管,3,只，,吸耳球，酒精灯，记号笔，,LST,肉汤培养基,9,只，,面粉，,培养箱。,实训步骤,任务一：,梯度稀释,和,液体接种,1,、量取,25mL,牛奶样品，加入,225mL,无菌水中，均质制备成,1,：,10,样品溶液。,2,、,用,1,只,1mL,无菌吸量管吸取,1,：,10,样品溶液，用无菌方法各取,1mL,，分别加入到,3,只,LST,肉汤培养基中。,3,、吸取,1mL1,：,10,样品溶液，加入到装有,9mL,无菌试管中摇匀，制备成,1,：,100,样品溶液。,4,、,换,1,只,吸量管各取,1mL1,：,100,溶液，加入到,3,只,LST,肉汤培养基中。,5,、吸取,1mL1,：,100,样品溶液，加入到装有,9mL,无菌试管中摇匀，制备成,1,：,1000,样品溶液。,6,、,换,1,只,支吸量管各取,1mL1,：,1000,溶液，加入到,3,只,LST,肉汤培养基中。,培养,培养基的培养温度设为,37,度，时间,48,小时，设置时间为,2880,分钟,实训步骤,回答问题：,1,、牛奶样品处理的具体步骤是什么？,2,、液体接种操作中，你如何保证接种过程是无菌的？从酒精灯、棉塞、操作手法具体举例。,3,、接种过程中加样的操作有什么要求，才能保证小导管不产气？,实训步骤,任务二：煌绿乳糖胆盐（,BGLB,）培养基制备,配方：,蛋白胨,10.0 g,乳糖,10.0 g,牛胆粉溶液,200,mL,0.1%,煌绿水溶液,13.3,mL,蒸馏水,800,mL,pH 7.20.1,制法：,1,、将蛋白胨、乳糖溶于约,500,mL,蒸馏水中，加入牛胆粉溶液,200,mL,（将,20.0 g,脱水牛胆粉溶于,200,mL,蒸馏水中，调节,pH,至,7.0,7.5,，用蒸馏水稀释到,975,mL,，调节,pH,，再加入,0.1%,煌绿水溶液,13.3,mL,2,、用蒸馏水补足到,1 000,mL,，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管,10,mL,。,121,高压灭菌,15 min,。,