微生物学实验一.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物学实验,微生物学教研室 杨继红,微生物学实验的,的任务,学习研究与应用微生物的主要方法与技术，掌握适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。,与微生物学基础理论课紧密结合，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。,提高学生分析问题和解决问题的能力,。,教学要求,注重微生物学基础实验技能的掌握与提高，克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向；,实验课前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤；,在实验中要有严紧的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象；,树立密切合作的风气，包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密配合。,教学方法,以学生自己动手为主，老师在适当时间予以提示；,对实验中所出现的一些现象多向学生提出问题，使它们学会分析结果，并与理论知识有机结合；,根据实验的进行程度，引导学生更深入思考，逐步树立他们的创新意思；,严格要求使操作技能规范化，老师作示范，强调其要点学生自己练。,实验室制度,1、,每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。,2、认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。,3、实验室内应保持整洁、勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。,4、实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。,5、实验过程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。,6、使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。,7、每次实验完毕后，必须把所用仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐。擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖其上半小时后擦去。如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间：凡带菌之工具(如吸管、玻璃刮捧等)在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒：,8、每次实验需进行培养的材科，应标明自己的组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养：实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外：,9、每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，并连同思考题及时汇交教师批阅：,10、离实验室前应将手洗净，注意关闭门窗、灯、火、煤气等。,教学内容、课时和教学安排,实验,一、,微生物学实验基本操作技术,实验,二、,培养基的制备、,消,毒与灭菌,实验,三、,细菌简单染色法,实验,四、,细菌革兰氏染色法,实验,五、,细菌芽孢染色法,实验,六,：细菌荚膜染色法,实验,七、,放线菌形态观察,实验,八、,酵母菌形态观察及死活细胞的鉴别,实验,九、,酵母菌子囊孢子的观察,实验,十、,霉菌形态观察,实验,十一、,微生物大小的测定,实验十二、显微镜直接计数,实验十三、微生物的分离、纯化与接种培养,实验十四、糖发酵试验,实验十五、光电比浊计数法,实验十六、水中细菌总数的测定,实验十七、化学因素对微生物的影响,成绩考核方面的说明及要求,平时成绩40%；包括：,考勤及课堂纪律,实验预习,实验操作,实验报告及思考题,实验操作考试30%；包括：,实验操作规范程度,实验操作熟练程度,实验结果及实验报告,抽签答题30%。,实验预习,实验课教材内容：,原理,操作步骤,注意事项可能出现的问题及解决方法,理论课教材相关内容,参考书相关内容,实验报告,采用科研论文格式，分成以下几个部分：,原理、目的意义,材料与方法,结果,讨论,实验,一、,微生物学实验基本操作技术,微生物学实验常用仪器、器皿及准备,普通光学显微镜及其使用,基本无菌操作技术,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用仪器,微生物学实验常用的器皿,器皿的种类、要求与应用,玻璃器皿的清洗方法,空玻璃器皿的包装,一、器皿的种类、要求与应用,试管,（,test tube),德汉氏小管（,Durhan,tube）,小塑料离心管（,Eppendorf,tube),吸管或叫移液,管（,pipette),吸气器（,aspirator or pipette aid）,微量移液器或叫加样枪（,micropipette）,培养皿(,dish)三角形烧瓶（,flask）,与烧杯（,beaker）,注射器（,syringe）,和,针头（,needle）,载玻片（,slide）,与盖玻片（,coverslip,）,滴瓶（,dropper bottle）,接种工具(,inoculating tool),玻璃器皿的清洗方法,新玻璃器皿的洗涤方法,在酸溶液内浸泡后洗涤,2.使用过的玻璃器皿的洗涤方法,试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯,玻璃吸管,载玻片与盖玻片,空玻璃器皿的包装（演示）,棉塞的做法,包吸管,包试管：试管口、试管束,包平皿,包三角锥瓶口,显微镜的构造、性能和使用,了解普通显微镜的结构、部件功能和使用方法。,学习油镜的原理并掌握使用方法。,显微镜使用。,显微镜的基本结构,1.,物镜转换器,2.,接物镜,3.,游标卡尺,4.,载物台,5.,聚光器,6.,彩虹光阑,7.,光源,8.,镜座,9.,电源开关,10.,光源滑动变阻器,11.,粗调螺旋,12.,微调螺旋,13.,镜臂,14.,镜筒,15.,目镜,16.,标本移动螺旋,油镜的工作原理,1,、增加照明亮度：,使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。,如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系。,2,、增加显微镜的分辨率：,数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度,(,称镜口角,),的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：,其中,分辨力是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。,式中,=,光波波长,一些物质的折射率：,水,1.33,玻璃,1.52,空气,1.0,香柏油,1.515,显微镜使用,操作步骤,1,、,观察前的准备,仔细阅读显微镜使用说明书,取镜,显微镜的放置,熟悉显微镜，检查显微镜,调节光源,调节双筒显微镜的物镜,调节聚光器数值孔径,2、,显微镜观察：,观察程序如下：,放置观察标本,低倍镜观察,高倍镜观察,油镜观察,3、,显微镜使用完毕后的处理,低倍镜观察,先将标本玻片置于载物台上,(,注意标本朝上,),，并将标本部位处于物镜的正下方、转动粗调螺旋，上升载物台使物镜至距标本约,0.5,厘米处。,双眼看目镜，慢慢旋转粗调节螺旋使载物台缓慢下降，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋，上下微微转动，仔细调节焦距和照明，直至视野内获得清晰的物象，及时确定需进一步观察的部位。,慢慢移动推动器，寻找要观察的部位置于视野中心，准备换高倍镜观察。,高倍镜观察,将高倍物镜转至镜筒下方,(,在转换物镜时，要从侧面注视。以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞,),，调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细反复转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，移动推动器选择最满意的镜检部位，待油镜观察。,油镜观察,用粗调螺旋下降载物台，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。慢慢转动粗调螺旋，上升载物台，并及时从侧面注视使油浸物镜浸入油中，直到几乎与标本接触时为止,(,注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头,),。,左眼看目镜，右手反时针方向微微转动粗调螺旋，下降载物台,(,注意：此时只准下降载物台，不能向上调动,),，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。,3、显微镜使用完毕后的处理,观察完毕，下降载物台，取下标本片。,先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。,用绸布擦净显微镜的金属部件。,将各部分还原，下降聚光镜至最低处，将接物镜转成八字形，再向下旋。罩上镜套，然后放回镜箱中。,基本无菌操作技术（演示）,双手消毒操作,接种环火焰灭菌操作,棉签无菌操作,试管细菌接种和取菌操作,平皿细菌接种和取菌操作,无菌吸取液体操作,无菌倒平板,