热原试验_演示文稿.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,热原检查法,家兔热原试验,每日一话题,试验目的,将一定剂量的供试液,(,医疗产品的萃取液,),，静脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜在的致热作用。,依据方法：,GB/T14233.2-2005,医用输液、输血、注射器具检验方法；中国药典,2010,；,ISO 10993-12:2005GB/T16886.12-2005.,热原试验的应用,热原试验应用于药物及医疗产品的检测（注射器、输液器、输血器、引流管、手术器械等等）,热原概念,热原：引入或释放到机体内后能引起恒温动物体温异常升高的物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。,热原引起机体发热机理,外源性致热原多为大分子物质，特别是细菌内毒素分子量非常大，不能通过血脑屏障直接作用于体温调节中枢，而是通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核一吞噬细胞系统，使其产生并释放内源性致热原，通过下述机制引起发热。,热原引起机体发热机理,热原,白细胞,(WBC),吞噬,白细胞崩解，释放内源性致热源原,作用于,体温调节中枢,产热增加、散热减少,体温上升,实验设备及材料,超净工作台、电热干燥箱、水浴锅、天平、电子称、肛门体温计（仪器设备需经国家相关部门检定）、注射器、三角烧瓶、棉球、家兔固定架、时钟等等。,所用试剂：医用生理盐水、,75%,乙醇、凡士林。,供试液的制备,依据标准：,ISO10993,：,12,（,GB/T16886.12,）,按,0.2g,:1ml,（样品,:,生理盐水）的比例进行萃取，条件为,37,1,，时间为,721,小时。萃取液应在,2,小时内使用完毕。,试验家兔饲养环境,1,在做热原检查前,12,日，供试用家兔 应处于同一温度环境中；,2,实验室和饲养室的温度相差不得大于,3,，实验室的温度应控制在,1725,；,3,在试验全部过程中，应注意室温的温度变化不得大于,3,，防止动物骚动并避免噪声干扰。,试验家兔的选择,1.,未曾用于热原检查的家兔；,2.,或供试品判定为符合规定，但组内升温达,0.6,的家兔；,3.,或,3,周内未使用的家兔，均应在检查供试品前,37,日内预测体温，进行挑选,。,挑选试验用家兔的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔,30,分钟测量体温,1,次，共测,8,次，,8,次体温均在,38.039.6,的范围内，且最高与最低相差不超过,0.4,的家兔，方可供热原检查用。,试验家兔的选择,家兔应健康，雌雄不限，体重,1.7kg,以上,，雌兔应无孕。预测体温前,7,日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象,(,科学饲养,),。,用于热原试验后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息,48,小时方可再本试验用，其中体温升高,0.6,以上的家兔，至少休息两周后以上。,如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。,每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过,10,次。,试验家兔的选择,（一）,家兔在试验前至少,1,小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直到试验完毕。应使用精密度为,0.1,的测温装置测量家兔体温。测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约,6cm,，时间不少于,15,分钟，每隔,30,分钟测量体温,1,次，一般测量,2,次,，两次体温之差不得超过,0.2,.,试验前家兔的准备,试验前,家兔,的准备,（二）,以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在,38.039.6,的范围内，且各兔间的正常体温之差不得超过,1.,试验前器械的准备,注射器（带针头）及一切与供试品溶液接触的器皿应是无菌、无热原，如试管等应采用干热灭菌法置烘箱中用,250,加热至少,30,分钟，也可用其他适宜的方法除去热原。,试验方法,取适用的家兔,3,只，测定其正常体温后,15,分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量,(,10ml/kg,),并温热至约,38,的供试品溶液，然后每隔,30,分钟按前法测量其体温,1,次，共测,6,次，以,6,次体温中,最高的一次,减去,正常体温,，即为该兔体温的升高温度。,试验方法,如,3,只家兔中有,1,只体温升高了,0.6,或,0.6,以上，或,3,只家兔体温升高均低于,0.6,，但体温升高的总和达,1.3,或,1.3,以上，应另取,5,只家兔复试，检查方法同上。,结果判断,在初试的,3,只家兔中，体温升高均低于,0.6,，并且,3,只家兔体温升高总和低于,1.3,；或在复试的,5,只家兔中，体温升高,0.6,或,0.6,以上的家兔不超过,1,只，并且初试、复试合并,8,只家兔的体温升高总和为,3.5,或,3.5,以下，均判为供试品的热原检查符合规定。,结果判断,在初试的,3,只家兔中，体温升高,0.6,或,0.6,以上的家兔超过,1,只；或在复试的,5,只家兔中，体温升高,0.6,或,0.6,以上的家兔超过,1,只；或在初试、复试合并,8,只家兔的体温升高总和超过,3.5,，均判为供试品的热原检查不符合规定,当家兔体温升高为负值时，均以,0,计。,展望,检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性。,家兔法检测内毒素的灵敏度为,0.001g/ml,试验结果接近人体真实情况，但操作繁琐费时，不能用于注射剂生产过程中的质量监控，且不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性药物制剂。,注意事项,（,1,）试验室内保持,安静,，避免强烈直射阳光、灯光等刺激。,（,2,）试验过程中避免家兔,骚动,，保持体温稳定。（,3,）试验室、饲养室温度及其变化应符合要求。（,4,）试验过程中不得随意更换肛门体温计。,记录表格,编号,体重（,kg,）,试验前体温,(),试验后体温,(),体温上升,(),1,2,X,1,2,3,4,5,6,1,2.0,2,2.3,3,1.8,