尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验十二 铅作业人群的健康监护,训练二 尿中氨基酮戊酸(ALA)的测定,临床意义,铅吸收或铅中毒时，尿中,-,氨基,-,酮戊酸（,-ALA,）的含量增高，故测定尿中,-ALA,的含量，有助于了解铅吸收和铅中毒的诊断。,特异性，灵敏性均较差,尿中氨基酮戊酸(ALA)的测定,乙酸乙酯萃取,对二氨基苯甲醛基比色法,尿中,-ALA+,乙酰乙酸乙酯 吡咯化合物,（经乙酸乙酯提取）,+,显色剂（对二甲氨基苯甲醛,),红色化合物,原理,100,PH=4.6,分光光度计；,水浴锅，,电炉；,离心机,(1500-2000r/min),；,具塞比色管,10m1 20,支；,移液管,2m1 1,支；,吸管,10m1 4,支、,5m1 1,支、,2m1 2,支；,离心管,10m1 10,支。,仪器：,乙酰乙酸乙酯；,乙酸乙酯；,醋酸盐缓冲液；,对,二甲氨基苯甲醛显色剂,；,ALA,标准溶液；,试剂：,标准色列制备与标准曲线绘制,尿样测定：测定前须用比重计测定尿比重,分析步骤：,试剂,管号,0,1,2,3,4,5,样品管,空白管,ALA,标液（,ml,）,0.0,0.1,0.3,0.5,0.7,1.0,尿样,1.0,尿样,1.0,蒸馏水（,ml,）,2.0,1.9,1.7,1.5,1.3,1.0,1.0,1.0,乙酸缓冲液（,ml,）,2.0,乙酰乙酸乙酯（,ml,）,0.4,乙酸缓冲液,0.4,混匀，沸水中加热,10,分钟，冷却至室温,乙酸乙酯（,ml,）,4.0,加塞振摇,1,分钟，静置分层,离心,5,分钟,提出液,2ml,于另具赛比色管中，加,2ml,显色剂，加塞振摇，静置,10,分钟,分光光度计，波长,554nm,，,零管参比,乙酸乙酯参比,1,标准曲线的绘制,2,样品管吸光度减去尿样空白管吸光度，查标准曲线得样品管中,ALA,含量,(,g,),3,计算公式：,（,1,）尿样比重,在正常范围（,1.010-1.035,）内,尿中,ALA(mg,L)=,样品管中,ALA,含量,(,g,),（,2,）尿样比重,不在正常范围内,尿中,ALA(mmo1,L)=,0.0076,计算,样品管含量（,g,）,1,（尿样）,1.020-1.000,尿比重,-1.000,乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯最好为近期产品。显色剂宜新鲜配制。,加入显色剂后，静置,10,分钟，应在半小时内完成比色。,尿样易腐败，可导致,pH,增高，影响测定结果。如不能及时测定，应将尿样保存在冰箱中。,乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯最好近期产品，显色剂宜新鲜配制,参比液有两种：标准色列：零管,样品管：乙酸乙酯,注意事项：,