氯化胆碱测定之原理与方法.ppt

按一下以編輯母片標題樣式,按一下以編輯母片文字樣式,第二層,第三層,第四層,第五層,*,*,氯化胆碱测定之原理与方法,大纲,氯化胆碱之简介,含量测定方法介绍,过氯酸无水滴定法,银量,法,凯氏定氮法,四苯硼钠重量法,雷氏盐重量法,离子层析,法,简介,属于水溶性维生素,B,群,(Vitamin B,4,),因幼畜自身尚无合成胆碱的功能，体内所需胆碱全部依赖外界供给,胆碱最早于,1940,年由猪胆汁中被分离出来,胆碱是生物体代谢的中间产物，它常以氯化物等盐的形式存在,简介,主要的胆碱盐有氯化胆碱,(,choline chloride,),、氯化琥珀胆碱,(,succinyl choline chloride,),、溴化氨酰胆碱,(,hexabiscarbacholine,),、氯化乙酰胆碱,(,acetylcholine chloride),、磷酰胆碱,(,phosphorylcholine),、氯化氨甲酰胆碱,(,bethanechol chloride,),等，以氯化胆碱最常做为饲料添加剂,简介,1 mg choline chloride=0.87 mg choline,分子式：,HOCH,2,CH,2,N(CH,3,),3,Cl,CAS No,：,67-48-1,分子量：,139.63,CA name,：,2-hydroxy-N,N,N-trimethylethanaminium chloride,胆碱之生理作用,磷脂质,(,phospholipids),成份之一,增进脂质传递及细胞建构,合成乙酰胆碱,(,acetylcholine,;,神经传导物,neurotransmitter),之前驱物,(,precursor),参与动物体内的甲基化反应，是重要的甲基供给体,氯化胆碱之制备,环氧己烷法,三,甲胺,(trimethylamine,),与环氧己烷,(,ethylene oxide,),反应,生成液体氯化胆碱,方法简单，成本低质量好，但设备要求耐酸耐腐蚀,氯乙醇法,三甲胺、氯乙醇,(chloroethanol,),与水加热反应,生成晶体氯化胆碱,氯化胆碱质量优劣以三甲胺残留来衡量,粉末状氯化胆碱是以液体状态均匀浸渍在载体，再经干燥除水而成,载体种类：,农产副产品：小麦麸皮、玉米芯粉、玉米杆粉、稻壳粉、花生壳粉、薯类淀粉渣,天然矿物：沸土、膨泣土、海泡石、膨化珍珠岩,人工合成化合物：二氧化硅、水合硅酸,氯化胆碱对其他维生素有破坏作用，特别是有金属元素存在时，对,Vitamin,A,、,D,、,K,的破坏较快，因此在复方制剂中不建议加入胆碱,添加氯化胆碱后之补助饲料应尽快使用,氯化胆碱含量测定,过氯酸无水滴定法,氯化胆碱与醋酸汞反应，氯化胆碱转化为醋酸盐和难电离的氯化汞，在醋酸中以高氯酸对生成的醋酸盐进行滴定,称取,80,下干燥,3h,的样品,0.7g,于,250mL,三角瓶中，加,40mL,甲醇，充分摇动,30min,后过滤，再分别用,20mL,、,15mL,、,15mL,甲醇洗涤沉淀,3,次，将滤液和洗液合并，在水浴上蒸发至干，以,20mL,冰醋酸溶解后，加,2mL,醋酸酐，,10mL,醋酸汞和两滴结晶紫指示剂，用,0.1M,过氯酸溶液滴定至蓝色，同时做空白,X,（,V,V0,）,C0.1396/M100,C:,高氯酸标准溶液实际浓度,(,M),V:,消耗高氯酸标准溶液体积,(,ml),V0:,空白试验消耗硝酸银标准溶液体积,(,ml),M:,检品质量,(,g),0.1396:,氯化胆碱莫耳质量,(,g/m mol),银量法,分析检品中氯含量来确定氯化胆碱的含量,称取,0.5g,样品于,250mL,定量瓶中，加,50mL,水摇匀后，加,0.5mL,铬酸钾，用,0.1M,硝酸银溶液滴定至砖红色，同时做空白,C,（,V,V 0,）,0.1396/,（,M50/100,）,100,C:,硝酸银标准溶液的实际浓度,(,M),V:,消耗硝酸银标准溶液体积,(,ml),V0:,空白试验消耗硝酸银标准溶液体积,(,ml),M:,检品质量,(,g),0.1396:,氯化胆碱莫耳质量,(,g/m mol),凯氏定氮法,称取样品,1g,左右于带有白色定性滤纸的漏斗中，用水冲洗,10,次左右，取出滤纸烘干，以凯氏定氮法测定含氮量,N,1,，同时称,0.5g0.6g,直接测定含氮量,N,2,。,氯化胆碱含量,=,（,N,2,-N,1,）,/10.03 100%,四苯硼钠,(,Sodium tetraphenylboron),重量法,称取样品约,1g,于,100mL,容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，过滤，精确量取滤液,10mL,于,100mL,烧杯中，加,20mL,水，一滴,AlCl,3,三氯化铝（,10,），,20mL,四苯硼钠（四苯硼钠,C,24,H,20,BNa,2g,加水溶解稀释至,100mL,，加,2,滴,0.5M,NaOH,摇匀放置,24h,，过滤，可保存,5,天），不断振摇,30min,，用预先烘干称重坩埚过滤，水洗烧杯,4,次每次,10mL,左右，并将滤液一并过滤，将沉淀在,105,烘干,2h,，取出放入干燥器内冷却，称重。,氯化胆碱含量,=,沉淀质量,(,g)0.3298100,/,样品质量,(,g)10,1g,沉淀,=0.3298g,氯化胆碱。,雷氏盐,(,二氨基四硫代氰酸铬铵,;,Reinecke salt),重量法,试液中氯化胆碱与雷氏盐,(,二氨基四硫代氰酸铬铵,),反应，形成结晶沉淀，用重量法测定氯化胆碱含量,W,2,(m 2-m 1)/m,100.33045100,m 2:,沉淀,(,g),m 1:,空白试验沉淀,(,g),m:,检品,(,g),0.33045:,氯化胆碱分子量与沉淀物分子比值,10样品溶液稀释倍数,The Council on Pharmacy and Chemistry of,American Medical Association(AMA),离子层析法（,Ion,Chromatography,）,利用离子交换原理将带有不同电荷、离子半径和结构等有差异的离子分离,测定胆碱离子,测定方法之盲点,不肖厂商为获取高额利润，于产品中掺假以降低成本。,利用检测方法之非特异性，掺入在标准规定条件下亦能发生此反应且现象基本相同的物质，以致无法正确反映出氯化胆碱的真实含量。,根据氯化胆碱的分子式,C,5,H,14,NClO,（分子量：,139,63,），纯氯化胆碱氮含量为,10氯含量为,25.4,常见掺假物：三甲胺盐酸盐,(,trimethyl amine hydrochloride;C,3,H,10,NCl ),、氯化铵,(,ammonium chloride;NH,4,Cl),、氯化钠,(,sodium chloride;NaCl),、氯化钾,(,potassium chloride;KCl),、硝酸盐,(,nitrate,),、亚硝酸盐,(,nitrite),、尿素,(urea),、脲醛聚合物,(ureaformaldehyde polymer),过氯酸无水滴定法,氯化铵、氯化钠、氯化钾、三甲胺盐酸盐等也能与过氯酸反应，所以该检测方法对氯化胆碱不具特异性,在合成氯化胆碱过程中，其中间产物三甲胺盐酸盐的残留量每多,1,，用此法测定时，所测得之氯化胆碱含量就会多,1.4,银量法,由于该方法测定的是氯离子，可溶性氯化物或三甲胺盐酸盐均会使测定结果偏高,凯氏定氮法,凯氏法所测得的氮含量并不全是氯化胆碱中所含氮，还有其他物质所含的氮,含有硝酸盐，亚硝酸盐，尿素，脲醛聚合物等含氮化合物，均会使检测结果偏高,四苯硼钠重量法,Pb,2+,、,Ag,+,、钾盐、铵盐、有机胺、生物碱及其他四级胺盐类化合物均能与四苯硼钠生成沉淀而干扰测定，使结果偏高,雷氏盐,Reinecke salt,（二氨基四硫代氰酸铬铵）,重量法,环六次甲基四胺,(,hexamethylene tetramine,),不会被碱分解，能与雷氏盐反应生成粉红色沉淀，使测定结果偏高,采用酸碱水解雷氏盐重量法测定,即先将样品加,2M,硫酸溶液,10mL,煮沸,30min,，使环六次甲基四胺分解后，再加碱煮沸去氨，在,pH6,左右与雷氏盐反应，形成的粉红色沉淀用重量法即可检测出氯化胆碱的含量,离子层析法（,Ion,Chromatography,）,可能有不同化合物与氯化胆碱有同样或相近滞留时间,结论,多重测试方法以确定含量,离子层析法是未来趋势,