1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,目 录,第 二 十 一 章,基因诊断与基因治疗,Genetic Diagnosis and Gene Therapy,基因变异致病类型,内源基因的变异,基因结构突变,基因表达异常,外源基因的入侵,第 一 节 基 因 诊 断,Genetic Diagnosis,特点,针对性强,特异性强,灵敏度高,适应性强,一、基因诊断的概念和特点,定义,利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。,二、基因诊断常用技术方法,限制性内切酶谱分析法,DNA,限制性
2、长度多态性,(,restriction fragment length polymorphism,RF,L,P,),分析,等位基因特异寡核苷酸探针,(,allele specific,oligonucleotide,ASO),（一）核酸分子杂交技术,（二）聚合酶链反应,(PCR),（,三）基因测序,（四）基因芯片,Mst,酶切位点,(GCTNAGG),5,3,正常基因,5,3,突变基因,1.15kb,1.35kb,镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析,+,0.2kb,1.15kb,1.35kb,正常人,突变携带着,患者,镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析,RFLP,分析法,PCR/,
3、单链构象多态性分析,(single strand conformation polymorphism,SSCP),PCR,产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。,正常人,纯合突变,杂合突变,Leber,病,患者,PCR/SSCP,分析,+,三、基因诊断的应用,遗传疾病,肿瘤,感染性疾病，传染性流行病,判断个体疾病易感性,器官移植组织配型,法医学中个体识别、亲子鉴定,第 二 节 基 因 治 疗,Gene Therapy,定义,早期,是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。,目前,广义上来讲是指将某种遗传物质
4、转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。,一、基因治疗的概念,基因治疗的基本方法,基因矫正,(,gene correction,),基因置换,(,gene replacement,),基因增补,(,gene augmentation,),基因失活,(,gene inactivation,),几种常见的基因失活技术,反义核酸技术,核酶技术,三链技术,干扰,RNA（,RNAi,）,技术,基因治疗的其他方法：,如“自杀基因”的应用，基因疫苗等,干扰,RNA,技术的特点,干扰因子前身为,dsRNA,而不是,ssRNA,，,因而不易降解；,序列特异性抑制,mRNA,和蛋白质的表达
5、只有效作用于外显子，而对内含子无影响；,具有高效性、长期性（可影响下两代）；,可通过细胞屏障而发挥作用。,基因疫苗的特点和原理,基因疫苗主要指,DNA,疫苗；,毒副作用低，易操作，易储存，价格低；,主要原理：将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中持续表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。,二、基因治疗的基本程序,治疗性基因的选择,基因载体的,选择,靶细胞的选择,基因转移,外源基因表达的筛检,利用在体中的标记基因,回输体内,病毒载体,非病毒载体,体细胞,生殖细胞,间接体内疗法,直接体内疗法,三、基因治疗的应用与展望,应用,展望,遗传性疾病、心血管疾病、肿瘤、感染性疾病、神经系统疾病,进一步寻找切实有效的基因,精密调控外源基因在人体内的表达,体细胞移植和重建的生物学研究,减少外源基因对机体的不利影响,基因治疗病种必须符合的条件,已经在,DNA,水平上明确了该病为单基因缺陷疾病；,仅限于体细胞的基因治疗；,基因治疗的靶细胞可以从病人机体获取、培养，并进行遗传操作后，再回输患者体内；,治疗效果必须胜过对病人的危害；,表达水平无需严格调控即可使疾病得以改善且无副作用；,人体基因治疗计划必须经过动物实验证明符合严格,的标准。,
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