水环境监测中的细菌及浮游生物指标省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptx

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,水环境监测中细菌和浮游生物指标,09海科（2）班 缪国培,以,丹江口水库细菌和浮游生物监测及评价,为例,申明：本文全部内容为论文原作者全部,第1页,目录,论文背景,材料与方法,结果与分析,结果与提议,第2页,1.论文背景,1.1丹江口水库介绍,丹江口水库是我国水资源调整重大工程南水北调中线工程水源地，为亚洲最大淡水湖，是江汉丹江两大水系主要控制性工程，这两条河流也是水库主要入库河流，因其水量大，自净能力强，水质很好，致使丹江口水库水准优良。但伴随库区周围地域经济深入发展，因为自然原因以及人为原因使入库干、支流水质发生改变,必将影响丹江水库水质。,第3页,1.论文背景,1.2 研究目标和意义,南水北调中线工程对丹江口水库水质要求不但是现在水质优良,而且主要是要保持长久稳定优良。所以,做好水源区长久生态监测,可为建立中线水源区长久生态研究数据信息库及库区生态环境,保护政策制订提供科学依据。依据文件资料,还未见有从细菌学和浮游生物对丹江口水库进行监测研究报道。本研究依据生态学理论于 年春(3 月)、夏(5 月)两季对南水北调中线水源区陶岔(渠首)、小太平洋(丹江水库库心)和大石桥(丹江入库上游)3 个点水质进行了细菌和浮游生物监测,并结合理化检测以期对中线水源水质做出科学评价。,第4页,2.材料与方法,2.1 材料,2.1.1 培养基 乳糖蛋白胨培养液、三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液、半固体培养基、EC 培养基等。营养琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基(EMB)、三糖铁琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、TCBS 琼脂培养基、S S 琼脂培养基等购自哈尔滨海峡医药有限企业。,2.1.2 检验试剂 吕氏碱性美兰溶液、革兰氏染液、孔雀绿染液、福尔马林固定液等。,第5页,2.材料与方法,2.2 试验方法,1.2.1 水样采集 在陶岔、小太平洋、大石桥设3 个点(总站授权南阳市环境保护监测站检测点),按水样采集标准采集无菌水样、生物检测样和理化检测样。现场测定水温(t)、溶解氧(DO)、pH 等部分常规检测项目。渠首陶岔水质理化检测由在渠首设自动监测仪测定(同时也进行人工测定)。其它两个点水温、pH、DO、电导率(EC)由便携式仪器测定。,透明度,采取,塞氏盘法,测定,第6页,回顾一下,塞氏盘法与透明度,：塞氏盘法是一个现场测定透明度方法。塞氏盘为直径200mm白铁片圆板，板面从中心平分为四个部分，黑白相间，中心穿一带铅锤铅丝，上面记一用cm标识细绳。,测定时，将塞氏盘平放入水中，逐步下沉，到刚好看不到盘面白色时，统计深度（cm），即为水透明度。,第7页,2.2 试验方法,2.2.2 细菌检测,2.2.2.1 细菌总数测定,采取,稀释平板法。,将水样作10 倍系列稀释,取原液、10,-1,、1 0,-2,稀释液1 mL 置无菌平板内,倾注15 mL 左右营养琼脂培养基,混匀、待凝后于37,C 培养24 2 h,统计平板上菌落数,换算出菌总数。,第8页,回顾一下：细菌平板分离与纯化,稀释涂布平板法：优点：能够计数，能够观察菌落特征。缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，轻易蔓延。普通用于平板培养基回收率计数。惯用于分离好养细菌。稀释混合平板法（本试验即采取此法）：优点：能够计数，吸收量为1ml，较方便。优点：不能观察菌落特征。普通用于菌落总数计数（即本试验所要到达目标）。惯用于分离兼性厌氧细菌。平板划线法：优点：能够观察菌落特征，对混合菌进行分离.缺点：不能计数普通用于从菌种分纯.,第9页,了解：细菌检测方法原理,据海洋生态环境监测技术规程：,大肠菌群系一群在37或44生长时能使乳糖发酵、在24h内产酸产气需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群数系指单位生物样中所含有“大肠菌群”数目。普通在37培养生长称为“,总大肠菌群,”，在44培养生长称为“粪大肠菌群”。海洋生物检验采取44培养法，以检出,粪大肠菌群（即耐热大肠杆菌）,。,发酵法系经过初发酵及复发酵二个步骤，以证实生物体中是否存在粪大肠菌群并测定其数目。,第10页,知识拓展,大肠杆菌,（细胞学分类）：,原核生物界-变形菌门-,变形菌纲-肠杆菌目-肠杆菌科-埃希氏菌属-大肠杆菌种,大肠菌群,并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指是含有一些特征一组与粪便污染相关细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气革兰氏阴性无芽胞杆菌。普通认为该菌群细菌可包含大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。,大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动场所以及有粪便污染地方，人、畜粪便对外界环境污染是大肠菌群在自然界存在主要原因。粪便中多以经典大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其它型别较多,第11页,。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来，主要是以该菌 群检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数高低，表明了粪便污染程度，也反应了对人体健康危害性大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者粪便，所以粪便内除普通正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则能够推测该食品中存在着肠道致病菌污染可能性，潜伏着食物中毒和流行病威胁，必须看作对人体健康含有潜在危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量主要指标之一，当前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。,第12页,2.2.2,细菌检测,2.2.2.2 总大肠菌群数测定,采取多管发酵法(MPN 法)。,(1)稀释水样:以无菌操作取水样10 mL 放于含有90 mL 灭菌生理盐水玻璃瓶内,经充分振摇做成1,10 均匀稀释液。,(2)乳糖发酵试验:无菌操作水样10 mL 接种于各装有5 mL 3 倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(内有导管)5 支;另取1.0 mL、0.1 mL 水样分别接种于各装有10 mL 乳糖蛋白胨发酵管(内有导管)各5支,接种后置37摄氏度 温箱内培养24 h 后观察结果。,第13页,2.2.2.2 总大肠菌群数测定,（3）平板分离:发酵管颜色变黄为产酸,杜氏小管内有气泡为产气。将产酸产气及只产酸发酵管分别转种到EMB（伊红美兰琼脂培养基）上,37 摄氏度培养24 h 观察菌落。挑取符合以下特征菌落进行革兰氏染色、镜检菌体形态。特征性菌落性状为:深紫黑色,含有金属光泽菌落;紫黑色,不带或略带金属光泽菌落;淡紫红色,中心色较深菌落。,第14页,2.2.2.2 总大肠菌群数测定,（4）复发酵试验：上述涂片镜检菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取该菌落接种于乳糖发酵管,于37 摄氏度培养24h。如有产酸产气者,即证实有大肠菌群存在。,（5）结果计算：依据证实为大肠菌群阳性管数,查MPN 检索表,并换算出大肠菌群最近似数(MPN 值)。,第15页,2.2.2.3粪大肠菌群数测定,采取多管发酵法(MPN 法)。(1)、(2)、(4)步骤同总大肠菌群数测定,(3)复发酵试验:将产酸产气或只产酸试管内培养液用3 mm 接种环取一环接种于EC 培养基内,接种后全部发酵管必须在30 min 内于44.5,0.5 水浴培养24 h(水浴箱水面应高于试管中培养基液面)。培养后马上观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。,第16页,2.2.3 浮游生物判定,将加有5%固定液水样用滤器抽滤、浓缩,取浓缩水样在普通显微镜下判定,初步将浮游生物判定到属或种。,第17页,3.结果与分析(,3.1细菌结果分析,),3.1 丹江口水库细菌监测结果,污染指数评价表,细菌总数 CFU/mL,10,6,10,5,10,6,10,2,10,5,大石桥 陶岔,小太平洋水质符合类水标准,可与天然矿泉水相媲美。,第19页,2.2 丹江口水库浮游生物检测结果,第20页,第21页,3.2 结果分析（浮游生物角度）,陶岔水样中浮游植物为裸藻门、硅藻门和绿藻门,其中硅藻为优势种;,小太平洋水样中浮游植物为硅藻门和绿藻门,其中硅藻为优势种;,大石桥水样中有硅藻门和绿藻门,其中硅藻为优势种。,总而言之：从浮游生物检测结果可知:水源区未检出污染指示种,但水库处于中营养状态。,第22页,4.结论与提议,丹江口水库各检测水样中已分离纯化细菌经初步判定多为肠杆菌,尚,未发觉病原微生物存在,;原生动物有2 属2 种,浮游植物共有4 门17 属26 种,还有1 种浮游植物未能做出判定;在检出浮游生物中,没有水体污指示种,但丹江口水库水质为中营养状态。所以结合常规理化检测综合评价,当前丹江水库水质良好,是理想水源地。,第23页,水库水体富营养化程度与营养物质、气候条件、水库水化学性质和生物性质、水库调度方式、气候条件等各种原因有亲密联络。从检测结果可知,丹江口水库水域生态系统当前自,净能力比较强,富营养化程度较低,。不过要确保京、津等供水区居民健康、工农业高速发展和库区经济连续发展,对丹江口水库各干流和建设中调水渠进行流域生态工程规划已是当务之事,其中加紧主干流、库区生态林、生态农业及生态工业建设和对将建成渠道进行生态景观廊道布局设计是关键;另外,水源地豫、鄂、陕三省及沿渠省市应协调共管并建立一套完善水污染防治体系,以,控制污染源,为主营养化防治办法,充分发挥水利工程调度优势,方便有效防治水质污染和水体富营养化发生,保护好调水水质,以实现社会、经济、生态可连续发展。,第24页,谢谢观赏,09海科2班 缪国培,2113310044,第25页,