课题1、菊花的组织培养.ppt

专题,3,植物组织培养技术,课题,1,、菊花的组织培养,组织培养,营养繁殖,在初中的生物学习中，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？,扦插,嫁接,压条,扦插,嫁接,压条,压条,植物组织培养简介,植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广泛进行组织培养。,是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。,组织培养,一、植物组织培养的基本过程,植物组织培养的原理是什么？,植物细胞具有全能性，即已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。,思考,植物组织培养,细胞离体,必要条件：,一定的营养物质、激素和其他外界条件,原理,:,细胞的全能性,从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官,外植体,:,离体的植物器官、组织、细胞,愈伤组织,再分化,根,芽,植物体,植物组织培养的基本过程,外植体,脱分化,植物体,外植体,愈伤组织,二、影响植物组织培养的因素,不同植物的组织培养难度不同,同一种植物的不同组织培养难度不同,1.,外植体的选取,大量元素：,C,、,H,、,O,、,N,、,P,、,K,、,Ca,、,Mg,、,S,微量元素：,B,、,Mn,、,Cu,、,Zn,、,FeMo,、,I,、,Co,有机物：,甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等,植物激素：,生长素、细胞分裂素、赤霉素等,2.,培养基的配制,(MS,培养基,),MS,固体培养基成分及比例,微生物培养基以有机营养为主。,与微生物的培养不同，MS 培养基则,需提供大量无机营养，无机盐混合物,包括植物生长必须的大量元素和微量,元素两大类。,阅读课文，思考以下问题,同微生物培养基相比，,MS,培养基的配方有哪些明显的不同？,使用顺序,实验结果,先使用生长素，后使用细胞分裂素,先使用细胞分裂素，后使用生长素,同时使用,有利于细胞分裂，但细胞不分化,细胞既分裂也分化,分化频率提高,3.,植物激素,低：,利于芽的分化，抑制根的形成,适中：,促进愈伤组织的生长,高：,利于根的分化，抑制芽的形成,生长素,/,细胞分裂素,3.,植物激素,高 利于根的分化，抑制芽 的形成,适中 促进愈伤组织的生长,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？,生长素,/,细胞分裂素,植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为微生物提供了适合的营养。在这种培养基上，微生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们生长、繁殖得更快，而且会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。,4.,消毒,在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：,菊花：,pH=5.8,温度控制在18 22,每日光照12h,5.pH,、温度、光照,制备,MS,固体培养基,外植体消毒,接种,培养,栽培,移栽,冲洗,酒精,无菌水冲洗,氯化汞,无菌水冲洗至少三次之上,三、实验操作,此时的组织或细胞是离体的，不能体现其整个植物体的光能自养,细胞所生活的环境必需是液体有机物的营养环境。,1.,高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？,思 考,培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程。,2.,培养过程中为什么需要进行光照？,思 考,思 考,培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）,外植体的消毒（酒精、氯化汞）,接种时无菌操作（酒精、酒精灯,灼烧）,无菌箱中培养；,移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,3.,在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,植物组织培养过程示意图,上面的示意图中还有什么地方不够完善的？,没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。,结果分析与评价,指在组织培养过程中，培养容器内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育，从而导致培养失败的现象。,一、污染的定义,二、污染原因,1.,细菌污染：,菌斑呈粘液状，界限比较明显，一般接种后,1,2,天即能发现。主要是大肠杆菌和链球菌,2.,真菌污染：,菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子。接种后,3,10,天才能发现。主要是霉菌污染。,正常苗,污染苗,1.,外植体带菌,2.,培养基及接种器具灭菌不彻底,3.,接种操作时带入,4.,环境不清洁,三、污染途径,（一）防止外植体带菌,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,（三）操作人员严格遵守无菌操作规程,（四）保证接种与培养环境清洁,四、污染的预防措施,（一）防止外植体带菌,1.,选择好外植体采集时期和采集部位,外植体采集以春秋为宜,优先选择地上部分作为外植体,阴雨天勿采，晴天下午采,采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋,2.,室内或无菌条件下进行预培养,（一）防止外植体带菌,3.,外植体消毒,（一）防止外植体带菌,1.,分装时，注射器勿与瓶接触，培养基勿粘瓶口,2.,检查封口膜是否有破损,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,3.,扎瓶口要位置适当、松紧适宜,4.,保证灭菌时间和高压灭菌锅内温度,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,5.,接种工具用前彻底灭菌,6.,工作服、口罩、帽子等布质品定期进行湿热灭菌,（四）保证环境的清洁,1.,污染瓶经高压灭菌后再清洁,2.,接种环境定期熏蒸消毒、紫外灯照射或用臭氧灭菌和消毒,3.,定期对培养室消毒、防止高温,(1),快速。,常规的方法一棵花卉一年一般只能生产几株或几十株，但用组织培养的方法则每年可以繁殖出几万甚至数百万的小植株。,(2),全年生产。,花卉组织培养是在实验室中进行，因条件可控，所以不受季节限制，可以全年进行连续生产。而常规的无性繁殖则受季节限制，只能在花卉生长季节进行繁殖。,组织培养优点,(3),经济效益高。,花卉组织培养快速繁殖所需要的空间小，在一个,200,平方米的培养室内一年可生产试管苗上百万株。,(4),繁殖的种苗与母株有相同的遗传基因。,可让优良的品种不断地延续。,1.,在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？,植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。,外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。,2.,在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？,