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中国科技期刊数据库 医药 34 粪便微生物检验在临床诊断腹泻中的应用价值 张 彭 内蒙古自治区乌兰察布市疾病预防控制中心，内蒙古 乌兰察 012000 摘要：摘要：目的 分析粪便微生物检验在临床诊断腹泻中的应用价值。方法 2020 年2022 年本市主动监测哨点医院764 例以腹泻为主诉的就诊病例信息及患者粪便或肛拭子标本做病原微生物检验，观察比较其中的病原微生物检出率，并进行结果分析。结果 经过对所有粪便样本进行病原微生物检验后，764 份腹泻患者标本中共检出病原微生物 97份，总的阳性检出率 12.69%，其中细菌检出39份，细菌阳性率 5.10%；病毒检出 58份，病毒阳性率7.59%；其中细菌感染菌株分布情况：沙门氏菌共检出 37 份，检出率 4.84%；志贺氏菌 2 份，占比 0.26%；病毒全部为诺如病毒；对其检出率进行统计分析显示，沙门氏菌和志贺氏菌感染检出率的差异有统计学意义（P0.05）。沙门氏菌是造成本地感染性腹泻病例的优势菌。结论 研究得出，粪便微生物检验在临床诊断腹泻中具有一定意义，为临床诊断腹泻提供相应参考依据。关键词：关键词：粪便微生物检验；腹泻；应用价值 中图分类号：中图分类号：R72 0 引言 腹泻是常见的一种病症，引起腹泻的因素有多种，比如感染、疾病、食用了不健康的食物等，临床根据发病时间将病程较长的患者划为慢性，相反较短者为慢性。这两种腹泻的临床表现存在显著区别，一般从发病到腹泻出现时间不超过 21 天者，且每天排便次数不少于 10 次，便可诊断为急性，这类患者通常还有疼痛的表现，以腹痛为主，而慢性腹泻一般发病至症状出现时间小于 4 周。其次，根据感染性疾病诊断标准，腹泻还可分为感染与非感染两种类型，病菌是主要感染因素，具有可传播的特征，影响周边其他民众健康与安全。而慢性腹泻的原因复杂，多为非感染性2。急性腹泻属于临床急诊中的常见疾病，其发病率高、起病急，发展快，造成后果严重，特别对是患儿的严重伤害，如不及时诊断，以免使急性腹泻转变为迁延性和慢性腹泻耽误病情，错过最佳治疗机会3。急性腹泻中急性感染性腹泻发病率最高，严重影响人们健康，急性腹泻多由病原体引起，病原微生物检测在临床诊断腹泻中的应用价值尤为重要4。相关研究发现，有不洁饮食史，尤其是有进食动物源性食物，如肉类、动物内脏、蛋类、乳类及其制品等的病史，在临床表现方面，患者一般症状会出现在进食后的一到两天，主要表现为突然出现的发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等急性胃肠炎表现。为掌握本地区临床腹泻病人的感染情况，基于此，本研究以 2020 年 1 月至 2022 年 12 月中心收到主动监测哨点医院腹泻患者粪便标本做病原微生物检验，探讨临床腹泻患者病原微生物感染情况及分布，为食源性疾病防控措施提供依据，为临床诊断腹泻提供一定的指导依据，现报道如下。1 资料与方法 1.1 一般资料 本次研究选取本市两个哨点医院 2020 年 1 月至2022 年 12 月送来我中心 764 份腹泻患者的粪便标本；患者年龄 3 个月97 岁；男性 433 例，女性 331 例；样本纳入标准：符合临床消化道疾病与腹泻相关诊断标准；患者排便次数每天大于 3 次，颜色以及性状的改变。排除标准：高血压者；有感染性疾病者；糖尿病者；严重器官功能障碍；临床资料不完善者。1.2 方法 1.2.1 标本的采集 确保有清洁的容器，如塑料或玻璃容器，具备密封功能。准备清洁手套和口罩，以及卫生纸或尿不湿等辅助物品（如果需要）。收集样本：在使用前，确保容器没有明显的污垢或残留物，并进行清洁消毒。若需要，使用卫生纸或尿不湿等辅助物品将对应数量的粪便样本取出，并放入容器中。一般来说，需要采集约 2-3 勺粪便样本，尽量收集新鲜样本，避免将尿液、中国科技期刊数据库 医药 35 水或其他杂质掺入样本中。容器密封和标记：将容器密封，并确保密封良好，以防止样本泄漏。使用标签或标记笔在容器上写上患者的姓名、采集日期和时间等信息，这些信息有助于确保样本的准确性和追踪。卫生措施：除戴上手套外，最好在采集样本时戴上口罩，以防止呼吸道等粪便中的微生物沾染。采集完成后，用肥皂和温水彻底清洗双手，将标记好的容器放入塑料袋中，以防止可能的泄漏。细菌检测：取病人新鲜粪便5g(mL)，立即送至临检实验室进行检验。病毒检测：采集粪便 1 份，约 5g（mL）10g（mL），置于无菌粪便采样杯（盒）（不加任何培养基和试剂）若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理 盐水湿润后，插入肛门内 4cm5cm 处（儿童约 2 cm3cm）采集的就诊病人标本为新鲜的或转移至Cary-Blair 运送培养基的粪便或肛拭子。严格遵守操作规程进行标本检验。每个患者采取一式两份样本，一份用于细菌培养、一份用于病毒检测。1.2.2 仪器和试剂 电热恒温培养箱型号（DHP-9272）；粪便标本致病菌检验培养 SBG 增菌液、3%氯化钠碱性蛋白胨水（购自青岛海博公司）；选择性分离平板：沙门显色培养平板、XLD 平板、MAC 平板 弧菌显色平板（购自青岛海博）；沙门氏菌诊断血清来自于（购自宁波天润生物药业有限公司）；志贺氏菌诊断血清（购自宁波天润生物药业有限公司）；致 泻 大 肠 埃 希 氏 菌配套试剂盒（购自嘉兴领宇科技有限公司）和诺如病毒检测试剂盒（购自北京金豪有限公司）生化鉴定试剂盒，以上试剂均在有效期内。1.2.3 标本检测（1）细菌微生物培养试验 按照国家食源性疾病监测工作手册中规定的检测方法进行粪便微生物检验。将粪便样本进行适当的稀释，这是为了将细菌群落的数量控制在适宜的范围内，以便在培养基上形成适当的菌落。根据实验的目的，选择适当的培养基，常用的培养基包括琼脂（用于大肠杆菌等肠道菌的培养），血琼脂（用于检测革兰氏阳性菌），以及选择性培养基等。将稀释后的粪便样本取出一部分，用细菌接种环或移液器等工具，在培养基表面均匀涂布。将接种的培养基置于适当的培养条件下，如 37 摄氏度的恒温箱中进行培养，不同的细菌需要不同的培养条件，因此需要根据实验需要进行相应的设置。培养一定的时间后，观察培养基上是否出现细菌菌落的生长，根据菌落形状、颜色等特征，可以初步判断出不同种类的细菌。如果需要进行进一步鉴定或研究，可以从培养基上分离选取单个菌落，进行纯化培养，以获得纯种菌。（2）病毒检测 按照国家食源性疾病监测工作手册中规定的检测诺如病毒方法开展检验。制备粪便悬液，粪便标本的核酸提取用病毒核酸提取试剂盒，具体过程按试剂盒说明书操作。采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测诺如病毒。1.3 观察指标 粪便微生物的病原微生物检出情况，分析其种类及检出率。1.4 结果统计 统计学处理数据处理方面使用SPSS22.0软件进行分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用2检验；显著性水平0.05，以 P0.05 为差异有统计学意义。2 结果（1）病原微生物检验结果：20202023 年实验室检测主动哨点医院报告临床腹泻粪便标本764份，2020年检测标本份数 258 份；其中细菌阳性检出 16 份，阳性率 6.2%；病毒阳性 36 份，阳性率 13.95%；2021 年检测标本份数 249 份；其中细菌检出 14 份，阳性率5.62%；病毒阳性 10 份，阳性率 4.01%；2022 年检测标本份数257份；其中细菌阳性检出9份，检出率3.50%；病毒阳性 12 份，检出率 4.67%；见表 1；（2）病原菌检出分布结果：2020 年检出 16 份细菌感染的标本（其中沙门氏菌 15 份、志贺氏菌 1 份），对其检出率进行统计分析显示，沙门氏菌和志贺氏菌感染检出率差异有统计学意义（212.642，P0.000），沙门氏菌的检查率明显高于志贺氏菌；2021年检出 14 份细菌感染的标本（其中沙门氏菌 13 份、志贺氏菌 1 份），对其检出率进行统计分析显示，沙门氏菌和志贺氏菌感染检出率差异有统计学意义（210.583，P0.001）；沙门氏菌的检查率明显高于志贺氏菌；2022 年检出 9 份细菌感染的标本（其中沙门氏菌 9 份、志贺氏菌 0 份），对其检出率进行统计分析 中国科技期刊数据库 医药 36 表 1 20202023 年阳性病原微生物检出情况 年份 标本份数 阳性份数 总阳性率 细菌感染份数 细菌阳性率（%）病毒感染 病毒阳性率 2020 258 52 20.15 16 6.20 36 13.95 2021 249 24 9.63 14 5.62 10 4.01 2022 257 21 8.17 9 3.50 12 4.67 合计 764 97 12.69 39 5.10 58 7.59 表 2 20202022 年病原菌检出率情况分析 n（%）年份 n 沙门氏菌 志贺氏菌 2 P 2020 258 15(5.81)1（0.38）12.642 0.000 2021 249 13（5.22）1（0.40）10.583 0.001 2022 257 9（3.50）0（0.00）9.160 0.002 合计 764 37（4.84）2（0.26）显示，沙门氏菌和志贺氏菌感染检出率差异有统计学意义（29.160，P0.002），沙门氏菌的检查率明显高于志贺氏菌。另外，沙门氏菌检出率逐年递减，具体见表 2。（3）20202023 年实验室检测临床腹泻粪便标本764 份，未检出致泻大肠埃希菌和副溶血性弧菌。764份样本不存在混合感染（2 种病原体）。3 讨论（1）腹泻为临床常见的疾病，腹泻的共同表现：次数增多，粪质稀薄，腹痛，呕吐等。临床腹泻一般可根据临床表现和大便性状作出临床诊断，根据大便常规结果可进一步明确诊断5。但是大多数腹泻多由不同病原微生物所致，仅凭临床表现和症状，难以区别，要进行粪便微生物检测对临床腹泻鉴别诊断尤为重要。本地区20202022年哨点医院腹泻患者粪便标本做病原微生物检验结果显示，细菌感染以沙门氏菌为主，与其地区检出情况相似6。在病史方面，患者一般有不洁饮食史，尤其是有进食动物源性食物，如肉类、动物内脏、蛋类、乳类及其制品等的病史，在临床表现方面，患者一般症状会出现在进食后的一到两天，主要表现为突然出现的发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等急性胃肠炎表现。所以我们不得不对沙门氏菌感染加以预防，平时要注意饮食、饮水卫生，不喝生水，从正规渠道购买食物。另外，本地 20202022 年沙门氏菌的检出率下降可能与疫情防控人们出行、就医、用餐行为限制等因素相关，细菌性腹泻感染水平是否下降还有待于进一步证实。与饮食卫生习惯改变有关。（2）本地志贺氏菌感染引起腹泻检出率低，在排除了本地这一时间段引起感染性腹泻志贺氏菌不是主要病原微生物以外，分析志贺氏菌检出率低与潘跃顺等人7报道与试验标本的采集或是培养中没有使用増菌培养基或増菌效果不佳有关；致泻大肠埃希菌是引起腹泻的常见病原菌之一，在排除了标本中没有致泻大肠埃希菌以外，没有检出原因可能存在由于其形态与普通大肠埃希菌相似，传统的培养和血清凝集法检测阳性率偏低有关。副溶血弧菌主要是引起急性胃肠炎的表现，副溶血弧菌常污染海产品及含盐分较高的腌制食品。食用了上述被污染的食品后，患者容易出现急性胃肠炎的症状，造成感染，本地区非沿海地区人们饮食习惯不以海产品为主而且不喜欢生吃海产品有关，与报道陈玉洁等人报道上海市副溶血性弧菌腹泻病例感染现状有不一致性8。（3）诺如病毒肠炎引起腹泻，可通过污染的食物、水源、空气等传播9。本地比较 2020 年2022 年三年的诺如病毒都有检出但检出率后两年相对有所下降，可能与注意手卫生有关。（4）本次监测只选取了乌兰察布市 2 家大的哨点医院监测，初步反映了本地 20202022 年临床腹泻患者的病原微生物检出状况。由于监测腹泻病原体种类和范围有限，以后还需继续努力，更好全面了解本市腹泻患者病原微生物检测情况，为预防控制腹泻发挥积极作用，为临床诊断腹泻提供更好地诊断价值。参考文献 1赵雪蕾,周鹏,安戈,等.郑州市儿童感染性腹泻病原菌监测结果J.预防医学,2022,34(4):389-394.2王书训.慢性腹泻320例的治疗方法及病因分析J.中外妇儿健康,2011,34(7):180.3武晋英,方玉莲,王维,等.天津地区急性腹泻患儿肠道病毒感染临床特征和流行病学分析J.检验医学,2023,38(3):267-271.4张霜.病原微生物检验在诊断儿童细菌性腹泻中的临 床 应 用 价 值 J.实 用 医 技 杂 志,2021,28(8):中国科技期刊数据库 医药 37 1018-1020.5杨峰,张景皓,方毅,等.常规检验及治疗与急性感染 性 腹 泻 病 原 学 诊 断 的 关 系 J.检 验 医学,2018,33(5):379-383.6洪雅宏,江金伦,陈静等.宁波市奉化区 2019 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