06砷盐检查法检验操作规程.doc

GMP质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00601
砷盐检查法检验操作规程

文件名：砷盐检查法检验操作规程
文件编号：ZL/SOP/TZ/00601
制定人：
日期： 年 月 日
文件类型：工作标准
审核人：
日期： 年 月 日
版 次：第二版
批准人：
日期： 年 月 日
印 数：共 2份
生效日期： 年 月 日
颁发部门：GMP办公室
分发至：质量保证部、化验室

1. 目 的：规范砷盐检查法检验操作，保证检验的质量。
2. 适用范围：适于本公司原料、成品检验。
3. 责 任 者：质量保证部经理、化验室主任、化验员。
4. 检验依据：《中国兽药典》2010年版一部附录砷盐检查法。
5. 内 容：
5.1 砷盐检查法适用于药品中微量砷盐（以As计算）的限量检查。
5.2 古蔡氏法
5.2.1 仪器与用具：A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C（外径8.0mm，内径6.0mm），全长约180mm；D为具孔的有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导气管C的内径一致，其下部孔径与导气管C的外径相适应，将导气管C的顶端套入旋塞下部孔内，并使管壁与旋塞的圆孔相吻合，黏合固定；E为中央具有圆孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。
5.2.2 试药与试液：标准砷溶液、碘化钾试液、盐酸、酸性氯化亚锡试液、锌粒、溴化汞试纸、醋酸铅棉花。
5.2.3 试药与试液的配制：
5.2.3.1 标准砷溶液的制备：称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于1μg的As）。
5.2.3.2 碘化钾试液：取碘化钾16.5g，加水使其溶解成100ml，即得。应临用新配。
5.2.3.3 酸性氯化亚锡试液： 取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml，滤过即得。
5.2.3.4 溴化汞试纸： 取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制溴化汞试液中， 1小时后取出，在暗处干燥，即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。
5.2.3.5 锌粒：以能通过1号筛的细粒无砷为宜，如使用锌粒较大时，用量酌情增加，反应时间亦应延长为1小时。
5.2.3.6 醋酸铅棉花： 取脱脂棉1.0g，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液12ml中，湿透后，沥去过多的溶液，并使之疏松，在100℃以下干燥后，贮于磨口玻璃瓶中备用。
5.2.4 检验操作：
5.2.4.1 标准砷斑的制备
5.2.4.1.1 装置的准备：于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60-80mm），再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖E并旋紧，即得。
5.2.4.1.2 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将准备好的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25～40℃水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。
5.2.4.2 检查法
取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将生成砷斑与标准砷斑比较，不得更深。
5.3 第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）
5.3.1 仪器与用具：A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C（一端的外径为8mm，内径为6mm；另一端长180mm，外径4mm，内径1.6mm，尖端内径为1mm）。D为平底玻璃管（长180mm，内径10mm，于5.0ml处有一刻度）。
5.3.2 试药与试液：标准砷溶液、稀盐酸、水、碘化钾试液、酸性氯化亚锡试液、锌粒、氯仿、醋酸铅棉花、二乙基二硫代氨基甲酸银试液。
5.3.3 检验操作
5.3.3.1 标准砷对照液的制备
5.3.3.1.1 装置的准备：于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60～80mm），并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。
5.3.3.1.2 精密量取标准砷溶液5ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A瓶置25～40℃水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。
5.3.32 检查法
取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。必要时，可将所得溶液转移至1cm吸收池中，用适宜的分光光度计或比色计在510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，测定吸收度，与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较，即得。
5.4 注意事项
5.4.1 所用仪器和试液等照本法检查，均不应生成砷斑，或至多生成仅可辨认的斑痕。
5.4.2 制备标准砷斑或标准砷对照液，应与供试品检查同时进行。
5.4.3 本法所用锌粒应无砷，以能通过一号筛的细粒为宜，如使用的锌粒较大时，用量应酌情增加，反应时间亦应延长为1小时。
5.4.4 醋酸铅棉花系取脱脂棉1.0g，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液12ml中，湿透后，挤压除去过多的溶液，并使之疏松，在100℃以下干燥后，贮于玻璃塞瓶中备用。
5.5 记录与计算
5.5.1 记录：必须记录采用的方法、样品取样量、标准砷溶液取用量、使用特殊试剂、试液的名称和用量、实验过程中出现的现象及实验结果等。
5.5.2 计算：
5.5.2.1 标准砷溶液浓度的计算
1mol 的三氧化二砷质量为197.82g含砷（As） 2×74.92g称取三氧化砷0.132 g 溶于1000ml溶液中配成的贮备液，每1 ml 含As量为：

2×74.92×0.132×1000
------------------------ = 0.1 mg
197.8×1000
贮备液定量稀释100倍后所得标准溶液，每1ml含As量为1μg 。
5.5.2.2 砷盐量计算
进行限量检查时，取标准砷溶液2ml制成对照液，与供试品溶液在相同条件下处理比较砷斑或吸收液颜色的深浅，从而确定砷含量是否超过规定。砷盐量可用下式计算：
标准砷溶液体积(ml)×标准砷溶液浓度(g/ml)
砷限量% = ------------------------------------------×100%
供试品量(g)
如取标准砷溶液2ml，标准砷溶液浓度0.000001g/ml，供试品取样1g；
2×0.000001
砷限量% = ------------- ×100% = 0.0002% (百万分之二)
1
5.5.2.3 供试品取样量计算
如已知砷盐量为百万分之一，取用标准砷溶液为2ml，标准砷溶液浓度 0.000001 g/ml,求供试品取样量(g)
2×0.000001
供试品量(g) = ------------------- = 2(g)
0.0001%

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