DB21∕T 2752-2017 几丁寡糖含量的测定 液相色谱法.pdf

ICS 71.040.01 A 43 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 27522017 几丁寡糖含量的测定 液相色谱法 2017 - 02 - 23 发布 2017 - 03 - 23 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 27522017 I 前 言 本标准是依据GB/T 1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草的。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。 本标准由大连市质量技术监督局归口。 本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。 本标准主要起草人：陈玮、赵勇、尹恒。 DB21/T 27522017 1 几丁寡糖含量的测定 液相色谱法 1 范围 本标准规定了用液相色谱法测定几丁寡糖含量的原理、仪器和设备、试剂和材料、测定步骤、结果的计算和重复性。 本标准适用于几丁寡糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 几丁寡糖溶液在波长195 nm处有最大的吸收峰，在一定范围内，峰面积与几丁寡糖的浓度成正比关系。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2 分析天平：感应量为 0.0001 g。 4.3 滤膜：聚四氟乙烯膜，0.2 m。 4.4 恒温干燥箱。 5 试剂和材料 5.1 水：GB/T 6682 规定的一级水。 5.2 乙腈：液相色谱级。 5.3 乙腈溶液：分别量取 700 mL 乙腈（5.2）与 300 mL 水（5.1），混合后所得溶液。 5.4 几丁寡糖标准品：纯度90 %，聚合度为 n（n=2-6），结构式参见附录 A。 5.5 标准溶液：称取 25.0 mg 经 105 干燥 4 h 的几丁寡糖标准品 (5.4)于烧杯中，加入 25.0 mL 乙腈溶液（5.3），振荡使其充分溶解，转移至 50 mL 容量瓶中，用乙腈溶液（5.3）定容至刻度，得到标准溶液。 6 测定步骤 6.1 样品溶液的制备 DB21/T 27522017 2 将样品在105 干燥4 h。称取25.0 mg样品于50 mL烧杯中，加入25.0 mL乙腈溶液（5.3），振荡使其充分溶解，转移至50 mL容量瓶中，用乙腈溶液（5.3）定容至刻度，摇匀。用液相色谱仪测定前，样品溶液用滤膜（4.3）过滤。 注：当样品是颗粒状态时，可将其在研钵中研细成粉末。 6.2 色谱条件 应满足如下条件： a) 流动相：乙腈溶液（5.3）； b) 色谱柱：Amide-80 色谱柱，粒径 5 m，柱长 250 mm，内径 4.6 mm； c) 流速：1.0 mL/min； d) 检测波长：195 nm； e) 进样体积：10 L。 6.3 色谱测定 分别将标准溶液、样品溶液注入液相色谱仪（4.1）进行测定，记录谱峰面积。标准溶液的典型色谱图参见附录B。 7 结果的计算 几丁寡糖的含量按下列公式进行计算： 式中： A样品溶液中几丁寡糖的色谱峰面积； As标准溶液中几丁寡糖标准品的色谱峰面积； m样品的质量，单位为毫克（mg） ； ms标准溶液中几丁寡糖标准品的质量，单位为毫克（mg） ； W样品中几丁寡糖的百分含量，%； 8 重复性 在同一实验室由同一操作人员完成的三个平行测定结果，相对标准偏差不大于5 %；以三次平行测定结果的算术平均值为测定结果。 DB21/T 27522017 3 A A 附 录 A （资料性附录） 几丁寡糖的化学结构式 DB21/T 27522017 4 B B 附 录 B （资料性附录） 标准溶液的典型液相色谱图 _