湖北省武汉市2025-2026学年高三下学期第五次月考（期末）生物试题含解析.doc

湖北省武汉市2025-2026学年高三下学期第五次月考（期末）生物试题
注意事项：
1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号、考场号和座位号填写在试题卷和答题卡上。用2B铅笔将试卷类型（B）填涂在答题卡相应位置上。将条形码粘贴在答题卡右上角"条形码粘贴处"。
2．作答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案。答案不能答在试题卷上。
3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答无效。
4．考生必须保证答题卡的整洁。考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。

一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）
1．关于酶本质、作用和特性的叙述，正确的是（ ）
A．酶作用的强弱可用酶活性表示，即单位时间内底物的消耗量或产物的生成量
B．用二氧化锰和鸡肝匀浆对照，可以验证鸡肝匀浆中过氧化氢酶具有催化作用
C．所有具有生物学活性的酶和高温处理后失活的酶都能与双缩脲试剂反应呈紫色
D．酶不适合保存在最适温度、最适pH条件下，酶在作用前后本身不发生化学变化
2．CCR5是HIV入侵人体T细胞的主要辅助受体之一。有科学家为了使婴儿一出生就具有抵抗艾滋病的能力，通过基因编辑破坏了受精卵中的CCR5基因，该做法引起了民众普遍的担忧。下列各项不属于担忧依据的是（ ）
A．CCR5基因可能还参与了其他生理过程的调控
B．基因编辑技术有可能因编辑对象错误（脱靶）造成不可预知的后果
C．被编辑个体受其他疾病感染的风险可能会提高
D．该技术虽然符合人类伦理道德，但可能存在潜在的安全风险
3．下列有关高等植物细胞结构的说法正确的是
A．线粒体、叶绿体、核糖体中均能发生基因的表达
B．细胞中膜蛋白的形成与内质网无关
C．观察洋葱表皮细胞质壁分离时，主要观察液泡颜色的变化
D．高尔基体参与植物细胞分裂末期细胞壁的形成
4．物质a是一种来自毒蘑菇的真菌霉素，能抑制真核细胞RNA聚合酶Ⅱ、Ⅲ参与的转录过程，但RNA聚合酶Ⅰ以及线粒体叶绿体和原核生物的RNA聚合酶对其均不敏感。下表为真核生物三种RNA聚合酶（化学本质均为蛋白质）的分布、功能及特点，相关分析合理的是（ ）
酶
细胞内定位
参与转录的产物
对物质ɑ的敏感程度
RNA聚合酶Ⅰ
核仁
rRNA
不敏感
RNA聚合酶Ⅱ
核基质
hnRNA
敏感
RNA聚合酶Ⅲ
核基质
tRNA
对ɑ的敏感程度存在物种特异性
注：部分hnRNA是mRNA的前体，核基质是细胞核中除染色质与核仁以外的成分。
A．三种酶的识别位点均位于DNA分子上，三者发挥作用时都能为反应提供能量
B．翻译过程和三种酶直接参与的转录过程中发生的碱基互补配对方式完全相同
C．使用物质ɑ会导致肺炎双球菌细胞内核糖体数量明显减少而影响其生命活动
D．RNA聚合酶I的活性减弱会影响真核细胞内RNA聚合酶I、II的合成
5．离子泵是一种具有ATP水解酶活性的载体蛋白，能利用水解ATP释放的能量跨膜运输离子。下列叙述正确的是
A．动物一氧化碳中毒会降低离子泵跨膜运输离子的速率
B．离子通过离子泵的跨膜运输是顺着浓度梯度进行的
C．离子通过离子泵的跨膜运输属于协助扩散
D．加入蛋白质变性剂会提高离子泵跨膜运输离子的速率
6．下图为某核苷酸链的局部结构图，下列叙述中正确的是

A．图中a或b能构成一个完整的核苷酸
B．各核苷酸之间是通过化学键①连接起来的
C．该链可能是组成T2噬菌体遗传物质的一部分
D．该核苷酸链中五碳糖上连接的磷酸可以是1个或2个
二、综合题：本大题共4小题
7．（9分）图1为某湖泊生态系统的能量金字塔简图，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别代表不同的营养级，M1、M2表示不同的能量形式。图2表示能量流经营养级Ⅱ的变化示意图，其中a～g表示能量的值，a表示营养级Ⅱ摄入的总能量值。请据图回答：

（1）图1中，营养级________________中的生物种类属于次级生产者。M2表示的能量形式为__位于营养级Ⅳ的生物个体数量往往少于营养级Ⅲ，主要原因是________________。
（2）图2中，若甲表示营养级Ⅱ的摄入量，则乙表示________________。由图2推测生态系统能量流动的特点是________________。若营养级Ⅲ的同化量为h，则营养级Ⅱ、Ⅲ之间的能量传递效率为________________。
（3）已知营养级Ⅳ中有一种杂食性生物（X），它的食物中有2/5来自营养级Ⅲ，2/5来自营养级Ⅱ，1/5来自营养级Ⅰ。若生物（X）要增加50g体重，需要消耗植物________________g。
8．（10分）科研人员利用固定化酵母直接发酵甜菜汁生产燃料乙醇，下图1表示相关的工艺流程，图2为不同固定化酵母接种量对发酵的影响。请回答下列问题：

（1）图1的步骤①中，溶化海藻酸钠时要______________，以防止焦糊。步骤②中加入果胶酶的作用是_______________________。
（2）图1步骤③中进行增殖培养的目的是_______________________。
（3）研究表明使用固定化酵母的酒精产量平均值高于游离酵母的对照组，可能的原因是_____________________。
（4）由图2可知，固定化酵母接种量为______________时酒精产量最高。接种量过高，酒精产量反而有所降低的原因是_____________________。
（5）研究表明，固定化酵母更适于甜菜糖液的发酵环境，由此可以通过______________的方法来提高固定化酵母对发酵糖液的耐受性，从而达到提高发酵效率的目的。
9．（10分）A、转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因,由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗,其培育过程如图所示(①至④代表过程,A至C代表结构或细胞)：

（1）图中①过程用到的酶是____,所形成的B叫做______。
（2）②过程常用____处理农杆菌,使之成为_____细胞,利于完成转化过程。
（3）图中③过程需要用到的激素是___________
（4）在分子水平上,可采用______的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。
B、野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究，用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强的杂交系马铃薯。
（1）专家在实验中，需用到的酶主要有__________________和____________________等。
（2）专家在实验中，用于诱导融合使用的化学试剂是____________________。
（3）对于农民，种植杂交系马铃薯除可获得较高的收成外，还有什么优点？要求写出两点）_____________________________________________________________________________________
10．（10分）前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝—百白破（rHB-DTP）四联疫苗，经各项检测均通过rHB-DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原和百日咳杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌的类毒素。请分析回答：
（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在________的作用下合成双链cDNA片段，获得的CNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列________（填“相同”或“不同”）。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过PCR技术大量扩增，此技术的前提是已知________。
（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由：________（写出两点）。
（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请完善此种技术的基本流程：从预期蛋白质功能出发→________→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。

（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的________细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是________。
11．（15分）甜味蛋白Brazzein是从一种西非热带植物的果实中分离得到的一种相对分子质量较小的蛋白质，它含有54个氨基酸，是目前最好的糖类替代品。迄今为止，已己发现Brazzein基因在数种细菌、真菌和高等植物、动物细胞中都能表达。请回答下列问题：
（1）Brazzein基因除了可从原产植物中分离得到外，还可以通过__________的方法获得，此方法在基因比较小，且__________已知的情况下较为适用。
（2）将Brazzein基因导入细菌、真菌和高等植物细胞时都可使用的常用载体是__________，构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，其目的是__________________________________________________，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体中，除了目的基因外，还必须有____________________、复制原点等。
（3）若受体胞是大肠杆菌，可先用Ca2+处理细胞使其______________，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与大肠杆菌混合；若受体是双子叶植物，则常采用的方法是_____________。若受体是哺乳动物，则可将 Brazzein基因与________的启动子等调控组件重组在一起，以便从乳汁中获得大量的 Brazzein蛋白。
参考答案

一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）
1、D
【解析】
酶是活细胞产生的一类具有催化作用的蛋白质或RNA。酶活性受强酸、强碱、高温、重金属盐等多种因素的影响，酶的特点有高效性、专一性和作用条件较温和。研究酶的特性有很多实验，如常用过氧化氢和过氧化氢酶来验证酶的高效性，而常用无机催化剂作为条件对照。双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂，它是由双缩脲试剂A（氢氧化钠）和双缩脲试剂B（硫酸铜溶液）组成，氢氧化钠可以提供碱性的环境，而溶液中的铜离子会与多肽链中的肽键生成紫色的络合物。
【详解】
A、酶作用的强弱可用酶活性表示，即单位酶在单位时间内底物的消耗量或产物的生成量，A错误；
B、用二氧化锰和鸡肝匀浆对照，可以验证鸡肝匀浆中过氧化氢酶的催化具有高效性，B错误；
C、有少数酶是RNA，不管是否失活，都不会与双缩脲试剂反应呈紫色，C错误；
D、酶适合保存在低温条件下，最适温度下长时期保存酶的活性会降低甚至失活，酶在作用前后本身不发生化学变化，D正确。
故选D。
2、D
【解析】
HIV通过识别靶细胞表面的受体进入靶细胞，故可以通过敲除CCR5避免HIV入侵。
【详解】
A、CCR5基因可能还参与了其他生理过程的调控，敲除CCR5基因后其他生理过程会受到影响，A错误；
B、基因编辑技术有可能因编辑对象错误（脱靶）造成不可预知的后果，故会引发民众的担忧，B错误；
C、被编辑个体受其他疾病感染的风险可能会提高，会引发民众的担忧，C错误；
D、该技术不符合人类伦理道德，D正确。
故选D。
3、D
【解析】
基因的表达包括转录和翻译，转录可发生在细胞核、线粒体和叶绿体中，翻译发生在核糖体上。观察紫色洋葱外表皮细胞质壁分离时，可观察液泡的体积大小和液泡的颜色变化。高尔基体在动物细胞中参与分泌物的分泌，在植物细胞中参与细胞壁的形成。
【详解】
线粒体和叶绿体是半自主复制的细胞器，可发生DNA复制、基因的转录和翻译过程，但核糖体只能进行基因表达过程中的翻译过程，A错误；细胞中膜蛋白的形成需要内质网和高尔基体的加工和运输，B错误；观察洋葱表皮细胞质壁分离时，主要观察液泡体积大小的变化，因为并不是所有表皮细胞的液泡都有颜色，C错误；植物细胞有丝分裂末期赤道板的位置形成细胞板，最终延伸成细胞壁，而高尔基体与植物细胞壁的形成有关，D正确。
故选D。
理解半自主复制细胞器的含义是本题的解题关键。膜上蛋白质和分泌蛋白均需要经过内质网、高尔基体的加工和运输。
4、D
【解析】
根据题目信息可知，三种RNA聚合酶发挥作用的场所不同，参与转录的产物有所不同，对物质ɑ的敏感程度不同。
【详解】
A、酶只能降低反应所需的活化能，不能为反应提供能量，A错误；
B、转录过程中发生T-A，A-U，C-G和G-C的碱基配对方式，翻译过程中发生A-U，U-A，C-G和G-C的碱基配对方式，B错误；
C、原核生物的RNA聚合酶对物质ɑ不敏感，故物质ɑ不会导致肺炎双球菌细胞内核糖体数量明显减少，C错误；
D、RNA聚合酶I参与rRNA的形成，故其活性减弱会影响真核细胞内RNA聚合酶I、II的合成，D正确。
故选D。
5、A
【解析】
1、小分子物质跨膜运输的方式和特点：
名　称
运输方向
载体
能量
实　　例
自由扩散
高浓度→低浓度
不需

不需
水，CO2，O2，甘油，苯、酒精等
协助扩散
高浓度→低浓度
需要
不需
红细胞吸收葡萄糖
主动运输
低浓度→高浓度
需要
需要
小肠绒毛上皮细胞吸收氨基酸，葡萄糖，K+，Na+等
2、分析题文：离子通过离子泵的跨膜运输需要载体和消耗能量，属于主动运输。
【详解】
A、动物一氧化碳中毒减少能量的供应，进而会降低离子泵跨膜运输离子的速率，A正确；
B、离子通过离子泵的跨膜运输属于主动运输，是逆着浓度阶梯进行的，B错误；
C、离子通过离子泵的跨膜运输需要载体和消耗能量，属于主动运输，C错误；
D、离子的跨膜运输需要载体蛋白，因此加入蛋白质变性剂会降低离子泵跨膜运输离子的速率，D错误。
故选A。
6、D
【解析】一个完整的核苷酸由一分子磷酸、一分子五碳糖和一分子含氮碱基组成，而且磷酸基团连接在五碳糖的5＇端。图中a是一个完整的核苷酸，而b不是，A项错误；各核苷酸之间是通过化学键——磷酸二酯键③连接起来的，B项错误；T2噬菌体的遗传物质是DNA，DNA含有T而不含有U，图示碱基含有U，因此该链不可能是组成T2噬菌体遗传物质的一部分，C项错误；由图可知，末端五碳糖连接的磷酸是1个，中间的五碳糖连接的磷酸是2个，D项正确。

二、综合题：本大题共4小题
7、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 热能 营养级高、可利用的能量少 营养级Ⅱ的同化量 单向流动、逐级递减 (h/b)×100%或(h/(a-e))×100% 22100
【解析】
根据题意和图示分析可知：图1中，Ⅰ表示生产者，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ表示初级消费者、次级消费者、三级消费者，M1、M2分别代表太阳能和呼吸作用散失的能量。图2中，a表示初级消费者的摄入量，b表示同化量，戊表示呼吸作用散失的能量，c表示用于生长、发育和繁殖的能量，e、f表示分解者利用的能量．
【详解】
（1）次级生产者指异养生物，包括消费者和各种分解者，图1中，营养级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中的生物种类属于次级生产者。在能量金字塔中，处于第一营养级的生物是生产者，M1表示进入该生态系统的能量光能，M2是指在生态系统食物链各营养级散失的能量（热能）。能量在营养级之间只能单向传递，且逐级递减，营养级高、可利用的能量少，因此位于营养级Ⅳ的生物个体数量往往少于营养级Ⅲ。
（2）每一营养级的同化量=摄入量-粪便量，若甲表示图1中营养级Ⅱ所摄入的全部能量，则乙表示Ⅱ同化的能量。由图2推测生态系统能量流动的特点是单向流动、逐级递减。Ⅱ同化的能量为b=a-e，若营养级Ⅲ的同化量为h，则营养级Ⅱ、Ⅲ之间的能量传递效率为（Ⅱ营养级同化量÷Ⅰ营养级同化量）×100%=(h/b)×100%或(h/(a-e))×100%。
（3）若生物（X）要增加50g体重，它的食物中有2/5来自营养级Ⅲ，则需消耗植物为50×2/5÷10%÷10%÷10%=20000g，2/5来自营养级Ⅱ，则需消耗植物为50×2/5÷10%÷10%=2000g，1/5来自营养级Ⅰ，则需消耗植物为50×1/5÷10%=100g，需要消耗植物22100g。
学会分析图形信息，熟悉生态系统的成分及能量的计算是解答本题的关键。
8、小火加热或间断加热 分解果胶，瓦解细胞壁，提高甜菜汁的出汁率和澄清度 增加酵母菌的数量，提高发酵效率 凝胶珠内部容易产生无氧环境，有利于酒精发酵 15% 酵母菌呼吸的中间产物大量用于自身的生长，导致酒精产量降低（酵母菌生长消耗大量的糖分，使得酒精的产量降低） 缓慢提高发酵液糖度
【解析】
据图分析，图1中步骤①表示配置海藻酸钠溶液固定酵母细胞的过程，步骤②表示榨汁、加酶、过滤后获取的甜菜汁的过程，步骤③表示固定的酵母细胞的增殖，步骤④表示固定化酵母细胞反复与发酵糖液混合、分离的过程。图2显示，固定化酵母菌接种量为5%时，酒精的产量最低，残糖量最多；在固定化酵母菌接种量为5%-15%时，酒精含量逐渐升高，残糖量逐渐减少。
【详解】
（1）步骤①中配置海藻酸钠溶液时要注意小火加热或间断加热，直到海藻酸钠溶化为止，以防止海藻酸钠焦糊；步骤②中榨取的甜菜汁含有果胶，因其不溶于水，会影响出汁率，且导致果汁浑浊，因此该步骤使用果胶酶分解果胶，瓦解细胞壁，以提高甜菜汁的出汁率和澄清度。
（2）步骤③是酵母菌快速增殖的过程，可以增加酵母菌的数量，提高发酵效率。
（3）固定化的酵母是与凝胶珠结合，包裹在凝胶珠内，与游离的酵母相比，凝胶珠内部容易产生无氧环境，有利于酒精发酵，所以使用固定化酵母的酒精产量平均值高于游离酵母的对照组。
（4）由图2可知，固定化酵母接种量为15%时对应的酒精含量值达到顶点的最大值，接种量超过15%，酵母菌呼吸的中间产物大量用于自身的生长，导致酒精产量降低。
（5）固定化酵母更适于甜菜糖液的发酵环境，可以通过缓慢提高发酵液糖度提高固定化酵母对发酵糖液的耐受性，从而达到提高发酵效率的目的。
解答本题的关键是掌握固定化酵母细胞的过程和酒精发酵的过程，根据不同的过程的细节和题干要求分析答题，并能够根据曲线图找出最适宜酒精发酵的接种量。
9、DNA连接酶 基因表达载体(重组质粒) CaCl2溶液(或Ca2+) 感受态 生长素和细胞分裂素 抗原—抗体杂交 纤维素酶 果胶酶 聚乙二醇（PEG） 可少施农药；可在盐碱地区种植
【解析】
分析题图：①表示基因表达载体的构建过程；②将目的基因导入受体细胞（农杆菌转化法）；③④表示植物组织培养过程，其中③是脱分化过程、④是再分化过程。图中A是目的基因、B是基因表达载体（由启动子、终止子、目的基因和标记基因等部分构成）、C是愈伤组织。
【详解】
A、（1）图解中A表示具有黏性末端的目的基因，它与质粒（上有切口，表示已被限制酶切割）结合形成重组质粒B的过程中，需用到DNA连接酶连接；形成的B叫做基因表达载体(重组质粒)。
（2）图中② 过程是将重组质粒导入农杆菌，由于受体细胞是细菌，所以常用Ca2+处理细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，称为感受态细胞，以完成转化过程。
（3）③是脱分化形成愈伤组织，需要激素：生长素和细胞分裂素。
（4）在检查转基因草莓果实提取液中有无相应抗原，应用抗原—抗体杂交的方法检测，如出现杂交带，表明已出现相应产物。
B、（1）专家在实验中用到的是植物体细胞杂交技术，需要纤维素酶和果胶酶。
（2）植物细胞融合中诱导融合的化学试剂是聚乙二醇（PEG）。
（3）野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力，所以可少施农药；可在盐碱地区种植。。
本题考查基因工程的原理及技术、植物体细胞杂交等知识，意在考查能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。
10、逆转录酶 不同 化学方法人工合成（人工化学合成） 一段目的基因的核苷酸序列以便合成引物 能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害（答出其中两个即可） 设计预期的蛋白质结构 记忆 短时间内迅速产生大量的抗体和记忆细胞，免疫预防作用更强。
【解析】
1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
2、记忆细胞使得二次免疫反应快而强。
【详解】
（1）由mRNA合成cDNA的过程属于逆转录过程，需要逆转录酶。获得的cDNA片段只包含基因的编码区，没有非编码区，因此与百日咳杆菌中该基因碱基序列不同。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用化学方法人工合成，然后通过PCR技术大量扩增。通过PCR技术大量扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。
（3）改造后的腺病毒具有能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害等特点，故可用做载体。
（4）将白喉杆菌类毒素 20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸属于蛋白质工程的范畴。其基本流程是从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
（5）一定时间内间隔注射该疫苗 3次效果更好，其主要原因是体内产生的记忆细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时，记忆细胞会立即增殖分化，产生浆细胞或者效应T细胞发挥免疫效应。二次免疫的特点是短时间内迅速产生大量的抗体和记忆细胞，免疫预防作用更强。
本题考查基因工程的基本工具和基本步骤、蛋白质工程的步骤，二次免疫过程，要求考生识记基因操作工具的作用、目的基因获取的方法 、蛋白质工程的操作步骤、二次免疫的特点，结合题干分析答题。
11、人工合成 ）核苷酸序列 质粒 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代 启动子、终止子、标记基因 处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（或成为感受态细胞） 农杆菌转化法 乳腺蛋白基因
【解析】
基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】
（1）获取目的基因的方法主要有两种：一是从供体细胞（或基因文库）中获取，另一种是人工合成目的基因。人工合成目的基因的方法适合用于基因比较小、核苷酸序列已知的情况。
（2）常用的基因载体是质粒，构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点等。
（3）若受体细胞是大肠杆菌，可先用Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态；若受体是双子叶植物，则常采用的方法是农杆菌转化法；若受体是哺乳动物，通常将目的基因导入乳腺细胞，可将 Brazzein基因与乳腺蛋白基因启动子调控组件重组在一起，可从取其乳汁中获得所需物质。
基因工程步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定；要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节。