高一生物实验总结.doc

一、显微镜的使用
光学系统：目镜、物镜、反光镜
1.结构
机械系统：镜座、镜柱、镜臂、载物台、压片夹、遮光器、镜筒、粗（细）准焦螺旋。
2.使用方法：
①先在低倍镜下寻找视野：取镜→安放→对光→安放玻片→调焦→观察
②后用高倍镜观察：⑴在低倍镜下找到目标 ⑵移动装片，使目标位于视野中央 ⑶转动转换
器，使用高倍镜 ⑷调节细准焦螺旋，使物象清晰；调节反光镜、通光孔，使视野变亮。
3.注意事项：㈠换上高倍镜后只能旋转细准焦螺旋，不能转动粗准焦螺旋，否则会压碎装片或损坏物镜。
㈡物镜越长，放大倍数越大，距载玻片的距离越近；反之放大倍数越小，距载玻片距离越远。
㈢目镜越长，放大倍数越小，反之放大倍数越大。
㈣放大倍数是指物像的长度或者宽度。
㈤若视野一半亮一半暗，则可能是反光镜的角度不对。
㈥若观察切片标本材料一半清晰，一半模糊不清，则可能是切片薄厚不均。

二、 染色实验
Ⅰ、还原糖的检测和观察
1.原理：糖类中的还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，产生砖红色沉淀。
2.材料：苹果（梨）匀浆、斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/mol的NaOH溶液，乙液：质量浓度
为0.05g/mol的CuSO4溶液）
3.步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（甲、乙两液等量混合均匀后再加入）→水
浴加热（50-65℃）2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）
4.注意事项：
㈠苹果或梨组织液必须临时制备。因为苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将
产生的颜色掩盖。
㈡斐林试剂现用现配。
Ⅱ、脂肪的检测和观察
1.原理：脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）
2.材料：花生种子匀浆（或切片）、苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染液
3.步骤：①制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央
②染色：用毛笔蘸取切片放在载玻片上→滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→染色3min（苏丹
Ⅳ染色1min）→滴体积分数50%的酒精1～2滴洗去浮色→用吸水纸吸去多余的酒精
③制作装片：滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片
④镜检鉴定：显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒
4.注意事项：
㈠干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过
长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。
㈡染色时间不宜过长。
㈢酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，
可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴（装片不宜久放）。
㈣滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
Ⅲ、蛋白质的检测和观察
1.原理：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。
2.材料：新鲜的肝脏组织研磨液（豆浆）、双缩脲试剂（A液：质量浓度为0.1g/mol的NaOH溶液，
B液：质量浓度为0.01g/mol的CuSO4溶液)
3.步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜
色变化(紫色)
4.注意事项：㈠A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。
㈡用蛋清代替豆浆时，蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与
双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。
Ⅳ、淀粉的检测和观察
1.原理：淀粉遇碘变蓝。
2.材料：马铃薯匀浆、碘液。
3.步骤：向试管内注入2ml待测组织样液→向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化（蓝色）。
4.注意事项：碘液不能添加的太多，否则会影响反应的颜色变化。
Ⅴ、观察DNA和RNA在细胞中的分布
1.原理：①甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细
胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。
②盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；盐酸使染色体中的DNA与蛋白质
分离，便于DNA与染色剂的结合
2.材料：人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞。
3.用具：大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、
吸水纸、显微镜
4.试剂：质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，吡罗红甲基绿染色剂（取A液20ml、
B液80ml配成染色剂，使用时现配。A液：取吡罗红甲基绿粉1g，加入100ml蒸馏水中溶
解，放入棕色瓶中备用B液：取乙酸钠（维持细胞原有形态）16.4g，用蒸馏水溶解至1000ml。
取乙酸12ml，用蒸馏水稀释至1000ml。取稀释的乙酸钠溶液30ml和乙酸20ml，加蒸馏水
50ml，配成PH为4.8的溶液）、蒸馏水。
5.步骤：
⑴取口腔上皮细胞制片：
①滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；
②刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
⑵水解：
① 解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中；
② 保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
⑶冲洗涂片：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；
⑷染色：
 ① 吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。
② 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
③ 吸：吸去多余染色剂；盖上盖玻片。
⑸观察
① 低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
② 高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。
6.注意事项：
①取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
②取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞；
③冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；
④用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均
匀受热，以免破裂；
⑤烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。
Ⅵ：用高倍镜观察叶绿体和线粒体
1.原理：
①叶肉细胞中的叶绿体，呈绿色、扁平的椭球形或球形，散布于细胞质中，可以在高倍显微镜下观
察它的形态。
②健那绿染液是将活细胞中线粒体染色的专一染料可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。通过染色，
可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。
2.材料：新鲜的藓类的叶、人的口腔上皮细胞。
3.试剂：新配制的质量分数为1%的健那绿染液（将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温
到30-40摄氏度,使其充分溶解）
4.用具：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签。
5.步骤：
⑴观察叶绿体：
①制作藓类叶片临时装片：在洁净的载玻片中央滴一滴清水。用镊子取一片藓类的小叶，或者
取菠菜叶稍带些叶肉的下表皮，放入水滴中，盖上盖玻片
②观察叶绿体：将制作好的叶片临时装片放在低倍镜下观察，找到叶片细胞后，换用高
倍显微镜，仔细观察叶片细胞内叶绿体的形态和分布情况.
⑵观察线粒体：
①制作人的口腔上皮细胞临时装片：在洁净的载玻片中央滴一滴健那绿染液。用消毒牙
签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签上附有碎屑的一端，放在染液中
涂抹几下，盖上盖玻片。
②观察线粒体：在高倍镜下观察经过染色的人的口腔上皮细胞的临时装片，可以看到蓝
绿色的线粒体，细胞质接近无色。
6.注意事项：
①藓类叶为单层细胞，不需处理，选取菠菜作材料时，选取带少许叶肉细胞的下表皮，
因为下表皮的叶肉细胞时海绵组织，细胞排列疏松，分散易撕取。
②观察线粒体不选取植物细胞的原因是经健那绿染色的线粒体与叶绿体颜色相近，会掩
盖并影响对线粒体的观察。
③临时装片应保持有水状态，以免影响细胞活性。
④取口腔上皮细胞前应漱口，防止杂质对观察物像的干扰。
Ⅶ：观察根尖分身组织细胞的有丝分裂
1.原理：①高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛。
②有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同，可用高倍显微镜根据各个时
期内染色体的变化情况，识别该细胞处于那个时期。
③细胞核内的染色体易被碱性染料（如龙胆紫）染成深色。
2.材料：洋葱（可用葱，蒜代替）、洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片
3.用具：显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，剪子，镊子，滴管。
4.试剂：质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精，质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙
胆紫溶液（将龙胆紫溶解在质量分数2%的醋酸溶液中配制而成）或醋酸洋红液。
5.步骤：

⑴洋葱根尖的培养。
⑵装片的制作：解离→漂洗→染色→制片
① 解离: 药液: 质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1 : 1混合液)。
时间: 3~5min。 目的: 使组织中的细胞相互分离开来。
②漂洗: 用清水漂洗约10min。 目的: 洗去药液,防止解离过度,并有利于染色。
③染色: 用质量浓度为0.01g / mL或0.02g / mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~ 5min
目的：龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液能使染色体着色。
④制片: 将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加
一片载玻片. 然后用拇指轻轻地按压载玻片。 目的: 使细胞分散开来,有利于观察。
⑶洋葱根尖细胞有丝分裂的观察
①先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。
②换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。（注意各时期细胞内染色体形态
和分布的特点）。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

三、 提取和分离实验
Ⅰ：叶绿素的提取和分离
1.原理：①绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以用无水乙醇提取绿叶中的色素。
②绿叶中的色素不只一种，它们都能溶解在层析液中；它们在层析液中的溶解度不同；溶
解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；反之则慢。
2.材料：新鲜的绿叶（菠菜叶）
3.用具：干燥的定性滤纸，试管，棉塞，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药
勺，量筒（10ml），天平。
4.试剂：无水乙醇，层析液（由20份在60~90℃下分馏出来的石油醚、2份乙醇和1份苯混合而成。
93号汽油也可代用），二氧化硅和碳酸钙。
5.步骤：①