1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验六 酶的特异性,生物化学实验之,山东师范大学生命科学学院,【,实验目的,】,学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。,【,实验原理,】,酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。,淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。,Benedict,试剂（含有,Cu,2+,）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的,Cu,2,O,沉淀。,【,器材及
2、试剂,】,（一）器材：,1.,恒温水浴锅,2.,试管及试管架,3.,离心机,4.,移液器（枪）,5.,烧杯、量筒、漏斗等,（二）试剂：,1.2%,蔗糖,2.1%,淀粉（内含,0.3%,的,NaCl,）,3.,唾液淀粉酶溶液,4.,蔗糖酶溶液,5.Benedict,试剂,【,实验步骤,】,（一）淀粉酶的特异性,1.,唾液淀粉酶溶液的制备：,先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管,1,支，,取唾液（无泡沫）约,2ml,，蒸馏水,20,倍稀释，,备用。,2.,取试管,5,支，标号，按下表所列的次序操作：,试剂,试管编号,1,2,3,4,5,1%,淀粉溶液（,ml,）,1.0,1.0,2%,蔗糖溶液（,ml,
3、1.0,1.0,唾液淀粉酶（,ml,）,1.0,1.0,1.0,蒸馏水（,ml,）,1.0,1.0,1.0,3.,摇匀，置,37,恒温水浴保温,10min,，然后每管加入,Benedict,试剂,2ml,，再放沸水浴,5min,。观察各管颜色变化，并解释实验结果。,(,二,),蔗糖酶的特异性,1.,蔗糖酶溶液的制备：,取活性干酵母,1.0g,，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约,10min,，再加蒸馏水至总体积约为,20ml,，过滤或离心，滤液或上清液备用。,2.,取试管,5,支，标号，按下表所列的次序操作：,试剂,试管编号,1,2,3,4,5,1%,淀粉溶液（,ml,）,1.0,
4、1.0,2%,蔗糖溶液（,ml,）,1.0,1.0,蔗糖酶（,ml,）,1.0,1.0,1.0,蒸馏水（,ml,）,1.0,1.0,1.0,3.,摇匀，,置,37,恒温水浴保温,10min,，然后每管加入,Benedict,试剂,2ml,，再放沸水浴,5min,。观察各管颜色变化，并解释实验结果。,【,注意事项,】,唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是,50,300,倍。,【,思考题,】,1,、若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸,1min,，实验结,果会发生什么样的变化？,2,、酶作用的专一性有哪几种？,量程的调节,1.,按照从大体积调为小体积的方法调节。,2.,用拇指和食指旋转取液器上的
5、旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。,注意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。,微量移液器的使用方法,枪头（吸液嘴）的装配,在将枪头（,pipette tips,）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。,移液的方法,1.,吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下,2,3,毫米。,2.,然后慢慢松开按钮回至原点。,3.,接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。,移液器的正确放置,使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。,当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。,维护保养时的注意事项,如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。,
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