微 生 物 染 色.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,微 生 物 染 色,染色的意义,微生物细胞小而透明，在普,通光学显微镜下不易观察。,染色后微生物细胞与背景形,成明显的色差，从而能清楚,的观察到其形态；,用于鉴别,猪链球菌染色照片,染色染料简介,主要有三大类：碱性染料、酸性染料、中,性染料。,碱性染料的离子带正电荷，可与带负电荷,的物质结合。微生物蛋白质常带负电荷，,故碱性染料常用。,常用碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复,红和孔雀绿。,染色染料简介,酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷,的物质结合。,中性染料是碱性染料和酸性染料的结合,物，故又称复合染料。,染色方法,普通染色法：利用一种染料使微生物着色,革兰氏染色：细菌学中的鉴别性染色法,芽孢染色法：区分芽孢和营养体的不同,菌,仪,实验材料,种：大肠杆菌和四联球菌混合液，,杀螟杆菌,染色液：石炭酸复红液，结晶紫液，路哥,尔碘液，芽孢染色液,器：显微镜，载玻片，接种环，二,甲苯，香柏油，擦镜纸，吸水纸，煤气灯,实验步骤,1.,涂片 烧红无菌环，稍,冷后无菌操作取试管中,菌液于洁净的玻片中,央，涂成薄层。如为固,体培养基上的菌种，先,在洁净的玻片中央放一,滴蒸馏水，无菌操作取,少许菌体与水滴混合，,涂成薄层。,干燥,室温中自然干燥，或在火焰高处,烘干，但不能过烫，以手试不烫为宜,固定,手执玻片一端，有菌膜的一面朝,上，于火焰中通过,3,次。冷却后再加染,料。,普通染色法（,1,）,4.,染色 将玻片放平，在其,上加适量（以盖满菌膜为度）,结晶紫染色液（或石炭酸复,红染色液），染色约一分钟。,5.,水洗 染色时间到后，用,水冲去染料只流下的水无色,为止。,6.,干燥 自然干燥或用吸水,纸吸去水分。,普通染色法（,2,）,7.,镜检 用油,镜观察所制标,本片并绘出其,形态图,革兰氏染色（,1,）,初染：加草酸铵结晶紫染,色液，染色，约一分钟后自,来水小心冲洗。,媒染：加路哥尔碘液，约,一分钟水洗,脱色：,95%,乙醇脱色,20,秒水,洗,复染：石炭酸复红染色液,染色,30,秒水洗,革兰氏染色（,2,）,干燥,自然干燥,或用吸水纸吸去,水分。,镜检,用油镜观,察所制标本片并,绘出其形态图。,判断革兰氏染色,反应。,芽孢染色（,1,）,染色 加,5%,孔雀绿水溶液于玻片上，微火加热,至冒气，维持约,5min,，（期间需添加染色液，,火焰要小。）冷却后水洗。用石炭酸复红染,30,秒水洗。,干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。,芽孢染色（,2,）,镜检,用油,镜观察所制,标本片并绘,出其形态图。,注意芽孢和,营养体各自,的颜色,注意事项,1.,涂片的无菌操作；,2.,火焰烘干及固定时的温度控制；,3.,染色时间的掌握；,4.,水洗时水流不能急，不能冲有菌的一面；,5.,吸水时勿擦去菌体；,6.,革兰氏染色特别注意乙醇脱色时间的掌握，,且勿使染色液干涸；,7.,芽孢染色加热要用微火，且要添加染色液。,思考题,1.,芽孢染色加孔雀绿时为什麽要加热？,2.,如何判断视野中的景象是否确系标本？,