专题五DNA的粗提取与鉴定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,5.1 DNA,的粗提取与鉴定,一、基础知识,（一）提取,DNA,的,方法,1.,提取生物大分子的基本思路,选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子,2.,提取,DNA,的基本思路,提取,DNA,，去除其他成分,利用,DNA,与,RNA,、,蛋白质,和,脂质,等,在物理和化学性质方面的差异,DNA,的溶解性,DNA,和,蛋白质等成分,在不同浓度的,NaCl,溶液中溶解度不同,利用这一特点，,选择适当的盐浓度,就能使,DNA,充分溶解，,而使杂质沉淀；,3.DNA,等大分子的理化性质,DNA,不溶于酒精溶液,DNA,对酶、高温和洗涤剂的耐受性,DNA,不溶于酒精溶液，,但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。,将,DNA,与蛋白质进一步分离。,DNA,不溶于酒精溶液,DNA,对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶,水解蛋白质，,对,DNA,没有影响,高 温,大多数蛋白质不能忍受,60,80,而,DNA,在,80,以上才会变性,洗涤剂,溶解细胞膜,，,去除脂质和蛋白质,但对,DNA,没有影响,试剂：,（二）,DNA,的鉴定,条件：,二苯胺,沸水浴条件下，,DNA,遇,二苯胺被染成,蓝色,沸水浴,现象：,（一）,实验材料的选取,（二）,破碎细胞，获取含,DNA,的滤液,（三）,除去滤液中的杂质,(,纯化,),（四）,DNA,的,析出与鉴定,二、实验设计,（一）实验材料的选取,从下列材料中选取,2,3,种,原则：,菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；,鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；,在液体培养基中培养的大肠杆菌,凡是含有,DNA,的生物材料都可以考虑,选用,DNA,含量相对较高的组织,（二）破碎细胞，获取含,DNA,的滤液,1,、动物细胞,2,、植物细胞,容易破碎,需要溶解细胞膜,鸡血细胞溶液（防凝固加柠檬酸钠）,加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液,想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，,水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；,加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出,DNA,加入一定的洗涤剂和食盐,充分的,搅拌和研磨，过滤后收集研磨液,想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？,洗涤剂,能溶解细胞膜，利于,DNA,释放,食 盐,NaCl,，利于,DNA,的溶解于研磨液中,经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的,DNA,释放。若研磨不充分，会使提取的,DNA,量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。,为了纯化提取的,DNA,需要将滤液作进一步处理,讨论：滤液,/,研磨液中可能含有哪些成分？,答：可能含有核蛋白、多糖和,RNA,等杂质,想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？,1.DNA,的溶解性,2.DNA,对,酶,、,高温,和,洗涤剂,的耐受性,（三）除去滤液中的杂质,讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？,方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的,DNA,与蛋白质分开；,方案三：利用,DNA,和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与,DNA,分离,（四）,DNA,的,析出与鉴定,与滤液,体积相等,的,冷却,的,酒精溶液,(,体积分数,95,),，,静置,2,3min,，溶液中会出现白色丝状物,粗提取,DNA,用玻璃棒沿一个方向搅拌，,卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水,1,、,DNA,的析出,2.DNA,的鉴定,向两支试管中分别加入,2mol/L,NaCl,溶液,5ml,其中一支试管中加入,DNA,丝状物,各加入,二苯胺,试剂,4ml,混匀后，置于沸水浴中加热,5min,待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化,观察现象：,溶解丝状物的溶液变为,蓝色,2.,实验中,NaCl,的物质的量浓度为,2 mol,L,和,0.14 mol,L,对,DNA,有何影响,?,1.,用鸡血材料，做,DNA,的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是,(),。,A.,稀释血液、冲洗样品,B.,使血细胞破裂、降低,NaCl,浓度使,DNA,析出,C.,使血细胞破裂、增大,DNA,溶解量,D.,使血细胞破裂、提取含杂质较少的,DNA,答：,B,答：前者是溶解,DNA,，,后者是使,DNA,析出,3.DNA,遇二苯胺,(,沸水浴,),会染成,(),A.,砖红色,B.,橘黄色,C.,紫色,D.,蓝色,4.,提取鸡血中的,DNA,时，为什么要除去血液,中的上清液,?,答：,DNA,的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含,DNA,，,所以要除去上清液,(,含有蛋白质,),。,答：,D,