1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验,2,分离,以尿素为氮源的,微生物,一,.,实验原理,尿素,NH,3,中性 碱性,酚红颜色：,(,酸性,),黄色,红色,(,变色范围,pH6.4-8.2),二,.,实验目的,使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌,(,有脲酶,),通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基,pH,的变化,(,脲酶催化的化学反应,),三,.,实验步骤,.,倒平板,.,制备一定浓度梯度的细菌悬液,g,土壤,ml,无菌水，振荡，为,-2,稀释液，依次制备,-3,、,-4,、,-5,的土壤稀释液。,.,稀释涂布分离法分离细菌,.,制备
2、无菌的固体培养基和尿素固体培养基,P26,.,培养观察,（倒置，,37 24-48h,）,（无菌，,0.1ml,，玻璃刮刀）,配制培养基,尿素培养基,葡萄糖,0.025g,NaCl 0.12g,K,2,HPO4 0.12g,琼脂糖,0.5g,酚红,0.25g,尿素,10ml,LB,培养基,蛋白胨：,0.25g,酵母提取液：,0.12g,NaCl,：,0.25g,琼脂糖,：,0.5g,对照组,选择培养基,实验组,为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？,涂布分离,37倒置培养,按浓度捆成一摞,恒温,37,培养,1,、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基,因为琼脂是未被纯化的混合物，内含
3、一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂,思考题：,2,、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用,土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与,SO,4,2-,等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。,3,、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现。,细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。,4,、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落,表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占有极少数。,5.,本实验分离出来的细菌一定都是以尿素为氮源的细菌吗？,不一定，有些细菌能利用其它微生物的代谢产物,。,
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