发酵染菌及其防治.ppt

Click to,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,发酵染菌及其防治,染菌对发酵的影响,1,发酵异常现象及染菌原因分析,2,杂菌污染的途径和防治,4,杂菌污染的判断与处理,3,发酵染菌及其防治,1、什么叫发酵染菌?,在发酵过程中，生产菌以外的其他微生物侵入了发酵液，从而使发酵过程失去了真正意义上的纯种培养。,菌种培养过程操作不当,培养基灭菌不彻底,发酵设备（如发酵罐、管道）密封不严,空气除菌不净,2、造成发酵染菌的可能途径有哪些？,染菌仍是发酵工业的致命伤。轻者影响,产率、产物提取收得率和产品质量,；严重者造成,生产失败,，浪费大量原材料，造成严重经济损失，而且扰乱,生产秩序,，破坏,生产计划,。遇到连续染菌，特别是又找不到染菌原因，未有防治措施时，往往会影响人们的情绪和生产积极性，造成无法估量的危害。,3、染菌会对发酵工业造成哪些不良影响？,4、在现有科学条件下能否做到彻底不染菌？,据报道，国外抗生素发酵平均染菌率为2%-5%，国内的抗生素发酵、青霉素发酵染菌率2%，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率约为5%，谷氨酸发酵噬菌体感染率1-2%。,目前要做的是要,提高生产技术水平,，强化,生产过程,的管理，把握好各个易染菌的环节，,尽可能防止,发酵染菌的发生；而且一旦发生染菌，要能尽快找出其,污染的原因,，并采取相应的,有效措施,，把发酵染菌造成的,损失,降低到最小。,5、既然染菌不可避免，哪我们应该怎样做？,污染杂菌的不同种类,1,不同阶段染菌,2,不同染菌的原因,3,不同染菌程度,4,染菌对发酵的影响,对整个发酵过程的危害极大。,严重干扰生产菌的生长繁殖。,干扰生产菌的代谢，影响产物的生成。,影响相对较小。,不同生产阶段染菌对发酵的影响,种子培养期染菌,发酵后期染菌,发酵前期染菌,发酵中期染菌,回,将导致染菌范围不断扩大，使生产蒙受重大损失。,使发酵大面积染菌。,一般不具延续性，使单个（批）发酵罐发酵失败。,染菌几率较大。,不同染菌原因对发酵的影响,种子带菌,设备渗漏,空气带菌,培养基或设备,灭菌不彻底,回,染菌程度越严重，即在发酵罐内的,杂菌数量就多,，对发酵的危害也就越大。但当,生产菌,在发酵过程已有大量的繁殖，并已在发酵液中占优势，如果污染,极少量的杂菌,，此时对发酵不会带来太大的影响。,不同染菌程度对发酵的影响,回,发酵异常现象及染菌原因分析,溶解氧的异常变化,1,排出的CO,2,异常变化,2,设备渗漏方面原因分析,3,空气除菌不净方面原因分析,4,染菌原因分析,溶解氧的异常变化,当杂菌是,好气性微生物,时，溶解氧的变化是在较短时间内下降，直至接近于零，且在长时间内不能回升；,当杂菌是,非好气性微生物,，而生产菌由于受污染而抑制生长，使耗氧量减少，溶解氧升高。,回,好气性发酵排出的气体中的,CO,2,含量与糖代谢,有关。对于特定的发酵过程，工艺确定后，排出的气体中的CO,2,含量的变化是有规律的。染菌后，培养基中糖的消耗发生变化，引起排气中CO,2,含量的异常变化，如杂菌污染时，糖耗加快，,CO,2,含量含量增加,，噬菌体污染后，糖耗减慢，,CO,2,含量减少,。因此，可根据CO,2,含量的异常变化判断染菌。,排气的CO,2,异常变化,还可以根据其他的一些异常现象，如,菌体生长不良,、,PH,值的异常变化、发酵过程中,泡沫的异常增多,、,发酵液的颜色,异常变化、,代谢产物含量,的异常下跌、,发酵周期,的异常拖长、发酵液的,粘度异常增加,等判断染菌。,其它异常现象,回,总结发酵染菌的经验教训，,积极采取必要的措施，防止生产过程中再次染菌，,把发酵染菌控制在生产前。,防患于未然,是发酵生产过程中控制染菌污染的最重要措施,。,分析目的,染菌原因分析,从两表中可以看出，由于不同厂家的,生产工艺,、,技术管理水平,好坏不同，而使各种染菌原因的百分率有所不同，其中尤以,设备渗漏和空气带菌,而染菌较为普遍且严重。值得注意的是，不明原因的染菌分别达20.0%和35.13%。这表明，目前分析染菌原因的水平还有待于进一步提高。,杂菌的种类,染菌原因分析,耐热的芽孢杆菌,球菌、无芽孢杆菌等不耐热菌,浅绿色菌落的杂菌霉菌,酵母菌,填表,培养基或设备灭菌不彻底,种子带菌/空气除菌不彻底,设备或冷却盘管的渗漏,无菌室灭菌不彻底或无菌操作不当,糖液灭菌不彻底或糖液放置时间过长,根据染上杂菌的种类可以初步判断染菌原因,回,由于发酵罐需要经受温度的升降变化，使用久了难免会出现,夹层盘管,的,细微腐蚀,而出现渗漏，导致染菌的发生。,渗漏原因,当设备渗漏时，往往每批染菌发生的时间逐渐提前。,染菌特点,设备渗漏方面原因,回,空气过滤系统方面原因,进风口、生产环境、空气过滤器（滤芯的灭菌要彻底，过滤介质要定期检查更换）。,原因分析,空气过滤系统带菌会使发酵罐批批染菌、罐罐染菌，此时就要对空气过滤系统进行无菌样检测。,染菌特点,回,杂菌污染的判断及处理,染菌的检查和判断,杂菌污染的挽救及处理,回,染菌的检查和判断,发酵过程是否染菌应以,无菌试验,的结果为依据进行判断。在发酵生产过程中，如何及早发现杂菌的污染并及时采取措施加以处理，是,避免染菌造成严重经济损失的重要手段,。因此，生产上要求能,准确、快速,的检查出杂菌的污染。目前常用于检查是否染菌的,无菌试验,方法主要有以下四种：,检查判断,目的意义,无菌试验方法,1、显微镜检查法（镜检法）,2、肉汤培养法,3、平板划线培养或斜面培养检查法,4、发酵过程的异常现象观察法,无菌试验时，如果肉汤连续,三次发生变色反应,（由红色变为黄色）或,产生混浊,，或平板培养连续三次发现有异常菌落的出现，即可判断为染菌。,注意,事项,1、无菌试验的肉汤或培养平板应保存并观察至本批（罐）,放罐后12h,，确认为无杂菌后才能弃去。,2、,无菌试验期间应每,6h,观察一次无菌试验样品，以便能及早发现染菌。,回,无菌试验方法,处理：应经灭菌后弃之，并对种子罐、管道等进行仔细检查和彻底灭菌,处理：营养成分消耗不多，应迅速重新灭菌；另处，补充必要的营养成分，重新接种进行发酵。,杂菌污染的挽救及处理,种子培养期染菌,发酵前期染菌,处理：可以加入适当的杀菌剂或抗生素以及正常的发酵液，以抑制杂菌的生长速度；产品的含量若达一定值，只要明确是染菌也可放罐。,处理：空罐加热灭菌后至120以上、30min后，才能使用。也可用甲醛熏蒸或甲醛溶液浸泡12h以上等方法进行处理。,发酵后对设备的处理,发酵中、后期染菌,回,杂菌污染的途径和防治,种子带菌及其防治,空气带菌及其防治,设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治,生产原料灭菌不彻底导致的染菌,操作不当造成染菌及其防治,噬菌体染菌及其防治,原因分析,种子带菌及其防治,种子保存,种子培养基,种子换代,及接种,种子培养,设备,1检查发生污染所用的保藏菌种。,2检查发生污染的种子罐接种所用的三角瓶等器皿。,3检查对三角瓶、棉花塞、培养基等所进行的灭菌操作。,4检查天菌锅的工作情况，校核温度表和压力表。灭菌锅工作时锅内空气务必排尽。,5检查无菌室的无菌状况，特别是接种箱。检查接种箱所用的杀菌熏剂。,6检查操作人员的操作技术。,7,对杂菌或噬菌体进行微生物检验。,防治措施,回,原因,分析,空气带菌及其防治,要杜绝无菌空气带菌，就必须从,空气的净化工艺,和,设备的设计,、,过滤介质的选用和装填,、,过滤介质的灭菌,和,管理,等方面完善空气净化系统。空气净化系统导致染菌，占总染菌的,189,。,压缩机,粗过滤器,贮罐,冷却器,冷却器,旋风分离器,丝网分离器,加热器,过滤器,1油渗入空气：改用无油润的压缩机。,2列管式冷却器穿孔。,3过滤介质松动，空气走短路。,4过滤介质被水润湿。,5,过滤介质老化.,防治,措施,压缩机,粗过滤器,贮罐,冷却器,冷却器,旋风分离器,丝网分离器,加热器,过滤器,回,设备渗漏,设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治,设备渗漏主要是,指发酵罐、补糖罐、冷却盘管、管道阀门等，由于化学腐蚀,（发酵代谢所产生的有机酸等发生腐蚀作用）、,电化学腐蚀,（如氧溶解于水，使金属不断失去电子，加快腐蚀作用）、磨浊摊口金属与原料中的泥沙之间,磨损、加工制作不良等原因形成,微小漏孔,后发生渗漏染菌,。,生产上常把不能彻底灭菌的部位称为“死角”。,实际过程中，“死角”包括了发酵设备或连接管道的某一部位和培养基或其他物料的某一部分等。,死角,由于存在温差（内冷却水温、外灭菌温），温度急剧变化，或发酵液的pH低、化学腐蚀严重等原因。,原因,分析,生产上可采取仔细清洗，检查渗漏，或降低冷却水中CL,-1,的含量等措施加以防治,防治,措施,1、盘管的渗漏染菌及防治,受搅拌与通风的影响，易磨蚀穿孔。,管中的空气流速不一致，靠近空气进口处流速最大，离进口处距离越远流速越小。,原因,分析,采取频繁更换空气分布管或认真洗涤等措施。,防治,措施,2、空气分布管的“死角”染菌及防治,原因,分析,3、发酵罐的渗漏染菌及防治,发生局部化学腐蚀或磨蚀，产生穿孔渗漏。,罐焊接处等的周围容易积集污垢。,发酵罐的制作不良。,发酵罐封头上的各个接口。,发酵罐的修补焊接位置不当。,图5-3 不锈锅衬里破裂形成“死角”图5-4 发酵罐底部培养基的沉积污垢形成,图5 发酵罐支撑件加强板形成“死角”染菌,1、采取罐内壁涂刷防腐涂料、加强清洗并定期铲除污垢等是有效消除染菌的措施。,2、采用不锈钢或复合钢可有效克服此弊端并注意清洗是可以避免染菌的。,防治,措施,原因,分析,4、管路的安装或管路的配置不合理形成“死角”,1、经常将一些管路汇集到一条总的管路上。,2、管路大多采用法兰连接。,但常会发生诸如垫圈大小不配套、法兰不平整、安装未对中、法兰与管子的焊接不好、受热不均匀使法兰翘曲以及密封面不平等现象，从而形成“死角”而染菌。,采用单独的排气、排水和排污管可有效防止染菌的发生。,法兰的加工、焊接和安装要符合灭菌的要求尽可能减少或取消连接法兰等措施防治,措施,图5-5 灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法,图5-6 法兰连接不当造成的“死角”染菌,原因,分析,采用加工精度高、材料好的阀门可减少此类染菌的发生。,防治,措施,5、管件的渗漏形成染菌及防治,目前生产上使用的阀门不能完全满足发酵工程的工艺要求，是造成发酵染菌的主要原因之一。,回,原因,分析,生产原料灭菌不彻底导致的染菌,淀粉质原料,，在升温过快或混合不均匀时容易结块，使,团块中心部位“夹生”，蒸汽不易进入,将杂菌杀死,培养基中诸如麸皮、黄豆饼一类的固形物含量较多，,在投料时溅到罐壁或罐内的各种支架上，容易形成堆积,，这些堆积物在灭菌过程由于传热较慢，一些杂菌也不易被杀灭1、,升温前先通过,搅拌混合均匀,，并加人一定量的淀粉酶进行液化；有大颗粒存在时应先经过筛除去，再行灭菌；,2、,对于麸皮、黄豆饼一类的固形物含量较多的培养基，采用罐外预先配料，再转至发酵罐内进行实罐灭菌较为有效。,防治,措施,1购进原料应干燥，仓贮原料应保持干燥。,2制各培养基时，粉碎原料先用冷水浸润，调浆罐搅拌要充分防止结块。,3粉碎原料颗粒应足够小，大颗粒会影响杀菌效果。,4,假如生产原料被孢子严重污染，制成培养基后，可在30保温数小时，待孢子发芽后再行杀菌。,具体,措施,回,原因,分析,操作不当造成染菌及其防治,1、灭菌时由于操作不合理，未将罐内的空气完全排除，造成压力表显示“假压2、产生泡沫发泡严重时泡沫可上升至罐顶甚至逃逸，以致泡沫顶罐。,3、连续灭菌过程中，培养基灭菌的温度及其停留时间没有符合灭菌的要求。,4、,探头或元件灭菌方法不当。,回,原因,分析,噬菌体污染及其防治,引起发酵生产噬菌体污染的原因，大都是由于生产过程中，,人们不加注意地把大量活菌体随意排放,，这些活菌体栖息于周围环境，同少量与其有关的其它溶原性菌株按触，经过变异和杂交，最终发生使生产菌株溶菌的烈性噬菌体，并在环境中逐渐增殖，随空气流动，污染种子和发酵罐 被噬菌体污染的发酵罐又大量排气，便是更太的发源点。,1认真保藏好生产菌株，确保其不受污染。,2严禁活菌体排放。,3、强化设备管理。,4、加强环境卫生工作。,5、,加强对无菌空气，空间杂菌及噬菌体监测工作。,防治,措施,回,圣诞节快乐！,