血液的采集与保存.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一章 血液一般检验,绪 论,一、临床检验（clinical laboratory technology or science）,又称实验诊断学，就是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料,。,二、临床检验在医学中的作用,1、为准确诊断、及时治疗提供依据,临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的,主要依据。,例：anemia,依据：血中红细胞和血红蛋白量减少,leukemia,依据：血象和骨髓象,肾脏有实质性损伤的依据,尿液中出现蛋白、细胞,管型,问：tumor？,2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据,在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也,会随之发生相应的变化,3、为预防疾病提供资料,如血象和肿瘤细胞学的普查等,三、临床检验的一般方法,1、目视检查,直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无,凝块或寄生虫,2、理学检查,液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降,率、红细胞比积等病理变化,3、化学检查,定性和定量检测标本化学成分的病理变化,4、显微镜检查,观察有型成分的数量和形态,5、自动化仪器检查,电子技术、程序控制的发展,四、学习临床检验的目的和要求,1、理论联系实践,2、操作要求,3、检验结果必须和临床表现结合,4、检验人员的医德,2、静脉采血法,部位：主要是肘静脉。还可以在：手背部手腕部等,幼儿可采用颈外静脉采血。,采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装,置,c.采血步骤及注意事项,两种采血方法的优缺点比较,毛细血管,静脉血,缺点,限制了重复实验和追,加实验，标本量少，,局部炎症可得假结果,，组织液可混入,不同抗凝剂的使用，,改变血液性质，影响,有形成分的形态,优点,价廉、快速、操作简,便，标本可直接测定,标本代表性大，无组,织液影响，适于临床,研究，可重复实验和,追加其他实验,常用血液标本抗凝剂及其使用选择,1、柠檬酸钠（枸橼酸钠）,a.抗凝原理：螯合钙离子,使用方法 配成,109,mmol,/L,的,浓度和血液,1,：,9,106,mmol,/L,的浓度和血液,1,：,4,化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）,c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）,2.草酸钠（乙二酸的钠盐）,a.抗凝原理：草酸钙沉淀,b.使用方法 草酸钠0.1mol/L 和血液1：9,c.适用范围：止血学检验,3.双草酸盐抗凝剂,a.抗凝原理：草酸钙沉淀,使用方法：草酸钾,0.8g,草酸铵,1.2g,（,100ml,）与血液,1,：,10,（,80,C,以下烘干）,适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计数）,不适于血小板计数和白细胞分类计数,4.肝素 （含硫酸基团的粘多糖）,抗凝原理：低浓度时抑制因子,a,、,和,PF,3,之,间的作用，加强抗凝血酶,灭活丝,氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，,还能抑制凝血酶的自我催化及抑制,因子,的作用；高浓度时阻断凝血,酶和纤维蛋白的反应。,b.适用方法：1g/L浓度的肝素钠与血液 1：10,优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易,溶血、能耐高温。,适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白,测定、红细胞比积）和多种生化分析,5.乙二胺四乙酸（EDTA）盐,a.抗凝原理螯合钙离子,b.使用方法：15g/L浓度EDTA 和血液 1：10,适用范围：对血细胞形态影响小,-,血小板计数；,影响血小板聚集和白细胞吞噬功能,-,不易做止血学检验及血小板功能,检验。,物理方法抗凝：,脱纤维蛋白：,将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维,蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血成凝块。适,用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。,血涂片的制备技术,血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、异常,寄生虫检验。,2.血涂片制备步骤：（手工推片法）,将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。,3.血涂片质量评价：均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧,注意血滴大，速度快、角度大-血膜厚,细胞染色技术,染料-生物学染色剂：将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜,下观察结构。,（一）、染料 （天然染料和人工染料）,发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染,组织亲合。,碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核,的染料。如亚甲蓝、天青。,酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧,烷,-,氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合,细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、,嗜酸性颗粒成分等。,3.复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料,（二）、细胞染色原理：一般以它们的物理现象和/或化学,现象为依据,1.物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等化学作用：,a.,染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料,在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的,酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与,带正电荷的碱性物质结合。,b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同,数量的氨基（-NH,2,）和羧基（-COOH），同时还有其,他活性基团。在游离状态时，-NH,2,获得一个H,+,变成带,正电的-NH,3,+,，而-COOH失去一个H,+,变成带负电的-COO,-,。,分别与不同染料结合。,c.周围环境的酸碱度：如环境pHpI（pI 为等电,点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH,pI，则结合碱性染料。,（三）、细胞染色法的类型,1.普通染色法：经物理和/或化学作用的吸附、结合,2.荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜,3.细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等,4.细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分。,细胞免疫化学染色法（应用单克隆抗体技术、酶标记技术）,瑞氏染色法,（一）、染色原理,分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青,B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、,血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下,形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。,（二）、试剂,1Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml,甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定,形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增,加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，,增强染色效果。,磷酸盐缓冲液（,PBS,）：,磷酸二氢钾（无水）,0.3,g,，,磷酸氢二钠（无水）,0.2g,蒸馏水加到,1000ml,。,配好后用磷酸盐溶液校正,pH,，,塞紧瓶口备用。,染色方法：,a.,用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。,b.,加瑞氏染液覆盖血膜，固定,1min,。,c.,滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色,5-10,分钟。,d.,用清水冲洗，待干后镜检。,注意事项：,a.,血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落,b.,染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，,一般染液淡、染色时间长些效果好。,c.,染液不能过少，以防蒸发沉淀。,d.,冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料,沉着。冲洗时间也不能长。,e.,染色过淡，可复染。,f.,染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色,六、姬姆萨染色法,（一）、染色原理：基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。,（二）、试剂 Giemsa 甲醇 纯甘油,（三）、染色方法,1.甲醇固定干燥血膜3-5min,2.将血膜在染液中浸染10-30min,3.流水冲洗,待干后镜检,七、巴氏染色法,是脱落细胞染色法中较好的染色方法。,显微镜细胞计数法,细胞计数是临床检验最常用的技术。,显微镜计数法、血细胞计数仪计数法,计数板,细胞计数注意事项,供计数的标本必须新鲜，各种体液标本做到随采随处理,混匀,加盖玻片的方式,稀释液要过虑，小试管、定量吸管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等误认为细胞,计数误差,1、技术误差（technical errors),使用器材不符合要求,采血部位不当,稀释倍数不准,充液不当,血液发生凝固,固有误差,在显微镜计数法中包括计数域误差（field error)、吸管误差（pipet error)和计数室误差（chamber error)三种,